I tre anni di sperimentazione hanno permesso di accertare l'efficacia dell'utilizzo dell'insetto impollinatore Bombus terrestris per distribuire antagonisti naturali di Botrytis cinerea. Le prove sono state condotte su fragola in coltura protetta ed hanno fornito risultati positivi sulla possibilità di attuare una difesa dal marciume dei frutti; distribuendo il fungo antagonista Trichoderma harzianum mediante bombi si è ottenuta, nel 2002, un'efficacia di copertura paragonabile a quella di un prodotto di sintesi

GAMBA, URSULA

PINNA, MASSIMO

SPAGNOLO, SANDRA

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Impiego  di  Bombus  terrestris  (L.)  per  la diffusione di antagonisti naturali di Botrytis cinerea (Pers.) in ambienti protetti coltivati a fragola (1) (1)  Lavoro eseguito con il contributo della Regione Piemonte in collaborazione con la Cooperativa E.R.I.C.A. e presentato al convegno AIPP «La difesa delle colture in agricoltura biologica» svoltosi a Cesena il 23-24 novembre 2004(*)  CRAB Centro di Riferimento per l’Agricoltura Biologica della Provincia di Torino – Via S. Vincenzo, 48 – 10060 Bibiana (TO)Gli  insetti  pronubi  contribuiscono  in misura  importante  al  conseguimen-to  delle  produzioni  agricole;  la  loro azione  impollinatrice  è  fondamentale per alcune coltivazioni come quelle da seme, o per fruttiferi come melo, cilie-gio e mandorlo (Servadei et al. 1972), ma può portare notevoli benefici anche a  specie  con  fecondazione  principal-mente anemofila.L’azione può essere svolta da un gran numero di specie animali tra cui api, vespe, mosche, farfalle, coleotteri, ma anche uccelli ed altri animali superiori (Proctor et al. 1996). Tuttavia,  l’attività  impollinatrice s’identifica  per  lo  più  con  l’attività svolta  dall’ape  domestica  e  da  alcuni imenotteri apoidei selvatici; tra questi, Bombus terrestris occupa una posizione Introduzione RIASSUNTOI tre anni di sperimentazione hanno permesso di accertare l’efficacia dell’uti-lizzo dell’insetto impollinatore Bombus terrestris per distribuire antagonisti naturali di Botrytis cinerea. Le prove sono state condotte su fragola in coltura protetta ed hanno fornito risultati positivi sulla possibilità di attuare una di-fesa dal marciume dei frutti distribuendo il fungo antagonista Trichoderma harzianum mediante bombi ottenendo efficacia di copertura paragonabile a quella di un prodotto sistemico.PAROLE CHIAVEBombus terrestris,  Trichoderma harzianum,  Botrytis cinerea, insetti impolli-natori, fragolaMassimo Pinna(*) – Ursula Gamba(*) – Sandra Spagnolo(*)58 59di particolare rilievo in Europa per la possibilità che offre di allevamento in biofabbriche e di successiva diffusione commerciale. L’impiego di bombi per l’impollinazio-ne  delle  colture  protette,  iniziato  nei primi anni ottanta nel nord Europa, ha conosciuto  un  interesse  crescente  an-che nel bacino del Mediterraneo, dove rappresenta  uno  strumento  prezioso direttamente  collegato  alla  diffusione della lotta integrata e biologica. A distanza di più di venti anni dalle prime esperienze d’impiego si è ormai giunti a superare le 100.000 arnie ven-dute ogni anno in tutto il continente (Maccagnani 2000).Il  trasporto  accidentale  di  patogeni fungini  è  un  fenomeno  possibile  du-rante  la  normale  attività  bottinatrice svolta dagli insetti impollinatori (Shaw 1999) e segnalato in ripetute occasioni da autori di diverse parti del mondo (cfr. Tab. 1).Patogeno Ospite Località RiferimentoBotrytis cinerea (Pers.) Fiori di fragola Danimarca Kovàcs 1968Claviceps purpurea (Fr.) Tul Melata da segale Austria Anon. 1953Monilinia vaccinii corymbosi (Honey)Mirtillo ed altri piccoli frutti USA Batra, L.R. 1983Sclerotinia sclerotiorum (Lib.)     