ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕССНИТРОЗИЛИРУЮЩИЙ СТРЕССКРОВЕНОСНЫЕ СОСУДЫ /ПАТОЛПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВПЛАЗМАЖИВОТНЫЕ ЛАБОРАТОРНЫЕКРЫСЫЭКСПЕРИМЕНТЫ НА ЖИВОТНЫ

Скринаус, С. С.

Electronic arhive of Vitebsk State Medical University Library  (Репозиторий библиотеки Витебского государственного медицинского университета)

334  ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ И НИТРОЗИЛИРУЮЩИЙ СТРЕСС КАК ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ СНИЖЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ВКСа-КАНАЛОВ ГЛАДКОМЫШЕЧНЫХ КЛЕТОК КОРОНАРНЫХ СОСУДОВ   Скринаус С.С. УО «Витебский государственный медицинский университет»  Актуальность. Одним из механизмов нарушения тонуса артериальных сосудов при стрессе является дисфункция эндотелиоцитов, характеризующаяся гиперпродукцией монооксида азота, активных форм кислорода и других вазоактивных веществ [1]. Действие активных форм кислоро-да и азота на клетку может приводить к изменению ее редокс-состояния, которое определяется со-отношением восстановленного и окисленного глутатиона, НАДН и НАД+, НАДФН и НАДФ+) [2,3]. Важная роль в поддержании редокс-состояния клеток принадлежит редокс-системе глута-тиона (восстановленный/окисленный глутатион) [3]. Активируемые кальцием калиевые каналы большой проводимости (ВКСа-каналы) играют центральную роль в расслаблении гладкомышеч-ных клеток сосудов, оказывая демпфирующий эффект на зависимую от деполяризации активацию кальциевых каналов, ограничивают количество входящего внутрь клетки ионов кальция, что спо-собствует вазодилатации. Реактивные формы кислорода и азота способны окислять либо нитрози-лировать различные белки, в частности ионные насосы, ферменты, рецепторы и т.д., имеющие важное значение в регуляции сосудистого тонуса.  Ahern и др. (1999), показали, что реактивные формы азота могут нитрозилировать SH-группы белков, входящих в состав ВКСа-канала [3]. Це-лью данной работы было определить возможность ограничения постстрессорного нарушения функциональной активности ВКСа-каналов коронарных сосудов.  Материал и методы. Опыты были проведены на изолированном сердце крысы в полость левого желудочка которого вводили латексный баллончик постоянного объема. Сердце находи-лось в установке для перфузии изолированного сердца мелких лабораторных животных IH-SR тип 844/1 (HSE-HA, Германия). На первом этапе эксперимента сердце перфузировали раствором Кребса - Хензелайта, на втором – этим же раствором, но с добавлением тетраэтиламмония (1 мМ, Sigma). В ходе опыта перфузионное давление  ступенчато повышали от 40 до 120 мм рт.ст. с ша-гом в 20 мм рт. ст. Функциональную активность ВКСа-каналов определяли как процент изменения объемной скорости коронарного потока, вызванного введением в перфузионный раствор тетра-этиламмония. Стресс вызывали 6–часовой иммобилизацией крыс на спине без фиксации головы. Определение стабильных продуктов деградации монооксида азота проводилось в плазме крови. Оценку активности процесса перекисного окисления липидов  и общую антиоксидантную актив-ность в плазме крови производили на биохемилюминометре БХЛ-06 (Россия).  Восстановленный и окисленный глутатион в эритроцитах определяли методом высоко эффективной жидкостной хро-матографии.  Обработка полученных результатов проводилась с применением пакета статистических программ Microsoft Excel 2000, STATISTICA 6.0.  Результаты и обсуждения. В изолированных сердцах крыс контрольных животных, пер-фузируемых раствором Кребса-Хензелайта, содержащим тетраэтиламмоний наблюдалось сниже-ние объемной скорости коронарного потока при перфузионном давлении 80-120 мм рт.ст. в сред-нем на 23% (р<0,05,) [4]. После блокады тетраэтиламмонием ВКСа-каналов максимальный гипере-мический коронарный поток, определяемый при перфузионном давлении 80 и 120 мм рт.ст. сни-зился на 23 и 15% соответственно (р<0,05).  