Estudo da resistência de Plasmodium falciparum à artemisinina e derivados: desenvolvimento e implementação de testes in vitro para avaliação da viabilidade

Abstract

Malária ou paludismo é uma doença parasitária provocada por protozoários do género Plasmodium e transmitida por fêmeas de mosquitos do género Anopheles. Há cinco espécies de Plasmodium capazes provocar malária em humanos (P. falciparum , P. vivax , P. ovale, P. malariae e P. knowlesi), destas espécies as mais prevalentes são P. falciparum e P. vivax, e a mais letal é P. falciparum. Apesar de a malária ser uma doença que se pode prevenir e tratar, esta continua a ter um impacto devastador na saúde mundial. De acordo com o World Malaria Report de 2015, cerca de 3.2 biliões de pessoas encontravam-se em risco de contrair malária. Em 2015, foram estimados 214 milhões de novos casos de malária e cerca de 438 000 mortes, a maioria em crianças com menos de 5 anos na África Subsariana. Tendo em conta a situação atual da malária, já foram delineadas campanhas que têm por objetivo a erradicação desta doença. Os estudos demonstram o aumento da resistência aos antimaláricos mais utilizados, incluindo a artemisinina e seus derivados. A rápida disseminação da resistência aos antipalúdicos tornou prioritária a vigilância da susceptibilidade dos parasitas aos fármacos. É crucial o desenvolvimento de metodologias inovadoras que facilitem uma avaliação rápida, eficaz e rigorosa do efeito dos fármacos e compostos sintéticos ou naturais, no ciclo e metabolismo de Plasmodium, para que possam ser delineadas estratégias que limitem a propagação da resistência e o desenvolvimento de novos compostos e vacinas. Neste trabalho, padronizamos o uso do fluorímetro de microplacas e resazurina, para avaliar in vitro a viabilidade de P. falciparum quando sujeito a um pulso de seis horas de dihidroartemisinina. Este teste de susceptibilidade, de fácil execução, produz resultados quantitativos, rápidos e fiáveis, o que o torna uma alternativa eficaz ao ensaio RSA0-3h, uma vez que consegue ultrapassar a subjetividade e trabalho árduo, inerentes à observação de esfregaços corados com Giemsa, por dois ou mais microscopistas experientes que contabilizam parasitas viáveis.Malaria is a parasitic disease caused by protozoa of the genus Plasmodium and transmitted by mosquito females of genus Anopheles. There are five species of Plasmodium that are capable to causing malaria in humans (P. falciparum , P. vivax , P. ovale, P. malariae e P. knowlesi) , P. falciparum and P. vivax are the most prevalent species and P. falciparum is the most lethal . Although malaria is a disease that can be prevented and treated, at the same time malaria continues to have a devastating impact on world health. According to the World Malaria Report 2015, about 3.2 billion people remain at risk of malaria. In 2015, there were an estimated 214 million new cases of malaria and 438 000 deaths. mostly of children under five years old in sub-Saharan Africa. Given the current situation of malaria, they have been outlined campaigns which are focused on eradication of this disease. Studies have shown increased resistance to commonly used antimalarial drugs, including artemisinin and its derivatives. The fast spread of resistance to antimalarial became the surveillance of susceptibility of parasites to drugs a priority. It is crucial to the develop innovative methodologies which can favour fast, efficient and accurate evaluation of the effect of drugs and synthetic or natural compounds in the cycle and metabolism of Plasmodium, so they can be drawn strategies that limit the spread of resistance and the development of new compounds and vaccines. In this study, we standardized microplate spectrophotometer and resazurin use to assess in vitro viability of P. falciparum when subjected to a pulse of six hours of dihydroartemisinin. This susceptibility test, easy to perform, produce quantitative, fast and reliable results, which makes it an effective alternative to RSA0-3h since it can overcome the subjectivity and hard work inherent in the observation of smears stained with Giemsa by two or more experienced microscopists that account viable parasites