Ravizzone Canada Stelfox et al.1978Ustilago violacea (non identificata) MelanzanaRegno UnitoGriffiths & Roberts 1966Verticillium alboatrum (Reinke et Berth) Erba medica CanadaHuang & Richards 1983Huang & Kokko 1985Huang et al. 1985;1986Tab. 1 -  Esempi di trasporto accidentale di patogeni ad opera di apoidei (di vari generi e specie) (ed altri insetti) durante la normale attività bottinatrice (da Shaw 1999 modificata)60 61La  possibilità  di  impiegare  i  pronubi per il trasporto di microrganismi (fun-ghi, batteri e virus) utili a combattere alcune tra le avversità delle piante col-tivate è  un’idea relativamente recente. Apis mellifera (L.) è stata utilizzata per il trasporto di: Gliocladium roseum per la lotta a Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) su colza (Israel e Boland 1992), Erwinia herbicola e Pseudomonas fluorescens per la lotta biologica ad Erwinia amylovora (Burrill)  Winslow  et  al.  su  pomacee (Johnson et al 1993), Trichoderma spp. per la lotta a B. cinerea  su fragola e lampone  (Peng  et  al  1991,  1992);  B. impatiens  (Cresson)  è  stato  impiegato analogamente per il trasporto di G. ro-seum per la lotta a B. cinerea nella stessa sperimentazione;  infine  A.  mellifera  è stata impiegata per il trasporto di sei isolati di Trichoderma spp. per la lotta a  S. sclerotiorum su girasole (Escande et al.  2002).In Italia, sono stati condotti studi sul-l’utilizzo di A. mellifera per il trasporto di T. harzianum per la lotta alla muffa grigia  della  fragola  (Maccagnani  et  al 1999) e indagini in merito alla quantità di spore che i bombi sono in grado di trasportare  su  fiori  di  pomodoro  con l’impiego di un dispenser appositamen-te studiato (Maccagnani et al. 2001).   Nella fragola, l’impollinazione avviene principalmente per via anemofila e per gravità,  tuttavia  percentuali  notevoli dei fiori di tale specie possono essere impollinati da insetti; l’utilizzo d’inset-ti  impollinatori  può  produrre  inoltre un aumento in peso dei frutti che può variare da un minimo del 18% sino ad un massimo del 26% e, secondo studi recenti, giungere sino al 25-35% in più (Kovach e Finkelstein 2001).L’impiego d’insetti impollinatori sulle colture  protette  di  fragola  è  pratica ormai  affermatasi  in  molte  aziende poiché determina un aumento dell’al-legagione e del peso dei frutti e riduce le deformazioni a carico dei medesimi.B. cinerea è uno degli agenti patogeni più pericolosi per la coltura della fra-gola: il periodo più critico per le infe-zioni è la fioritura anche se la manife-stazione sintomatologica è successiva. Recentemente  è  stato  registrato  dal Ministero della Sanità e messo in com-mercio sotto forma di polvere bagnabi-le un fungo antagonista, T. harzianum, in grado di contenere le infezioni di B. cinerea. La sua efficacia è inferiore a quella dei fungicidi di sintesi, ma potrebbe essere migliorata utilizzando B. terrestris per il trasporto delle spore sui singoli fiori (organo principale d’infezione).Nel  2002  e  nel  2004  è  stata  condotta una sperimentazione per approfondire le conoscenze riguardanti l’impiego di bombi per il trasporto di funghi anta-gonisti di B. cinerea su fragola.60 61Il  disegno  sperimentale  ha  previsto l’impiego di blocchi randomizzati con quattro ripetizioni per tesi, in modo tale da ottenere un totale di 16 parcelle di circa cinque metri lineari cadauna. Le  parcelle  delle  tesi  1,2,3  sono  state isolate con reti anti-insetto per impedire su di esse un’eventuale bottinatura di B. terrestris ed il conseguente trasporto del fungo antagonista.Nella settimana antecedente la fioritura è stata collocata in ogni serra un’arnia di B. terrestris. Materiali e metodiNegli anni 2002-2004 sono stati allestiti campi sperimentali presso le aziende Boetti Giacomo di Monteu Roero (CN) (in entrambi gli anni) e Garro Andrea di Peveragno (CN) solo nel 2002. Sono state  messe  a  disposizione  due  serre con coltura di fragola in atto. Nel 2003 non è stato possibile allestire la  prova  a  causa  delle  avverse  con-dizioni  climatiche.  Nella  Tab.  2  sono indicate le tesi messe a confronto e le dosi di prodotto impiegate. Tesi TrattamentoProdotto commerciale impiegatoDose (g/Hl) di p.a.Modalità di somministrazione1 T. harzianum Tricodex 200 diretta, con motopompa elettrica a zaino2 Ciprodinil + fludioxonil Switch 80 diretta, con motopompa elettrica a zaino3 Testimone – – –4 T. harzianum Tricodex 50 (*) indiretta, con Bombus terrestris come vettore(*) dose complessiva utilizzata nel corso della sperimentazioneTab. 