Universidad Autonoma de Yucatan. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
Abstract
En este trabajo se modificó la técnica de salting out para la extracción de DNA en leche de búfalos de agua y se empleó la técnica de PCR para la detección del virus de la Leucosis bovina a partir de DNA en muestras de leches crudas. Para la extracción del DNA de la leche se emplearon dos métodos similares de salting out en los que se realizó la centrifugación de la leche con el uso de buffer de lisis (Tris-HCL, EDTA, NaCl), SDS, Proteinasa K y etanol. Con la única variación de que en el primer protocolo se retiró la primer capa superficial de grasa obtenida de la centrifugación, dando como resultado una concentración de ADN de 20,5µg/µl con una relación 260/280 de 1,77 mientras que en el segundo protocolo no se retiró la capa de grasa y se pudieron obtener concentraciones de ADN mayores con un promedio de 165,78 µg/µl con una relación 260/280 de 1,63, lo que permite clasificar como ADN de pureza aceptable. La obtención del DNA fue posible, demostrando así que el protocolo de extracción empleado permite obtener DNA en condiciones de pureza y cantidad suficiente a partir de pequeños volúmenes de leche. Las muestras fueron analizadas por PCR para evaluar posible presencia de BLV y se encontró que ninguna era positiva para el BLV obteniendo entonces una prevalencia del 0%
