Alfa hemolisina (HlyA) pertenece a una familia de toxinas denominadas RTX (Repeat in toxins), y es uno de los factor de virulencia de las cepas uropatogénicas de E.coli. HlyA, al igual que muchas de las toxinas de esta familia, debe ser acilada en dos residuos internos de Lys en el interior de la bacteria antes de ser secretada al medio. Esta modificación postraduccional hace que la toxina pase de la forma inactiva (ProHlyA), sin acilar, a una proteína activa acilada (HlyA).
En los últimos años hemos estudiados los efectos que produce esta toxina a los eritrocitos a concentraciones sublíticas.
Hemos encontrado que induce un aumento bifásico de calcio, que produce la activación de calpaínas que degradan proteínas del citoesqueleto; siendo responsables de los cambios morfológicos que sufren los eritrocitos previos a la lisis. Además, HlyA activa esfingomielinasas endógenas, produciendo un aumento de ceramida en la membrana, hecho que cambia las propiedades físicas de la membrana. Por otro lado, estudios más detallados de los cambios morfológicos observados, demostraron que estos cambios son independientes del ingreso de calcio y que HlyA sufre un proceso de transformación de discocito a esferocito.Facultad de Ciencias Médica

Herlax, Vanesa Silvana

Maté, Sabina María

Strack, Karen

SEDICI - Repositorio de la UNLP

LIBERACIÓN DE MICROVESÍCULAS DE ERITROCITOS TRATADOS CON ALFA 
HEMOLISINA DE E.COLI
1 1 1
Karen Strack , Sabina Maté y Vanesa Herlax .
1- INIBIOLP, Facultad de Ciencias Médicas.
vherlax@med.unlp.edu.ar
Introducción
Alfa hemolisina (HlyA) pertenece a una familia de toxinas denominadas RTX (Repeat in toxins), y es uno de los factor de 
virulencia de las cepas uropatogénicas de E.coli. HlyA, al igual que muchas de las toxinas de esta familia, debe ser 
acilada en dos residuos internos de Lys en el interior de la bacteria antes de ser secretada al medio. Esta modificación 
postraduccional hace que la toxina pase de la forma inactiva (ProHlyA), sin acilar, a una proteína activa acilada (HlyA).
 En los últimos años hemos estudiados los efectos que produce esta toxina a los eritrocitos a concentraciones sublíticas. 
Hemos encontrado que induce un aumento bifásico de calcio [], que produce la activación de calpaínas que degradan 
proteínas del citoesqueleto; siendo responsables de los cambios morfológicos que sufren los eritrocitos previos a la lisis 
[].  Además, HlyA activa esfingomielinasas endógenas, produciendo un aumento de ceramida en la membrana, hecho 
que cambia las propiedades físicas de la membrana []. Por otro lado, estudios más detallados de los cambios 
morfológicos observados, demostraron que estos cambios son independientes del ingreso de calcio [] y que HlyA sufre 
un proceso de transformación de discocito a esferocito []. 
Objetivos
Todos los eventos anteriormente descriptos ocurren en aquellas células que secretan microvesículas al medio como un 
proceso de remodelación de la membrana [], []. Por otro lado se ha visto que estas microvesículas participan en proceso 
de intercomunicación celular. Es por eso que el objetivo del presente trabajo fue estudiar la liberación de microvesículas 
de eritrocitos tratados con HlyA.
Materiales y métodos
Se realizaron observaciones en microscopio electrónico de transmisión (MET) de eritrocitos tratados con HlyA y 
ProHlyA a concentraciones sublíticas y de microvesículas purificadas por ultracentrifugación. Se realizo una 
caracterización de las proteínas de las microvesículas por SDS-PAGE 10 %.
Resultados
Las observaciones de cortes de eritrocitos tratados con HlyA por MET mostraron la secreción de microvesículas,  
mientras que eritrocitos tratados con la toxina sin acilar (ProHlyA) no liberaron estas partículas. Por otro lado se 
pudieron observar microvesículas de 200 nm en las muestras tratadas con HlyA. Los perfiles electroforéticos de estas 
vesículas son distintos a los fantasmas de eritrocitos y tiene el mismo perfil que aquellas microvesícualas obtenidas con 
un ionóforo. 
Conclusiones
Eritrocitos tratados con concentraciones subliticas de HlyA liberan microvesículas de 200 nm, 
Bibliografía
1. Sanchez, S., L. Bakás, E. Gratton, and V. Herlax, (2011). PLoS One. 6 (6): p. e21127.
2. Velasquez, F.C., S. Mate, L. Bakas, and V. Herlax, (2015). Biochim Biophys Acta. 1848(11 Pt A): p. 2779-88.
3. Vazquez, R.F., S.M. Mate, L.S. Bakas, C. Munoz-Garay, and V.S. Herlax, (2016). Biochim Biophys Acta. 1858(8): p. 
1944-1953.
4. Hagerstrand, H. and B. Isomaa, (1992). Biochim Biophys Acta. 1109(2): p. 117-26.
5. Freyssinet, J.M., (2001). J Thromb Haemost. 1(7): p. 1655-1662.
6. Boulanger, C.M., N. Amabile, and A. Tedgui, (2006). Hypertension. 48(2): p. 180-186.
Conclusiones
La realización del TIBI es una herramienta más en el proceso de enseñanza-aprendizaje para el ejercicio de la 
profesión: aprender a redactar trabajos científicos. A pesar de ser tedioso, en general la percepción del estudiantado es 
positiva, expresado en el grado de satisfacción. Y es el primer entrenamiento que tiene aquel interesado en la 
publicación de trabajos. Como propuesta superadora se sugiere la redacción unificada de una guía de referencia de la 
FCM, con el fin de utilizarla en las distintas cátedras en las que se presentan trabajos de investigación y/o de campo. 
Diciembre 2016 | Vol 6 Nº5
2016 Diciembre, 6(5): 1-1


