Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge, IP
Abstract
A Hemocromatose Hereditária (HH) é uma doença autossómica recessiva
caracterizada pela absorção excessiva de ferro a nível intestinal e sua acumulação
em órgãos vitais, podendo originar cardiomiopatia, cirrose e carcinoma
hepatocelular. O correspondente diagnóstico molecular é obtido
pela associação com genótipos específicos no gene HFE (homozigotia
para p.Cys282Tyr ou heterozigotia composta p.Cys282Tyr/p.His63Asp).
Contudo, nos países do sul da Europa, cerca de um terço dos doentes
com diagnóstico clínico de HH não apresenta os referidos genótipos. Para
identificar a base molecular da HH não-clássica em Portugal usaram-se
metodologias de pesquisa geral de variantes genéticas (SSCP e dHPLC),
Next-Generation Sequencing (NGS) e sequenciação de Sanger, cobrindo
seis genes relacionados com o metabolismo do ferro em 303 doentes.
Identificaram-se 69 variantes diferentes e de vários tipos, por ex. missense,
nonsense, de splicing, que perturbam a transcrição do gene ou a regulação
da tradução do mRNA. Seguidamente, realizaram-se estudos in silico
e in vitro para esclarecer o significado etiológico de algumas das novas variantes.
Concluiu-se que a base molecular desta patologia é bastante heterogénea
e que a NGS é uma ferramenta adequada para efetuar a análise
simultânea dos vários genes num grande número de amostras. Contudo,
o estabelecimento da relevância clínica de algumas variantes requer a realização
de estudos funcionais.Hereditary Hemochromatosis (HH) is an autosomal recessive disorder
characterized by excessive intestinal iron absorption and deposition
in vital organs leading to cardiac failure, cirrhosis and hepatocellular
carcinoma. Molecular diagnosis of common HH is made by the presence
of specific genotypes in HFE gene (p.Cys282Tyr homozygosity or
p.Cys282Tyr/p.His63Asp compound heterozygosity). However, in Southern
European countries up to one third of the patients with a clinical
diagnosis of HH do not have these genotypes. In order to identify the
molecular basis of the non-classical HH in Portugal, we used genetic
screening methods for the detection of unknown mutations (SSCP and
dHPLC), Next-Generation Sequencing (NGS) and/or Sanger sequencing
in six HH-related genes in 303 patients. Sixty-nine different variants
were identified, including missense, nonsense and splicing variants, and
variants that impair gene transcription or mRNA translation regulation.
In silico and in vitro studies were performed to know the likely etiologic
significance of some of the novel variants found. We can conclude that the molecular basis of the non-classical HH in Portuguese population is
largely heterogeneous. NGS revealed to be an appropriate tool for fast
analysis of the HH-related genes in a large number of samples. However,
establishing the clinical relevance of some novel variants requires
further functional studies