Establishment of cell-based transposon-mediated transgenesis in cattle

Abstract

Transposon-mediated transgenesis is a well-established tool for genome modification in small animal models. However, translation of this active transgenic method to large animals warrants further investigations. Here, the piggyBac (PB) and sleeping beauty (SB) transposon systems were assessed for stable gene transfer into the cattle genome. Bovine fibroblasts were transfected either with a helper-independent PB system or a binary SB system. Both transposons were highly active in bovine cells increasing the efficiency of DNA integration up to 88 times over basal nonfacilitated integrations in a colony formation assay. SB transposase catalyzed multiplex transgene integrations in fibroblast cells transfected with the helper vector and two donor vectors carrying different transgenes (fluorophore and neomycin resistance). Stably transfected fibroblasts were used for SCNT and on in vitro embryo culture, morphologically normal blastocysts that expressed the fluorophore were obtained with both transposon systems. The data indicate that transpositionis a feasible approach for genetic engineering in the cattle genome.Fil: Alessio, Ana Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Biología Molecular; ArgentinaFil: Fili, Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Biología Molecular; ArgentinaFil: Garrels, Wiebke. Institut für Nutztiergenetik; Alemania. Gottfried Wilhelm Leibniz Universität Hannover; AlemaniaFil: Forcato, Diego Oscar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Biología Molecular; ArgentinaFil: Olmos Nicotra, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Biología Molecular; ArgentinaFil: Liaudat, Ana Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Biología Molecular; ArgentinaFil: Bevacqua, Romina Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; ArgentinaFil: Savy, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; ArgentinaFil: Hiriart, María Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; ArgentinaFil: Talluri, Thirumala R.. Institut für Nutztiergenetik; AlemaniaFil: Owens, Jesse B.. University of Hawaii at Manoa; Estados UnidosFil: Ivics, Zoltán. Paul-Ehrlich-Institute; AlemaniaFil: Salamone, Daniel Felipe. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; ArgentinaFil: Moisyadi, Stefan. University of Hawaii at Manoa; Estados UnidosFil: Kues, Wilfried A.. Institut für Nutztiergenetik; AlemaniaFil: Bosch, Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Biología Molecular; Argentin