Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge, IP
Abstract
A infeção por Clostridium difficile é a principal causa de diarreia infeciosa
associada aos cuidados de saúde. Neste estudo, caracterizámos um conjunto
de estirpes clínicas de Clostridium difficile, provenientes de diversos
hospitais portugueses, com o objetivo de estudar a resistência aos carbapenemos
neste agente patogénico. Um total de 191 estirpes clínicas, isoladas
entre 2012 e 2015 de 15 hospitais em Portugal, foram incluídas no estudo;
a suscetibilidade ao imipenemo foi determinada por um método de gradiente
de difusão em agar. Foram selecionadas estirpes sensíveis e resistentes
ao imipenemo, para estudos fenotípicos adicionais e para contributo da sequenciação
do genoma completo. A resistência ao imipenemo foi detetada
em 24 (12,6%) das estirpes, 22 das quais pertencentes ao ribotipo (RT) 017
(apenas toxina B positivo), todas provenientes do mesmo hospital, durante o
período em estudo, e com perfil de multiresistência. Pela análise dos dados
de sequenciação dos genomas, foram identificadas duas substituições de
aminoácidos (Ala555Thr e Tyr721Ser) nos domínios funcionais de duas enzimas
envolvidas na síntese do peptidoglicano (penicillin-binding proteins -
PBP). Uma PBP adicional foi também identificada nas estirpes RT017. Este
estudo descreve pela primeira vez alterações em PBPs como base genética
provável da resistência ao imipenemo em C. difficile.Clostridium dif ficile is a major cause of healthcare-associated infections.
Here, we characterized C. dif ficile strains isolated in Por tuguese
hospitals, in order to search for impenem resistance and the underlying
genetic determinants. Imipenem susceptibility testing by agar gradient
dif fusion was per formed on 191 C. dif ficile strains, isolated from 15 portuguese
hospitals, between 2012-2015. Some of the imipenem-resistant
and imipenem-susceptible strains were selected for downstream phenotypic
analyses and for whole genome sequencing (WGS). Resistance to
imipenem was detected in 24 (12.6 %) strains, 22 of which were ribotype
(RT) 017 strains, only positive for toxin B, isolated in the same hospital,
and presenting resistance to several other antibiotics. Through analysis
of WGS data, two amino acid changes (Ala555Thr and Tyr721Ser) targeting
the transpeptidase domain of two penicillin-binding proteins (PBP)
were identified. An additional PBP was also identified in this ribotype.
We describe, for the first time, mutations in PBP-encoding genes as the
probable genetic basis for C. dif ficile imipenem resistance.Este trabalho foi financiado pelo INSA (projeto 2016DDI1284) e
pela Fundação para a Ciência e Tecnologia (bolsa de investigação
no âmbito do projeto Pest-C/EQB/LA0006/2011; programa IF
IF/00268/2013/CP1173/CT0006, a MS; bolsa de doutoramento
PD/BD/105738/2014, a ALM).info:eu-repo/semantics/publishedVersio
