Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, 2020, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia.A falta de saneamento básico, condições de higiene, ou acesso a água potável são problemas a nível mundial com consequências nefastas para a saúde pública, devido à ingestão e utilização de água contaminada com microrganismos. No âmbito dos objetivos para o desenvolvimento sustentável para 2030 torna-se essencial encontrar soluções para contornar estes problemas de saúde pública, sendo importante a aplicação de métodos mais eficazes na deteção de microrganismos na água. Consequentemente, será possível atuar mais rapidamente no tratamento da água e prevenir surtos de doenças como é o caso da diarreia causada pela ingestão de água contaminada com E.coli.
Com este objetivo, são discutidos os fatores e as técnicas que contribuem para a melhoria da qualidade da água, bem como a suas vantagens e limitações. Entre elas constam a cloração e a sua monitorização em conjunto com a análise microbiológica da água por métodos de cultura e deteção rápida. Atualmente as normas estabelecem os métodos baseados em cultura como o método de referência para a análise microbiológica da água. No entanto estes métodos apresentam níveis de rapidez insatisfatórios na obtenção de resultados e consequentemente na eficácia de prevenção de surtos. Neste âmbito, torna-se necessário a implementação de técnicas com resultados mais rápidos e fiáveis como é o caso da reação de polimerização em cadeia quantitativa (qPCR). Esta revisão fornece uma descrição atualizada dos princípios gerais, vantagens e limitações da qPCR assim como os parâmetros de validação da mesma. Este método demonstrou ser uma técnica muito eficaz, com níveis de sensibilidade e precisão elevados que ao identificar e quantificar simultaneamente o organismo alvo consegue obter resultados rápidos e fiáveis de modo a tomar medidas preventivas e corretivas. Por esta razão é proposta a adoção desta técnica como método de referência para a monotorização microbiológica da água. Existem diferentes variantes da técnica de qPCR como a reação de polimerização em cadeia multiplex (multiplex-PCR), nested PCR e o PCR digital (dPCR) que permitem adaptar-se às diferentes necessidades de deteção de microrganismos. No entanto, é necessário padronizar os protocolos qPCR para obter concordância relativamente aos procedimentos a adotar nos diferentes laboratórios, sendo necessário a validação dos métodos adotados.The lack of basic sanitation services, hygiene conditions, or access to drinking water is a worldwide problem that threatens public health due to the consumption of contaminated water by microorganisms. In the context of the sustainable development goals for 2030, it is essential to find solutions to overcome these public health problems and to apply more effective methods for detecting microorganisms in the water to prevent outbreaks of diseases such as diarrhoea due to intake of contaminated water with E.coli.
Based on this goal, the factors and techniques to the improvement of water quality, as well as its advantages and limitations are discussed. These include chlorination and monitoring together with microbiological analysis of the water using culture and rapid detection methods. Currently, the culture-based methods were adopted as reference methods for microbiological analysis of water. However, these methods show unsatisfactory levels of speed in achieving results and, consequently, in the effectiveness of preventing outbreaks. Therefore, it is necessary to implement techniques with faster and more reliable results such as the quantitative polymerase chain reaction (qPCR). This review provides an up-to-date description of the general principles, advantages and limitations of qPCR as well as its validation parameters. This method has proven to be a very effective technique with high levels of sensitivity and precision by simultaneously identifying and quantifying the target organism. It can obtain rapid and reliable results to take preventive and corrective measures. For this reason, it is proposed to adopt this technique as a reference method for the microbiological monitoring of water. There are different variants of the qPCR technique such as multiplex-PCR, nested PCR and dPCR which allow adapting to the different needs of detection of microorganisms. There is, however, a need to standardize the qPCR protocols to obtain agreement on the procedures to be adopted
