Balateu Paños, Daniel

Universitat Autònoma de Barcelona. Facultat de Biociències

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 Descubrimiento de sustancias bactericidas del sistema inmunitario conservadas evolutivamente en una gran variedad de especies; los péptidos antimicrobianos (AMPs) 1. Dentro de los estos, se han caracterizado los cationic antimicrobial peptides (CAPs), péptidos con propiedades antitumorales 2.        CARACTERIZACIÓN Y DISEÑO DE  PÉPTIDOS ANTIMICROBIANOS.  INTERÉS PARA EL TRATAMIENTO DEL CÁNCER Daniel Balateu Paños (balateud@gmail.com)  Grado en Bioquímica  -  Universidad Autónoma de Barcelona Bellaterra, Junio 2015  INTRODUCCIÓN DISEÑO DE AMPs CONCLUSIONES REFERENCIAS Características de los AMPs3 Sustancias aminoacídicas cortas (entre 10 y 50 aa) con carga positiva. Amfipaticidad debido al 50% de regiones hidrofóbicas. Papel quimiotáctico Recluta neutrófilos y linfocitos B. Sensibilidad a proteasas y producción de efecto hemolítico. Características de las células tumorales2 Presentan cargas aniónicas en su membrana  por expresión de fosfatidil-Serina (las células sanas presentan fosfolípidos zwitteriónicos; carga neta nula). Presentan microvellosidades (+ superfície membranal que células sanas). No presentan colesterol (permiten unión lipídica). Interacción electrostática2,4 = MUERTE CELULAR Lisis directa Se forman poros en la membrana y conduce a choque osmótico [Fig.1]. Inserción celular y desestructuración de la membrana mitocondrial (activa vía CytC y caspasas apoptosis).  En las últimas 2-3 décadas, ha aparecido resistencia a antibióticos y a tratamientos antitumorales convencionales (ej. quimioterapia). Esto es un problema de salud pública para el cual es importante encontrar soluciones terapéuticas alternativas Interesante optimizar y sintetizar AMPs.      Efectos negativos de la quimioterapia2,5 Multidrug resistance de células cancerosas: ↑glicoproteínaP (drug transporter) y ↑Bcl2 (factor antiapoptótico). Mutaciones inhibidoras de p53 (tumor supressor gene). Citotoxicidad debida a la falta de selectividad (ataca a células tumorales y a células sanas). Interés de los AMPs como agentes antitumorales2,4 No generan resistencia debido a: Gran selectividad para células tumorales (no interaccionan con células sanas). Su gran diversidad de estructuras (origen peptídico) y su corta longitud. Facilidad de modificación, inmovilización en superficies y síntesis de novo para: ↑ Actividad anticancerígena  ↓ Proteólisis y efectos hemolíticos. Figura 1. A) Interacción CAPs-membrana. B) Barrel-stave model, Monómeros de hélice-α que agregan en la membrana y cambian la permeabilidad . Provoca que se formen poros. C)Carpet model. Se agregan a la membrana en paralelo y forman capas hasta que una concentración crítica. Entonces producen la desintegración de la membrana celular  (*Imagen extraída de 2)  Para diseñar CAPs como fármacos se deben tener en cuenta distintos factores para llevar a cabo una síntesis correcta: Comprobar que tienen actividad antitumoral y que presentan una citotoxicidad baja. Poner énfasis en las características más esenciales para aumentar los beneficios.  Existen distintos mecanismos para centrar el diseño:  Características que optimizan los AMPs (↑ actividad antitumoral y ↓hemólisis) 3 Incremento en la carga neta positiva. Longitud mínima de los péptidos (no puede ser inferior a los 8aa). Aumento de la capacidad de formar hélices  (↑resistencia a proteasas). Mayor amfipaticidad permite una unión más específica.  Identificación de las secuencias aminoacídicas responsables de ↑actividad antitumoral y ↓citotoxicidad en células sanas y la modificación de estos. Uso de estos patterns de secuencia para desarrollar péptidos de novo 4. Truncamiento del CAP conocido (solamente aa esenciales) Menor longitud significa menos hemólisis (pero no pueden ser inferior a 8aa). Aumento de aminoácidos responsables de función en otras partes de la secuencia: ↑ Residuos catiónicos causa mayor selectividad membranal ↑ Residuos aromáticos permiten una mayor actividad lítica.  Combinación de métodos de truncamiento y de adición a CAPs conocidos 5 para optimizar sus propiedades antitumorales  y citotóxicas [Fig.2].  MODIFICACIÓN DE SECUENCIAS DE AMPs CONOCIDOS   Modelaje computacional que compara datos de escala molecular de distintos AMPs Estimación cuantitativa de las propiedades fisicoquímicas y su actividad mediante estudios SAR (structure-activity relation) 3.    