В группе животных перенесших иммобилизацию тетраэтиламмоний вызывал менее выра-женное снижение объемной скорости коронарного потока (в среднем на 9% при перфузионном давлении 100 и 120 мм рт.ст., р<0,05) и возрастание индекса ауторегуляции (в среднем на 31%, р<0,05) по сравнению с контролем. Максимальный гиперемический коронарный поток не изме-нялся. После иммобилизационного стресса отмечалось увеличение по сравнению с контролем по-казателей I max на 13% (пропорционален уровню перекисного окисления липидов), суммарной 335  суммы хемилюминесценции на 19% (S, обратно пропорциональна общей антиоксидантной актив-ности) и скорости элиминации свободных радикалов на 10% (пропорционален tg 2α) (табл.1).  Таблица 1. Показатели активности перекисного окисления липидов и общей антиок-сидантной активности в плазме крови крыс после иммобилизационного стресса.  Группы I max, мВ S, мВ×сек tg 2α Контроль (n=9) 1,137±0,042 10,4±0,3 -0,241±0,006 Стресс 6 часов (n=7) 1,281±0,040* 12,4±0,3* -0,268±0,007* Примечание - * - p<0,05 по сравнению с контролем; n-количество животных в группе  После иммобилизационного стресса концентрация NO2/NO3 увеличилась на 53% (табл.2).  Таблица 2. Концентрация нитратов/нитритов у животных после иммобилизационного стресса Группы NO2/NO3, мкМ/л Контроль (n=10) 27,5±1,2 Стресс 6 часов (n=11) 42,0±1,2* Примечание - * - p<0,05 по сравнению с контролем; n-количество животных в группе  Таким образом, при 6-часовой иммобилизации происходила активация окислительного и нитрозилирующего стресса на фоне общего снижения АОА плазмы, что в свою очередь, могло привести к окислению и/или нитрозилированию сульфгидрильных групп белковых молекул ВКСа-каналов.  После 6-часового иммобилизационного стресса достоверных различий абсолютных значе-ний GSH и GSSG не обнаруживалось, однако их соотношение уменьшалось на 46%  (табл.3).   Таблица 3. Концентрация восстановленного, окисленного глютатиона и их соотноше-ние в крови крыс, перенесших стресс  Группа животных GSH мкг/мл крови GSSG мкг/мл крови GSH/ GSSG Контроль (n=11) 521±53 166±25 4,29±0,78 Стресс (n=10) 424±76 176±21 2,29±0,34* Примечание: *- р<0,029 по сравнению с контролем; n-количество животных в группе   Выводы. 1. Стресс снижает функциональную активность ВКСа-каналов коронарных сосудов. 2. Под влиянием иммобилизационного стресса наблюдается увеличение интенсивности перекисного окисления липидов на фоне ослабления общей антиоксидантной активности и накоп-ление продуктов деградации монооксида азота. 3. После иммобилизационного стресса соотношение GSH и GSSH уменьшается, что приводит к изменению редокс-состояния клеток. Литература: 1. Беляева, Л.Е. Редокс-зависимые механизмы действия N-ацетилцистеина / Л.Е. Бе-ляева, В.И. Шебеко, А.П. Солодков // Вестн. ВГМУ. – 2008. – Т. 7, № 4. – С. 5−15. 2. Mechanisms Underlying Heterogeneous Ca2+ Sparklet Activity in Arterial Smooth Muscle / M. F. Navedo [et al.] // J. Gen. Physiol. – 2006. – Vol. 127, № 6. – P. 611–622.  3. Schafer, F.Q. Redox environment of the cell as viewed through the redox state of the gluta-thione disulfide/glutathione couple / F.Q. Schafer, G.R. Buettner // Free Radic. Biol. Med. – 2001. – Vol. 30, № 11. – P. 1191–12. 336  4. Майорова, С.С. Влияние стресса на функциональную активность ВКCа-каналов ко-ронарных сосудов / С.С. Майорова, С.С. Лазуко, А.П. Солодков // Вестн. ВГМУ. – 2007. – Т. 6, № 1. – С. 19–25.   ОСОБЕННОСТИ ПРОТЕОЛИЗА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ  ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ЭТАНОЛОМ   Ходос О.А.  УО «Витебский государственный медицинский университет»   Актуальность. Проблема злоупотребления алкоголем в настоящее время актуальна во многих странах мира [1, 2]. Активация протеолиза является причиной развития многих патологи-ческих процессов [2]. Однако, особенности влияния этанола на протеолиз изучены фрагментарно. Целью данной работы являлось изучение протеолиза в сыворотке крови при хронической интоксикации этанолом.  