Epstein-Barr virus (EBV) is a gamma-herpesvirus that infects epithelial cells and naïve B
cells. With a prevalence of about 95% in the world population, it is generally acquired during
childhood or adolescence and is responsible for a non-threatening clinical condition called
infectious mononucleosis. However, particularly in the immunosuppressed this virus is
implicated in the pathology of lymphomas and some carcinomas. The presence of EBVencoded
stable intronic sequence RNAs in EBV-positive cell lines was detected for the first
time in 2013 and their role in the EBV’s life cycle is not yet known. Here is reported the
generation of the first virus knock-out virus for sisRNA-1 and the preliminary study of the
virus’ behaviour in B cell infection. Evidence found by monitoring cell proliferation through
microscopy and FACS analysis shows that knocking out the intron that encodes sisRNA-1
causes proliferation impairment by day 8 after B cell infection, but doesn’t impede later
proliferation and outgrowth of LCLs. Viral transcription of LMP1 and Cp vs Wp promoter
usage was analysed as well as viral protein expression of the EBNAs but no significant
differences between WT and sis1KO where found. It remains to be determined if the effects
observed where in fact a consequence of the lack of sisRNA-1 or due to the disruption of
BHRF1 splicing that we hypothesised to be a possible consequence of deleting sisRNA-1.O vírus Epstein-Barr é um gamma-herpesvirus que infecta células epiteliais e células B
“naive”. Com uma prevalência de cerca de 95% na população mundial, é geralmente
adquirido durante a infância ou adolescência, sendo responsável por uma condição clínica,
designada mononucleose infeciosa, que não ameaça a vida. No entanto, particularmente em
indivíduos imunodeprimidos este vírus está implicado no aparecimento de linfomas e de
alguns carcinomas. A presença de “stable intronic sequence RNAs” (sisRNAs) codificados
pelo EBV foi detectada em linhas celulares EBV-positivas pela primeira vez em 2013 e a sua
função no ciclo de vida do vírus tem sido até agora desconhecida. Aqui é reportada a
produção do primeiro vírus knock-out para o sisRNA-1 e o estudo preliminar do seu
comportamento na infecção de células B. Os resultados obtidos a partir da monitorização da
proliferação celular e análises de FACS revelaram que a delecção do intrão codificado pelo
sisRNA-1 causa um atraso na proliferação celular no dia 8-pós infecção de células B, mas não
impede a proliferação mais tardia e a formação de LCLs. A transcrição de genes virais como o
LMP1 e a utilização dos promotores Cp vs Wp, bem como a expressão de proteínas virais
foram analisadas, mas nenhuma diferença significativa foi encontrada entre os vírus WT e o
sis1KO. Permanece por determinar se os efeitos observados são de facto uma consequência
do sisRNA-1 ou da disrupção do “splicing” de BHRF1 que consideramos ser uma
consequência possível da delecção do sisRNA-1
