Los elementos genéticos móviles están muy extendidos en
Pseudomonas syringae
, y a
menudo están asociados con genes de virulencia. Se han identificado diecisiete tipos de
secuencias de inserción y dos “miniature inverted repeat transposable elements”
(elementos transponibles miniatura con repeticiones invertidas) MITEs, en
P. syringae
pv. phaseolicola (Pph) 1448A. Para evaluar si alguno de estos elementos genéticos
móviles se activa dentro del genoma, hemos empleado un vector trampa que contiene el
gen
sacB
, que permite la selección de inserciones que inactiven
sacB
en medios con
sacarosa. La frecuencia de transposición en Pph 1448A osciló entre 2,6 × 10
H5
y 1,1 ×
10
H6
, dependiendo del clon, aunque se mantuvo estable para cada clon después de varias
transferencias consecutivas en medios de cultivo. La frecuencia de transposición fue
similar en bacterias cultivadas en medio rico y mínimo, así como en células recuperadas
de plantas hospedadoras compatibles e incompatibles. Igualmente no se observaron
variaciones en la frecuencia de transposición en las cepas 1448A y 1302A de
P.
syringae
pv. phaseolicola y
P. syringae
pv. syringae B728a en respuesta a un choque
térmico. Estos resultados sugieren que las condiciones de crecimiento y las condiciones
de estrés no influyen en la frecuencia de transposición de elementos móviles en cepas de
P. syringae
. Un 65% de las inserciones atrapadas en
sacB
en
P. syringae
pv.
phaseolicola 1448A contenían una copia completa de IS
801
, mientras que las
inserciones restantes correspondían a las secuencias más pequeñas que cualquiera de los
elementos transponibles identificados en la cepa 1448A, y colectivamente identificados
como secuencias en miniatura. La mayoría de las secuencias miniatura fueron
fragmentos de 229 (8,3%), 360 (0,5%) y 679 nt (16,9%) de la parte derecha de IS
801
.
Estos tres tipos de fragmentos se originan en el extremo 3’ de IS
801
y terminan en un
tetranucleótido con similitud al extremo 5’ del elemento, por lo que probablemente son
el resultado de una transposición terminal (one-ended transposition) de IS
801
. Un
promedio de 0,7% de las inserciones analizadas contenían una copia completa de IS
801
unida a un fragmento de tamaño variable de los genes PSPPH_0008/PSPPH_0017,
demostrando que este elemento puede movilizar ADN adyacente
in vivo
. Igualmente,
hemos demostrado la movilidad de una secuencia de 100 nt que previamente se ha
encontrado insertada en genes de virulencia alterando la especificidad de huésped. Esta
secuencia miniatura, designada MITE
Psy1
representa un promedio del 2,4% del total de
inserciones, y es el primer MITE cuya movilidad se ha demostrado
in vivo
en bacterias.Mobile genetic elements are widespread in
Pseudomonas syringae
, and often associate
with virulence genes. Genome reannotation of the model bean pathogen
P. syringae
pv.
phaseolicola
1448A identified seventeen types of insertion sequences and two miniature
inverted-repeat transposable elements (MITEs) in
P. syringae
pv. phaseolicola (Pph)
1448A. To evaluate the mobilization of these mobile elements, we employed an
entrapment vector containing
sacB
. We estimated that transposition frequency in Pph
1448A oscillated between 2.6 x 10
H5
and 1.1 x 10
H6
, depending on the clone, although it
was stable for each clone after consecutive transfers in culture media. Transposition
frequency was similar for bacteria grown in rich or minimal media, and from cells
recovered from compatible and incompatible plant hosts, indicating that growth
conditions do not influence transposition in strain 1448A. Likewise, no variations were
observed in the frequency of transposition in strains 1448A and 1302A
P. syringae
pv.
phaseolicola and
P. syringae
pv. syringae B728a in response to a thermal shock. These
results suggest that growth conditions and stress conditions do not influence the
frequency of transposition of mobile elements in strains of
P. syringae
. The majority of
the entrapped insertions (65%) contained a full-length IS
801
element, with the
remaining insertions corresponding to sequences smaller than any of the transposable
elements identified in strain 1448A, and collectively identified as miniature sequences.
From these, fragments of 229 (8,3%), 360 (0,5%) and 679Hnt (16,9%) of the right end of
IS
801
ended in a consensus tetranucleotide and likely resulted from oneHended
transposition of IS
801
. An average 0.7% of the insertions analyzed consisted of IS
801
carrying a fragment of variable size from gene PSPPH_0008/PSPPH_0017, showing
that IS
801
can mobilize DNA in vivo. Retrospective analysis of complete plasmids and
genomes of
P. syringae
suggests, however, that most fragments of IS
801
are likely the
result of reorganizations rather than one-ended transpositions, and that this element
might preferentially contribute to genome flexibility by generating homologous regions
of recombination. A further miniature sequence previously found to affect host range
specificity and virulence, designated MITE
Psy1
(100Hnt), represented an average 2.4%
of the total number of insertions, demonstrating for the first time the mobilization of a
MITE in bacteria.Ingeniería AgronómicaNekazaritza Ingeniaritz