Microbiota e difetto immune nella patogenesi della malattia di Crohn: sviluppo di modelli per lo studio di possibili approcci correttivi non immuno-soppressivi
La malattia di Crohn(MC)\ue8 una malattia infiammatoria cronica dell\u2019intestino che pu\uf2 colpire qualsiasi tratto del tubo digerente. Nonostante siano stati effettuati numerosi studi, la patogenesi della MC non \ue8 ancora chiara e non si dispone di trattamenti in grado di guarire stabilmente la malattia. Il sistema immunitario innato sembra giocare un ruolo fondamentale nella patogenesi: \ue8 stato osservato infatti un coinvolgimento di alcuni geni dell\u2019immunit\ue0 innata ed uno squilibrato rapporto tra sistema immune mucosale e microbiota intestinale. Dati clinici e genetici portano a pensare che alla base della patogenesi stiano un difettoso funzionamento dell\u2019immunit\ue0 innata mucosale e una risposta infiammatoria adattativa compensatoria. Lo sviluppo di modelli adeguati a studiare la complessit\ue0 di questa malattia risulta difficile per la molteplicit\ue0 di fattori coinvolti, genetici e ambientali.
L\u2019obiettivo di questa tesi \ue8 stato quello di sviluppare dei modelli che tenessero conto della complessit\ue0 della patologia e che permettessero di evidenziare dei profili tipici di risposta a componenti batteriche.
Il primo approccio ex vivo sviluppato ha analizzato le diverse pathway di attivazione in monociti circolanti, per evidenziare l\u2019eventuale presenza di un difetto di riposta dell\u2019immunit\ue0 innata. Da questo test \ue8 emerso che i pazienti affetti da MC non sembrano presentare un difetto di risposta, bens\uec un\u2019iperattivazione delle pathways innate, testimoniata da un\u2019aumentata produzione monocitaria di TNF\u3b1. Questo stato infiammatorio, riscontrabile sia in condizione basale sia in seguito a stimolazione di alcuni recettori innati, non \ue8 riconducibile n\ue9 al genotipo di NOD2 (analizzate le principali mutazioni associate a malattia) n\ue9 all\u2019attivit\ue0 di malattia dei pazienti presi in analisi, n\ue9 alla presenza in circolo di componenti batteriche (segno di traslocazione batterica intestinale).
Il secondo modello sviluppato ha analizzato direttamente la risposta immunologica mucosale nel tessuto intestinale, pi\uf9 pertinente alla patogenesi della malattia rispetto alle cellule presenti nel circolo periferico. Attraverso una cultura ex vivo di biopsie coliche in presenza o assenza di antibiotici, si \ue8 voluto valutare l\u2019influenza del microbiota sulla secrezione citochinica. Con un\u2019analisi logistica multivariata, \ue8 stato possibile dimostrare l\u2019esistenza di un profilo citochinico (G-CSF, TNF\u3b1, IL4 e IL17) in grado di discriminare la MC dalla rettocolite ulcerosa. E\u2019 stato quindi dimostrato che la MC e la rettocolite ulcerosa presentano differenti profili di risposta citochinica e che la flora batterica associata a mucosa \ue8 in grado di modulare la risposta mucosale.
Con il terzo approccio \ue8 stata valutata la risposta cellulare di una linea epiteliale intestinale a diversi composti di origine microbica, utilizzando un sistema automatizzato che fornisce in tempo reale informazioni sulla crescita, adesione, morfologia e vitalit\ue0 cellulare. Da questa analisi \ue8 emerso che solo il composto purificato di derivazione micobatterica \ue8 in grado di indurre un\u2019alterazione temporanea della cinetica cellulare; questa variazione non \ue8 dovuta alla morte cellulare, ma probabilmente ad una variazione della permeabilit\ue0 del simil-epitelio ricreato in vitro. Ulteriori test sono necessari per far chiarezza sull\u2019effetto dato da questo composto sulla mucosa intestinale, visto il ruolo controverso del Mycobacterium Avium paratubercolis nella patogenesi della MC.
In conclusione, in questi tre anni \ue8 stato possibile sviluppare diversi modelli per evidenziare specifici profili di risposta mucosale tipici della MC, su cui studiare l\u2019effetto di nuove strategie terapeutiche correttive, basate sulla modulazione dell\u2019interazione tra immunit\ue0 mucosale e microbiota intestinale. I risultati ottenuti sono stati oggetto di due pubblicazioni sulla rivista internazionale \u201cWorld Journal of Gastroenterology\u201d