Son predicciones informáticas, por lo que se requiere la comparación con CAPs naturales para determinar si realmente se han mejorado sus características 4.    DISEÑO de novo  POR SCREENING VIRTUAL Figura 2. Combinación de short cationic peptide (K4R2) y aa aromáticos derivados de β-naftalaline en un CAP conocido (S1). Observación de la actividad del compuesto final K4R2-Nal-S1.  A) Parte dorsal de ratones. Se observa la disminución de la masa tumoral en los ratones tratados. Comparación del volumen (B) y del peso (C) del tumor, Se observa la reducción de estos en los modelos animales tratados.  (*imagen extraída de 5)  Diseño computacional de HFUs (helix forming units) formadas por un cuore tripeptídico de Phe, Ile y Arg ↑ Actividad lítica y ↓ hemólisis como más unidades HFU se añadan (límite 3 unidades).  Diseño computacional de un péptido cíclico de 14aa derivado de citotoxinas; el L1AD3 Activa la vía de la caspasa 8 en células tumorales leucémicas (apoptosis y reducción de la masa tumoral).  HIBRIDACIÓN O QUÍMERIZACIÓN PEPTÍDICA  Método basado en la fusión de secuencias peptídicas de CAPs conocidos o de otros péptidos presentes en el organismo6,7. Permite:  Ejemplos:  ↑ Propiedades anticancerosas   ↓ Reducción de la citotoxicidad    Direccionamiento mediante la combinación de secuencias target con CAPs para poder aumentar su selectividad en zonas específicas del organismo (tumor con angiogénesis o hormonodependiente).  Hibridación de Cecropina A con péptidos β-hairpin 7 Reduce notablemente la hemólisis y aumenta de selectividad para células tumorales.   Hibridación de un short-lytic-CAP con un péptido de unión a EGFR 6  Permite el direccionamiento a angiogénesis (aumento de selectividad) en líneas tumorales humanas con K-Ras mutada o sin mutar (mutación que activa constitutivamente la vía de crecimiento Tyr-K aporta resistencia a quimioterapia) [Fig.3] Figura 3. Observación de la actividad antitumoral de EGFR-hybrid lytic peptide en distintas líneas tumorales humanas. A) BXCP3 sin mutación en K-ras (células tumorales pancreáticas). B) MDA-MB-231 mutadas positivamente en K-ras (células de cáncer de mama). C) Examen histológico después del tratamiento con PBS o con el péptido híbrido en tumores hepáticos y de riñón (color blanco marca la muerte celular).                                                (*imágenes extraídas de 6)  AMPs  son moléculas de gran interés para el futuro desarrollo de terapias antitumorales ya que no generan resistencia y pueden combinarse con quimioterapia (inhiben citotoxicidad).  El método más prometedor de la biología sintética de AMPs es la hibridación de secuencias modificadas de AMPs conocidos con péptidos target específicos del individuo.  La nanotecnología se prevé que permita la integración de CAPs en nanopartículas (protección hasta la diana).  El efecto limitante es el elevado coste y tiempo de manufacturar estos AMPs. Urge desarrollar nuevos métodos que permitan mejorar y simplificar el diseño (realizar + experimentos).  Permitirán el tratamiento personalizado del cáncer y también las abre para el tratamiento de otro tipo de enfermedades como el caso de la infección por VIH. 1. Rivas-santiago, B., C, M., Sada, E., Hernández-pando, R. & Tsutsumi, V. Péptidos antimicrobianos en la inmunidad innata de enfermedades infecciosas. 48, 62–71 (2006). 2. Mader, J. S. & Hoskin, D. W. Cationic antimicrobial peptides as novel cytotoxic agents for cancer treatment. Expert Opin. Investig. Drugs 15, 933–946 (2006). 3. Bahar, A. A. & Ren, D. Antimicrobial peptides. Pharmaceuticals (Basel). 6, 1543–75 (2013). 4. Fjell, C. D., Hiss, J. A., Hancock, R. E. W. & Schneider, G. Designing antimicrobial peptides: form follows function. Nature Reviews Drug Discovery (2012). doi:10.1038/nrd3653 5. Chu, H.-L. et al. Novel Antimicrobial Peptides with High Anticancer Activity and Selectivity. PLoS One 10, e0126390 (2015). 6. Kohno, M. et al. A novel hybrid peptide targeting EGFR-expressing cancers. Eur. J. Cancer 47, 773–783 (2011). 7. Liu, Y., Xia, X., Xu, L. & Wang, Y. Design of hybrid β-hairpin peptides with enhanced cell specificity and potent anti-inflammatory activity. Biomaterials 34, 237–250 (2013).   

Caracterización y diseño de péptidos antimicrobianos : interés para el tratamiento del cáncer

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Caracterización y diseño de péptidos antimicrobianos : interés para el tratamiento del cáncer

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