Deckblatt
Einleitung
Material und Methoden
Ergebnisse
Diskussion
Zusammenfassung
Abbildungsverzeichnis
Literaturverzeichnis
Publikationsverzeichnis
Danksagung
Eidesstattliche ErklärungDie molekularen Mechanismen der Tumorangiogenese im humanen
cholangiozellulären Karzinom (CCC) sind bisher unzureichend verstanden. Die
vorgelegte Arbeit beschreibt das CCC als stark vaskularisierten Tumor und
identifiziert durch den Nachweis der Koexpression von VEGF, TGFß-1 und den
jeweiligen Rezeptoren, diese als mögliche Faktoren für die Induktion der
Tumorangiogenese im CCC. Es konnte gezeigt werden, dass TGFß-1 die VEGF
Gentranskription in malignen Gallengangszellen auf prätranslationaler Ebenen
in Abhängigkeit des Transkriptionsfaktors Sp1 stimuliert. Dieser Mechanismus
kann zum angiogenic switch und zur malignen Transformation des CCCs führen.
Es wurde erstmalig gezeigt, dass TGFß-1 außer den klassischen TGFß-1
Zielgenen (p15, p21) den proangiogenen Faktor VEGF, Sp1 abhängig, regulieren
kann. Des weiteren konnte nachgewiesen werden, dass Antagonisierung von
endogenem TGFß-1 durch einen neutralisierenden TGFß-1 Antikörper die VEGF
Expression inhibiert. Hierdurch wurde erstmalig eine autokrine und parakrine
Regulation der TGFß-1 vermittelten VEGF Expression beschrieben.The expression pattern and functional interaction of proangiogenic factors in
human cholangiocellular carcinoma (CCC) have not been fully defined. We
therefore investigated the expression of VEGF and TGFß-1 as well as their
respective receptors in human CCC tumor samples and further analysed their
functional interaction in vitro. Expression of VEGF, TGFß-1 and their
receptors was examined by immunohistochemistry, in situ hybridization,
quantitative competitive (QC) RT-PCR and ELISA. VEGF promoter analysis and
identification of transcription factors involved in promoter regulation was
investigated using transient transfection and electrophoretic mobility shift
assays. We observed strong expression of VEGF in CCC tumor cells and
localisation of VEGF-receptors I and II in endothelial cells; in addition,
coexpression of TGFß-1 and its receptors in tumor cells suggests a possible
functional interaction between both cytokines. In vitro studies confirmed a
paracrine/autocrine stimulation of VEGF by TGFß-1 at a transcriptional level.
Further molecular studies using 5´-deletion and mutational analysis of the
human VEGF promoter revealed that TGFß-1 stimulates VEGF through Sp1-dependent
transcriptional activation. These data suggest that overexpression and
functional interaction of TGFß-1 and VEGF might contribute to the angiogenic
switch and the malignant phenotype in human CCC