Spanish

Liberación de microvesículas de eritrocitos tratados con alfa hemolisina de <i>E. coli</i>

El Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

LIBERACIÓN DE MICROVESÍCULAS DE ERITROCITOS TRATADOS CON ALFA HEMOLISINA DE E.COLI1 1 1Karen Strack , Sabina Maté y Vanesa Herlax .1- INIBIOLP, Facultad de Ciencias Médicas.vherlax@med.unlp.edu.arIntroducciónAlfa hemolisina (HlyA) pertenece a una familia de toxinas denominadas RTX (Repeat in toxins), y es uno de los factor de virulencia de las cepas uropatogénicas de E.coli. HlyA, al igual que muchas de las toxinas de esta familia, debe ser acilada en dos residuos internos de Lys en el interior de la bacteria antes de ser secretada al medio. Esta modificación postraduccional hace que la toxina pase de la forma inactiva (ProHlyA), sin acilar, a una proteína activa acilada (HlyA). En los últimos años hemos estudiados los efectos que produce esta toxina a los eritrocitos a concentraciones sublíticas. Hemos encontrado que induce un aumento bifásico de calcio [], que produce la activación de calpaínas que degradan proteínas del citoesqueleto; siendo responsables de los cambios morfológicos que sufren los eritrocitos previos a la lisis [].  Además, HlyA activa esfingomielinasas endógenas, produciendo un aumento de ceramida en la membrana, hecho que cambia las propiedades físicas de la membrana []. Por otro lado, estudios más detallados de los cambios morfológicos observados, demostraron que estos cambios son independientes del ingreso de calcio [] y que HlyA sufre un proceso de transformación de discocito a esferocito []. ObjetivosTodos los eventos anteriormente descriptos ocurren en aquellas células que secretan microvesículas al medio como un proceso de remodelación de la membrana [], []. Por otro lado se ha visto que estas microvesículas participan en proceso de intercomunicación celular. Es por eso que el objetivo del presente trabajo fue estudiar la liberación de microvesículas de eritrocitos tratados con HlyA.Materiales y métodosSe realizaron observaciones en microscopio electrónico de transmisión (MET) de eritrocitos tratados con HlyA y ProHlyA a concentraciones sublíticas y de microvesículas purificadas por ultracentrifugación. Se realizo una caracterización de las proteínas de las microvesículas por SDS-PAGE 10 %.ResultadosLas observaciones de cortes de eritrocitos tratados con HlyA por MET mostraron la secreción de microvesículas,  mientras que eritrocitos tratados con la toxina sin acilar (ProHlyA) no liberaron estas partículas. Por otro lado se pudieron observar microvesículas de 200 nm en las muestras tratadas con HlyA. Los perfiles electroforéticos de estas vesículas son distintos a los fantasmas de eritrocitos y tiene el mismo perfil que aquellas microvesícualas obtenidas con un ionóforo. ConclusionesEritrocitos tratados con concentraciones subliticas de HlyA liberan microvesículas de 200 nm, Bibliografía1. Sanchez, S., L. Bakás, E. Gratton, and V. Herlax, (2011). PLoS One. 6 (6): p. e21127.2. Velasquez, F.C., S. Mate, L. Bakas, and V. Herlax, (2015). Biochim Biophys Acta. 1848(11 Pt A): p. 2779-88.3. Vazquez, R.F., S.M. Mate, L.S. Bakas, C. Munoz-Garay, and V.S. Herlax, (2016). Biochim Biophys Acta. 1858(8): p. 1944-1953.4. Hagerstrand, H. and B. Isomaa, (1992). Biochim Biophys Acta. 1109(2): p. 117-26.5. Freyssinet, J.M., (2001). J Thromb Haemost. 1(7): p. 1655-1662.6. Boulanger, C.M., N. Amabile, and A. Tedgui, (2006). Hypertension. 48(2): p. 180-186.ConclusionesLa realización del TIBI es una herramienta más en el proceso de enseñanza-aprendizaje para el ejercicio de la profesión: aprender a redactar trabajos científicos. A pesar de ser tedioso, en general la percepción del estudiantado es positiva, expresado en el grado de satisfacción. Y es el primer entrenamiento que tiene aquel interesado en la publicación de trabajos. Como propuesta superadora se sugiere la redacción unificada de una guía de referencia de la FCM, con el fin de utilizarla en las distintas cátedras en las que se presentan trabajos de investigación y/o de campo. Diciembre 2016 | Vol 6 Nº52016 Diciembre, 6(5): 1-1

http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/58999/Documento_completo.pdf?sequence=1

Liberación de microvesículas de eritrocitos tratados con alfa hemolisina de <i>E. coli</i>

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

SEDICI - Repositorio de la UNLP

El Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

Servicio de Difusión de la Creación Intelectual