2 - Tesi a confronto, prodotti impiegati e relative dosi62 63Nelle parcelle isolate con reti anti-in-setto della tesi 1 (T. harzianum in forma di polvere bagnabile) e tesi 2 (ciprodi-nil + fludioxonil) è stato eseguito un trattamento in pre e post fioritura.Durante i trattamenti sono stati chiusi i fori d’uscita delle arnie e rimosse le reti di protezione, immediatamente ri-collocate alla fine delle operazioni.All’inizio del periodo di raccolta sono state  rimosse  sia  le  protezioni  che  le arnie e sono stati eseguiti tre conteggi per verificare il numero di frutti colpiti da B. cinerea in ogni parcella. I  dati  sono  stati  sottoposti  ad  analisi statistica e in seguito confrontati con i test delle differenze minime significa-tive (LSD) e di comparazione multipla di Tukey-Kramer.All’apertura dei primi fiori di fragola è stato applicato alle arnie un dispenser per il trasporto del fungo antagonista ad opera dei bombi. Questo dispenser è stato semplicemente ricavato da un contenitore per diapositive, utilizzan-do  la  parte  inferiore  come  supporto ed il coperchio come recipiente per la somministrazione  del  fungo  antago-nista.  Il  dispenser  è  stato  poi  fissato al foro d’uscita dell’arnia per indurre il contatto tra gli insetti ed il prodotto prima dell’azione bottinatrice, lascian-do invece libero il foro di rientro.Nel dispenser si è collocata la quantità di circa 15 grammi di prodotto a base di T. harzianum; nelle settimane succes-sive,  si  è  reintegrata  periodicamente tale dose per un totale di 50 grammi di prodotto impiegati nel corso dell’inte-ra stagione.62 63Risultati anno 2002Nella Tab. 3 sono indicate le percen-tuali  di  frutti  colpiti  da  B.  cinerea  ri-scontrate nel corso del 2002.I dati raccolti evidenziano un’efficacia maggiore nella distribuzione di T. har-zianum da parte di B. terrestris rispetto a quella ottenuta dalla distribuzione con pompa a spalla del fungo antagonista. La  percentuale  di  frutti  colpiti  da  B. cinerea nella tesi bombi + T. harzianum non  si  discosta  da  quella  riscontrata nelle parcelle in cui è stato distribuito il fungicida chimico (Tab. 4).Data rilievoT. harzianum + bombiT. harzianum Switch Testimone08/05/02 Serra 1 0,025 0,095 0,042 0,06914/05/02 0,07 0,165 0,095 0,18608/05/02 Serra 2 0,06 0,137 0,06 0,2014/05/02 0,125 0,24 0,09 0,272Tab. 3 - Percentuali di frutti colpiti da B. cinerea in serra nel 2002Data rilievo P08/05/02 Serra 1 T. harzianum + bombi vs. T. harzianum  P<0,01(**)T. harzianum  + bombi vs. Switch n.s.T. harzianum  + bombi vs. testimone P<0,05(*)Serra 2 T. harzianum  + bombi vs. T. harzianum  n.s.T. harzianum  + bombi vs. Switch n.s.T. harzianum  + bombi vs. testimone P<0,05(*)15/05/02Serra 1 +  Serra 2T. harzianum  + bombi vs. T. harzianum  P<0,05(*) T. harzianum  + bombi vs. Switch n.s.T. harzianum  + bombi vs testimone P<0,05(*)Tab. 4 - Test di Tukey – Kramer64 65Nella Tab. 5 sono indicate le percen-tuali  di  frutti  colpiti  da  B.  cinerea  ri-scontrate nel corso del 2004. Nell’anno  2004  i  dati  raccolti  hanno evidenziato  differenze  minime  signi-ficative  nei  confronti  del  testimone soltanto per le tesi 1 (somministrazio-ne  del  fungo  antagonista  mediante pompa  a  motore)  e  2  (confronto  con antibotritico di sintesi) come indicato nel grafico (Fig. 1); i bombi non sono stati così efficaci come nella sperimen-tazione del 2002. L’andamento stagio-nale  caratterizzato  da  temperature inferiori ai 10°C per periodi prolungati e le piogge persistenti hanno sfavorito la loro attività.Fig. 1 - Percentuali di frutti colpiti da B. cinerea [dati trasformati in arcsen (rad.quad. P)]anno 2004Data rilievoT. harzianum + bombiT. harzianum Switch Test23/04/04 0 0 0 0,0229/04/04 0 0 0 0,1905/05/04 0,2 0,08 0 0,1613/05/04 0,11 0 0 0,1119/05/04 0,03 0 0 0,0827/05/04 0,03 0,03 0,01 009/06/04 0,10 0,07 0,04 0,04Tab. 5 - Percentuali di frutti colpiti da B. cinerea in serra nel 2004Percentuali di frutti colpiti da B. cinerea (dati trasformati)0,00,20,40,60,81,01,21,41,61,82,0Trichoderma+ bombiTrichoderma switch testArcsen(rad.quad.P)**Tesi64 65I  test  statistici  hanno  evidenziato  nel 2002  differenze  significative  tra  l’im-piego  di  T.  harzianum  distribuito  da solo o in abbinamento con B. terrestris come  vettore:  quest’ultima  soluzione ha dato un contenimento di B. cinerea confrontabile con quello ottenuto con l’impiego  del  fungicida  chimico.  