Tese de doutoramento, Farmácia (Bromatologia), Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2019Vários estudos têm mostrado que os processos oxidativos e inflamatórios estão fortemente implicados na etiologia das doenças crónicas. A ingestão de frutos e produtos hortícolas, fontes de vitaminas e compostos fenólicos (CF) com ações antioxidantes e outras, podem ter um papel primordial na proteção da saúde e prevenção da doença. O dióspiro (Diospyros kaki L.) é um fruto rico em CF especialmente proantocianidinas. O objetivo deste trabalho é caracterizar quimicamente o extrato de dióspiro, em especial a sua composição fenólica, averiguar as suas atividades antioxidante, antiinflamatória e antiproliferativa e ainda preparar uma formulação farmacêutica oral deste extrato. A caracterização química do extrato por HPLC-DAD-MS/MS mostrou a sua riqueza em glucose e frutose, L-triptofano e ácidos málico e cítrico. Foram ainda identificados ácidos fenólicos benzóicos e derivados do ácido gálhico e do ácido vanílico bem como procianidinas e flavanóis, derivados glicosilados de flavonas e derivado de flavonol. A atividade antioxidante do extrato avaliada por ensaios de ORAC e HORAC é menor que a de alguns frutos vermelhos mas superiores à de maçãs e morangos. Os ensaios de CAA e burst oxidativo dos neutrófilos mostraram atividade antioxidante superior à das laranjas, peras ou maçãs. A dose oral de extrato de 15mg EAG/Kg mostrou atividade anti-inflamatória em modelo animal de inflamação aguda (edema da pata induzido pela carragenina) e nos modelos animais de inflamação crónica de artrite reumatóide e de colite ulcerosa. O extrato fenólico de dióspiro reduziu a invasão e proliferação de células de adenocarcinoma do cólon HT-29 e inibiu ligeiramente as atividades de MMPs com efeito dependente da dose. Os fitossomas com extrato, de dimensão inferior a 300nm, conseguem encapsular 97,4% do total de CF e são monodispersos e com potencial zeta negativo e apresentam maior atividade antioxidante durante 6 meses sob condições de armazenamento de T e RH estabelecidas do que o extrato livre. Assim, o extrato fenólico de dióspiro mostrou propriedades antioxidantes, antiinflamatórias e efeito anti-proliferativo nas células de cancro de cólon. A incorporação em fitossomas é uma alternativa para produção de suplemento alimentar.Several studies have shown that oxidative and inflammatory processes are strongly implicated in the etiology of chronic diseases. Ingestion of fruits and vegetables, sources of vitamins and phenolic compounds (PC) with antioxidant and other actions, may play a primary role in protecting health and preventing disease. The persimmon (Diospyros kaki L.) is a fruit rich in PC, especially proanthocyanidins. The aim of this work is to chemically characterize the persimmon extract, in particular its phenolic composition, ascertain its antioxidant, anti-inflammatory and antiproliferative activities and to prepare an oral pharmaceutical formulation of this extract. The chemical characterization of the extract by HPLC-DAD MS/MS showed its richness in glucose and fructose, L-tryptophan and malic and citric acids. Also identified were benzoic phenolic acids and derivatives of gallic acid and vanillic acid as well as procyanidins and flavanols, glycosylated derivatives of flavones and flavonol derivative. The antioxidant activity of the extract evaluated by ORAC and HORAC assays is lower than that of some red fruits but higher than that of apples and strawberries. The CAA and oxidative burst assays of neutrophils showed antioxidant activity superior to that of oranges, pears or apples. The oral dose of 15mg GAE/kg extract showed anti-inflammatory activity in an animal model of acute inflammation (carrageenan-induced paw edema) and in animal models of chronic inflammation of rheumatoid arthritis and ulcerative colitis. The phenolic persimmon extract reduced the invasion and proliferation of HT29 colon adenocarcinoma cells and slightly inhibited MMPs activities with dosedependent effect. Phytosomes with a size smaller than 300nm can encapsulate 97.4% of total PC and are monodisperse and with negative zeta potential and present higher antioxidant activity for 6 months under established T and RH storage conditions than the free extract. Thus, the persimmon phenolic extract showed antioxidant, anti inflammatory and anti-proliferative effect in colon cancer cells. The incorporation in phytosomes is an alternative for food supplement production.Universidade de Lisboa, REITORIA/BD/FF01/201
