research

Detektion och kvantifiering av mögel på spannmål med realtids PCR

Abstract

Tillväxt av mögel och jäst är ett problem vid lagring av spannmål ensilage och andra fodermedel. Traditionella metoder för identifiering och kvantifiering av sådana mikrosvampar är tidskrävande och mödosamma. Det finns därför ett behov för att utveckla nya, snabba och pålitliga förfaranden för identifiering och kvantifiering. Vi har utvecklat en molekylär metod som kan används för kvantifiering av mögel och jäst som växer på spannmål eller andra fodermedel. Förfarandet är baserat på direkt isolering av mikroorganismernas DNA från spannmål och kvantifiering av organismspecifika gener med realtids-PCR. Metoden utprovades i ett projekt för odling av mycelväxade svamp (Rhizopus oligosporus) och jäst (Saccharomyces cerevisiae) på korn. En enkel DNA-extraktion var effektiv för mögel, jäst och även mjölksyrabakterier. Koncentrationen av organismspecifika gener (determinerade i realtids PCR) korrelerade med ergosterolhalten (som indikerar svamptillväxt) i R. oligosporus ren kultur och med antal kolonibildande enheter av jäst och mjölksyrabakterier. Detektionen var mycket specifik för de testade organism, och ingen korsdetektion upptäcktes. Förfarandet är snabbt och pålitligt med möjlighetet till analys av 50 prover under två dagar. Metoden kan antagligen användas för detektion och kvantifiering av även andra mögelarter på andra sorts spannmål. Man kan även identifiera specifika gener, t.ex. gener som är involverade i mykotoxinproduktionen

    Similar works