FUNKTIONELLE ANALYSEN ZUR PROLIFERATIONSHEMMUNGUND APOPTOSEINDUKTIONZYTOSTATIKARESISTENTER OVARIALKARZINOMZELLENDURCH DEN ZUR TUMORNEKROSEFAKTOR-FAMILIE GEHÖRIGEN LIGANDENTRAIL
Das Ovarialkarzinom hat durch die häufige Entwicklung von Zytostatikaresistenzen eine
besonders schlechte Prognose, so dass der Überwindung dieser Resistenzen eine besonders
große Bedeutung zukommt. Die vorliegenden Untersuchungen dienten zur Analyse der
Proliferationshemmung und Apoptoseinduktion durch den Tumornekrosefaktor-Rezeptorassoziiertem
Apoptose-induzierenden Liganden (TRAIL) an HEY-Zelllinien mit selektiver
Zytostatikaresistenz gegen die beim Ovarialkarzinom eingesetzten Chemotherapeutika.
TRAIL stellt einen der wenigen Stoffe dar, mit denen die gezielte Therapie einer malignen
Erkrankung möglich ist, ohne physiologische Zellverbände zu beeinflussen.
Mit Hilfe verschiedener Proliferationsassays konnte im ersten Teil der Arbeit eine Dosisabhängige
Proliferationshemmung in allen Zelllinien nachgewiesen werden, wobei die Taxanresistenten
Varianten eine partielle TRAIL-Resistenz aufwiesen und die TRAIL-resistente
Kontroll-Zelllinie nicht beeinflusst wurde. Darüber hinaus konnte mittels Färbung der Zellen
mit dem DNA-Farbstoff DAPI bewiesen werden, dass TRAIL schon in geringen
Konzentrationen Apoptose in den Ovarialkarzinomzelllinien auslöst. Die Zellen zeigten hier
ein ähnliches Ansprechen auf TRAIL wie zuvor im Proliferationsassay.
Die Untersuchung der Proteinexpression der Schlüsselfaktoren des TRAIL-Signalweges
zeigte, dass alle vier Todesrezeptoren sowie pro- als auch antiapoptotische Proteine in allen
Zelllinien nachweisbar waren. Eine Ausnahme stellte die Caspase 8 dar, die in der TRAILresistenten
Linie nicht exprimiert wurde.
Ein Zusammenhang zwischen der Expression und dem Ansprechen der Zellen auf eine
TRAIL-Behandlung lies sich für das antiapoptotische Protein XIAP nachweisen. TRAIL
führte in den sensitiven Zelllinien zu einer stark verminderten Expression dieses Proteins,
wohingegen die partiell TRAIL-resistenten Taxan-resistenten und die TRAIL-resistente
Kontrollvariante keine bzw. eine geringe Herabreguation aufwiesen.
Die Behandlung mit 50 ng/ml TRAIL führte in den sensitive Zelllinien zu einer Spaltung der
inaktiven Procaspase 8 in ihre aktive, proapoptotische Form, welche in den Taxan-resistenten
Zelllinien nur unvollständig stattfand.
Im zweiten Teil der Arbeit konnte gezeigt werden, dass es durch die Kombination von TRAIL
mit den bei der Diabetestherapie eingesetzten PPARg-Liganden zu einem verstärkten
apoptotischen Effekt kam. Am ausgeprägtesten war dieser Synergismus durch die
Kombination mit 15d-PGJ2. Endlich ließ sich durch diese Kombinationsbehandlung auch inden partiell TRAIL-resistenten Taxan-resistenten Varianten eine Proliferationshemmung und
Apoptoseinduktion erzielen. Die Proteinexpressionsanalysen von DR5, Caspase 8, cFlip und
XIAP unterstreichen die Ergebnisse der Proliferationsassys.
Untersuchungen mit dem PPAR-Liganden-Inhibitors GW9662 wiesen darauf hin, dass die
Beeinflussung des Zellwachstums durch die PPAR-Liganden nicht über deren
herkömmlichen Signalweg erfolgte.
TRAIL zeigte in den durchgeführten Untersuchungen eine Hemmung der Proliferation und
Induktion der Apoptose in chemoresistenten Ovarialkarzinom-Zelllinien, welche sich durch
die Kombination mit den aus der Diabetestherapie bekannten PPARg-Liganden noch
verstärken ließ und einen positiv synergistischen Effekt auf die partiell TRAIL-resistenten
Taxan-resistenten Zelllinien ausübte.
Die Kombination aus TRAIL und PPAR-Liganden könnte somit eine vielversprechende
Möglichkeit zur Therapie des Ovarialkarzinoms sein