Multiplex PCR for the detection of sea, seb, sec, sed and see genes of Staphylococcus aureus: Characterization of isolates from food

Abstract

La presencia de Staphylococcus aureus en los alimentos representa un riesgo potencial para la salud pública; sus enterotoxinas son el principal factor de virulencia. La detección de las enterotoxinas de S. aureus puede realizarse por ELISA, aunque sólo es posible detectar el pool de enterotoxinas SEA, SEB, SEC, SED y SEE. Los objetivos del presente trabajo fueron optimizar dos técnicas de PCR múltiple para la detección de los genes sea, seb, sec, sed y see de S. aureus y caracterizar un conjunto de 115 aislamientos de Staphylococcus spp. asociados a intoxicaciones alimentarias provenientes de diferentes provincias de Argentina. La caracterización se realizó por pruebas bioquímicas, ELISA y PCR. Sesenta y ocho aislamientos (59,1%) fueron positivos por ELISA, mientras que 61 (53%) fueron positivos por PCR. De los aislamientos positivos por PCR, 34 (55,7%) portaron el gen sea, 9 (14,8%) el gen seb, 5 (8,1%) el gen see, 4 (6,5%) el gen sec, 6 (9,9%) los genes sea y seb, 2 (3,3%) los genes sea y sec, y 1 (1,7%) los genes sea y sed. Este es el primer estudio de caracterización genotípica de aislamientos de S. aureus asociados con brotes de intoxicación alimentaria registrados en distintas provincias argentinas.The presence of Staphylococcus aureus in food represents a potential risk to public health, being its enterotoxins the major virulence factor. Enterotoxin detection can be determined by ELISA, but only for the pool of enterotoxins SEA, SEB, SEC, SED and SEE. The main aims of this study were to optimize two PCR techniques for detection of S. aureus sea, seb, sec, sed and see, and to characterize Staphylococcus spp. isolates associated with food intoxication. Two PCR techniques were optimized and 115 Staphylococcus spp. isolates from Ciudad Autónoma de Buenos Aires, and Buenos Aires, Córdoba, and Neuquén provinces were characterized. The characterization was performed by biochemical tests, ELISA and PCR. Sixty-eight isolates (59.1%) were positive by ELISA, while 61 (53%) were positive by PCR. Out of the positive PCR isolates, 34 (55.7%) carried the sea gene, 9 (14.8%) the seb gene, 5 (8.1%) the see gene, 4 (6.5%) the sec gene, 6 (9.9%) were positive for sea and seb genes, 2 (3.3%) for sea and sec genes, and 1 (1.7%) for sea and sed genes. This is the first study of genotypic characterization of S. aureus isolates associated with food intoxication from different provinces of Argentina.Fil: Manfredi, E.A.. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; ArgentinaFil: Leotta, Gerardo Anibal. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico CONICET- La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ing. Fernando Noel Dulout". Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Genética Veterinaria; ArgentinaFil: Rivas, M.. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentin