Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, 2020, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia.O fígado é o principal órgão responsável pelo metabolismo e excreção de compostos endógenos e exógenos, sendo o órgão mais exposto a compostos tóxicos. A colestase induzida por fármacos é causada pela acumulação tóxica de ácidos biliares nos hepatócitos, podendo a sua manifestação ter um início retardado. A colestase é uma patologia onde a secreção da bílis para o duodeno está reduzida, quer por reduzida funcionalidade dos hepatócitos, quer por obstrução da via secretória da bílis.
O principal objetivo desta investigação era o estudo dos efeitos da ciclosporina A a longo termo em culturas de esferóides de hepatócitos primários humanos.
Foi efetuado um estudo de dose-resposta durante 28 dias, onde as células eram expostas a diversas concentrações de fármaco. A viabilidade celular era medida pela quantificação do conteúdo total de ATP. Foi observado que a ciclosporina A era tóxica de forma dependente da concentração e tempo.
Para além disso, foi estudado os efeitos sinérgicos entre a ciclosporina A e os ácidos biliares. Os esferóides eram expostos a ciclosporina A na presença e na ausência de ácidos biliares durante 28 dias. Os resultados sugeriram que os esferóides ficavam sensibilizados pela ciclosporina A na presença de ácidos biliares, confirmando o seu sinergismo.
O índice colestático foi calculado para determinar que concentrações de ciclosporina A tinham o potencial de causar colestase. O índice colestático correspondia ao rácio entre o conteúdo de ATP dos hepatócitos na presença de ácidos biliares e o conteúdo de ATP dos hepatócitos na ausência de ácidos biliares. Valores inferiores ou iguais a 0.8 indicam que o composto tem o potencial de causar colestase. Os resultados demonstraram valores de índice colestático inferiores a 0.8, quando os esferóides estavam expostos a ciclosporina A a 5 μM, após 14 dias de exposição. De acordo com os resultados, a ciclosporina A foi considerada como exibindo potencial para induzir colestase.
Mais estudos podem ser realizados nesta área, de forma a descobrir por quais mecanismos a ciclosporina A induz colestase, dado que estes ainda não são totalmente compreendidos. Ensaios de RT-qPCR e Western Blot podem ser executados para estudar a expressão génica e proteica, respetivamente.The liver is the major organ responsible for the metabolism and excretion of endogenous and exogenous compounds, being more exposed to toxic compounds than any organ. Drug-induced cholestasis is attributed to the toxic accumulation of bile acids inside the hepatocytes and its manifestation can be delayed in onset. Cholestasis is a pathology where bile secretion to duodenum is reduced, whether by reduced functionality of the hepatocytes or obstruction of the excretory pathway of bile.
The main objective of this research was to study the long-term effects of cyclosporine A in primary human hepatocytes spheroid cultures.
A dose-response assay was conducted for 28 days, where the cells were exposed to several drug concentrations. Cell viability was measured by quantification of the total ATP content. It was assessed that cyclosporine A was toxic in a dose and time dependent manner.
Furthermore, it was studied the synergistic effects between cyclosporine A and bile acids. Spheroids were exposed to cyclosporine A in the presence and in the absence of bile acids for 28 days. Findings suggested that spheroids were sensitized to cyclosporine A in the presence of bile acids, therefore confirming their synergism.
Cholestatic index was calculated to determine which cyclosporine A concentrations had the potential to cause cholestasis. Cholestatic index was the ratio between the ATP content of the hepatocytes in the presence of bile acids and the ATP content of the hepatocytes in the absence of bile acids. Values lower than or equal to 0.8 indicated that the compound had the potential to cause cholestasis. Results showed cholestatic index values lower than 0.8, when spheroids were exposed to 5 μM cyclosporine A after 14 days of drug exposure. According to the results, cyclosporine A was suggested to demonstrate potential to develop cholestasis.
More studies should be done in this area to discover by which mechanisms cyclosporine A induces cholestasis, since it is not yet fully understood. This can be achieved by performing RT-qPCR and Western Blot assays to study gene and protein expression, respectively.Com o patrocínio da Vrije Universiteit Brussel