Nel 2004 questi risultati brillanti non sono stati confermati anche a causa di limita-zioni climatiche all’attività dei bombi. ConclusioniL’impiego congiunto di microrganismi utili e d’insetti pronubi come loro vet-tori richiede quindi ulteriori approfon-dimenti ma offre interessanti prospet-tive,  considerando  i  risultati  ottenuti nel  2002 e soprattutto le dosi ridotte d’impiego,  inferiori  anche  di  4  volte rispetto alla somministrazione diretta. Fig. 2 - Coperture con reti anti-insetto nel tunnel oggetto della sperimentazioneFig. 3 - Dispenser di T. harzianum ottenuto con                un semplice contenitore per diapositiveFig. 4 - Bombo su fiore di fragola Fig. 5 - Infezione di B. cinerea su fragola immatura66 67Fig. 6 - Nella sequenza un bombo si imbratta di T. harzianum prima di spiccare il volo66 67•  ESCANDE A.R., LAICH F.S., PEDRAZA M.V., 2002. Field testing of honey-bee-dispersed Trichoderma spp. to manage sunflower head rot (Sclerotinia scle-rotiorum). Plant Pathology 51 (3), 346-351.•  ISRAEL M.S., BOLAND G.J., 1992. Influence of formulation on efficacy on honey bees to transmit biological controls for management of sclerotinia stem rot of canola. Can. J. Pl. Pathol, 14: 244.•  JOHNSON K.B., STOCKWELL V.O., MCLAUGHLIN RANDY J., SUGAR D., LOPER JOYCE E., ROBERTS R., 1993. Epiphytic bacteria reduce esta-blishment and population size of honey-bee dispersed Erwinia amylovora in pear blossoms,  Acta Hort. (ISHS) 338: 231-232.•  KOVACH J.,FINKELSTEIN J., 2001. Using Honey Bees to Disseminate Tri-choderma harzianum to Strawberries for Botrytis Control.  www.nysipm.cornell.edu/pubblications/botrytis.html. Ultima visita 10/09/2004.•  MACCAGNANI B., MOCIONI M., GULLINO M.L., LADURNER E., 1999. Ap-plication of Trichoderma harzianum by using Apis mellifera as a vector for the control of grey mould of strawberry: first results. Bullettin OILB/SROP 22(1): 161-164.•  MACCAGNANI B. (2000). Bombus terrestris. In: Gli ausiliari nell’agricoltura sostenibile,  a cura di G. Nicoli, P. Radeghieri, Calderini Edagricole, 343- 377.•  MACCAGNANI B., LADURNER E., CESARI M., MOCIONI M., 2001. Sperimen-tazione di distributori per l’impiego di Bombus terrestris come veicolo di formulati microbiologici. Informatore Fitopatologico – La Difesa delle piante, 51 (4), 2001.•  PENG G., SUTTON J.C. , KEVAN P.G., 1991. Evaluation of honey bees for applying  Gliocladium  roseum  to  strawberry  flowers  to  control  grey  mould caused by Botrytis cinerea. Can. J. Pl. Pathol. 12: 283.•  PENG G., SUTTON J.C. , KEVAN P.G., 1992. Effectiveness of honey bees for applying the biocontrol agent Gliocladium roseum to strawberry flowers to suppress Botrytis cinerea. Can. J. Pl. Pathol. 14: 117-129.•  PROCTOR M., YEO P. AND LACK A., 1996. The Natural History of Pollination. Harper Collins Publishers, London, UK.•  SERVADEI A., ZANGHERI S., MASUTTI L., 1972. Entomologia generale ed applicata CEDAM.•  SHAW D.E., 1999.  Bees and fungi, with special reference to  certain plant pathogens. In: Daniel McAlpine Memorial Lecture 1999.  www.australasianplantpathologysociety.org.au/McAlpine/DM12.htm. Ultima visita 10/09/04.•  Per i lavori citati nella tabella 1, cfr: Shaw D.E. (1999) – Bees and fungi, with special reference to certain plant pathogens Table 1. In: Daniel McAlpine Memo-rial Lecture 1999. www.australasianplantpathologysociety.org.au/McAlpine/DM12.htm.  Ultima visita 10/09/04.BIBLIOGRAFIA68 69

IMPIEGO DI BOMBUS TERRESTRIS (L.) PER LA DIFFUSIONE DI ANTAGONISTI NATURALI DI BOTRYTIS CINEREA (PERS) IN AMBIENTI PROTETTI COLTIVATI A FRAGOLA

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