Материал и методы. Для проведения эксперимента использовали половозрелых самцов крыс средняя масса которых составляла 360 граммов. С помощью теста «этанолового наркоза» предварительно оценивали чувствительность центральной нервной системы к действию этанола. Для исследований отбирали животных, предрасположенных к добровольному потреблению алко-голя. Экспериментальную модель хронической алкогольной интоксикации воспроизводили путем предоставления животным опытных групп 15% раствора этанола ad libitum [3]. Концентрацию растворов этанола увеличивали в течение первых трех недель от 5 до 15% (5% - первая неделя, 10% - вторая неделя, 15% - третья неделя) для адаптации животных к вкусу этанола [3]. Животным контрольной группы в качестве источника питья предоставляли водопроводную воду. Объем вы-питого животными раствора этанола и воды контролировали регулярно. Еженедельно осуществ-ляли взвешивание крыс. Через 29 недель доступ к раствору этанола прекращали. Животных выво-дили из эксперимента через 1 сутки, 3 и 7 суток после отмены этанола. Общую протеолитическую активность в сыворотке крови определяли методом Erlanger B. и др. [4]. Для определения активности α1-протеиназного ингибитора и α2-макроглобулина сыворотки крови был использован метод, предложенный Хватовым Т.А. и Беловой В.Б. [5]. Активность эндо-генных ингибиторов цистеиновых протеиназ в сыворотке крови исследовали с помощью метода Lenney J.F. [6].  Статистическую обработку результатов осуществляли методом Краскела-Уоллиса (ANOVA по Краскелу-Уоллису), парное сравнение групп проводили с использованием непараметрического теста Манна–Уитни. При оценке значения р применяли поправку Бонферрони.  Результаты и  обсуждение. Полученные в результате исследований данные показали, что под влиянием хронического воздействия этанола, изменения общей протеолитической активности сыворотки крови не были статистически значимыми (р=0,1797).  Активность α1-протеиназного ингибитора через 1 сутки после отмены этанола не изменяется по сравнению с контролем (р=0,1043). Однако, через 3 суток после отмены этанола активность α1-протеиназного ингибитора снижается на 11,44 % (0,0027). Через 7 суток данный показатель был снижен по отношению к кон-тролю на 9,49 % (р=0,0027). Активность α2-макроглобулина сыворотки крови была снижена по сравнению с контролем во все изучаемые периоды: через 1 сутки после отмены этанола – на 52,63 % (р=0,0044), через 3 суток –на  42,98 % (р=0,0027), 7 суток – на 48,24 % (р=0,0027). Активность эндогенных ингибиторов цистеиновых протеиназ в сыворотке крови экспериментальных живот-ных не изменялась под воздействием этанола. Статистически значимых изменений активности по отношению к контролю не было выявлено ни в один из изучаемых периодов (р=0,4762). Таким образом, хроническая интоксикация этанолом приводит к снижению активности α1-протеиназного ингибитора и α2-макроглобулина в сыворотке крови. Хроническое воздействие эта-нола активирует процессы перекисного окисления, что, видимо может вызывать окислительную модификацию α1-протеиназного ингибитора и являться одной из причин снижения активности 

Окислительный и нитрозилирующий стресс как патогенетический механизм снижения функциональной активности ВК[Ca]-каналов гладкомышечных клеток коронарных сосудов

http://elib.vsmu.by/bitstream/handle/123/12350/dos_72_2017_334-336.pdf?sequence=1&isAllowed=y

Окислительный и нитрозилирующий стресс как патогенетический механизм снижения функциональной активности ВК[Ca]-каналов гладкомышечных клеток коронарных сосудов

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Electronic arhive of Vitebsk State Medical University Library (Репозиторий библиотеки Витебского государственного медицинского университета)