Se realizó un estudio para evaluar la importancia de la adición de cepas nativas de Trichoderma sp a la rizosfera de Juniperus deppeana y Agave cupreata, como alternativa para el establecimiento de una plantación forestal en San Juan Tzicatlacoyan. Estas especies están consideradas recuperadoras de suelos y presentan una amplia distribución en zonas áridas, así como rápido crecimiento y adaptación. El inoculante con base de grano de trigo resultó un excelente sustrato para la cepa (TS1P1) de Trichoderma sp donde se comparó con un inoculante comercial marca Tricovel®, con el fin de determinar la mejor adherencia entre especies forestales. Los resultados mostraron que la cepa nativa (TS1P1) en la rizosfera de A. cupreata presentó mayor adherencia con mejor desarrollo en el índice de calidad de Dickson que fue de 1.34 a los 90 días de crecimiento siendo superior a Tricovel ® que solo obtuvo 1.09 en el mismo tiempo. La conformación de estructuras reproductivas, confirman la presencia de Trichoderma en la raíz de las plantas de J. deppeana y A. cupreata, mostrando que es posible su empleo para la asociación de estas especies de importancia forestal.A study was conducted to assess the significance of the addition of native strains of Trichoderma sp at rhizosphere of Juniperus deppeana and Agave cupreata, as an alternative to the establishment of a forest plantation in San Juan Tzicatlacoyan. These species are considered to recuperative soil and are widely distributed in arid areas, addition its rapid growth and adaptation. The inoculant based in wheat grain, it turned an excellent substrate for strain (TS1P1) of the Trichodrma sp where it was compared with a commercial inoculant "Tricovel®" brand, in order to determine the best addition between forest species. The results showed that the best addition is in the rhizosphere of A. cupreata with the native strain (TS1P1), also gives a better development in the Dickson quality index of 1.34 at 90 days of growth exceeding that Tricovel ® 1.09 in the same time. The formation of reproductives structures confirm the presence of Trichoderma at the root of the plants, showing that it is possible to use native strains to field for the association of these forest species.Eje A1 Sistemas de producción de base agroecológica (Trabajos científicos)Facultad de Ciencias Agrarias y Forestale

Aldana, Fernando

Huato, Miguel Angel Damian

Parraguirre Lezama, Conrado

Rivera Tapia, José A.

Romero Arenas, Omar

SEDICI - Repositorio de la UNLP

  
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A1-191 Evaluación de Trichoderma spp., en asociación con Agave cupreata y 
Juniperus deppeana en suelos del municipio San Juan Tzicatlacoyan, Puebla-
México. 
 
Omar Romero-Arenas1, Miguel Angel Damian Huato1, José A., Rivera Tapia2, Fernando 
Aldana3, y Conrado Parraguirre Lezama4 
 
1 Centro de Agroecología, Instituto de Ciencias; Benemérita Universidad Autónoma de 
Puebla (BUAP); 2 Centro de Investigación en Ciencias Microbiológicas, Instituto de Ciencias-
BUAP; 3 Departamento de Química del Agua, Instituto de Ciencias-BUAP 
4 Ingenieria Agroforestal, Campus Tetela-BUAP. 
 
 
Resumen 
Se realizó un estudio para evaluar la importancia de la adición de cepas nativas de 
Trichoderma sp a la rizosfera de Juniperus deppeana y Agave cupreata, como alternativa 
para el establecimiento de una plantación forestal en San Juan Tzicatlacoyan. Estas 
especies están consideradas recuperadoras de suelos y presentan una amplia distribución 
en zonas áridas, así como rápido crecimiento y adaptación. El inoculante con base de grano 
de trigo resultó un excelente sustrato para la cepa (TS1P1) de Trichoderma sp donde se 
comparó con un inoculante comercial marca Tricovel®, con el fin de determinar la mejor 
adherencia entre especies forestales. Los resultados mostraron que  la cepa nativa (TS1P1) 
en la rizosfera de A. cupreata presentó mayor adherencia con mejor desarrollo en el índice 
de calidad de Dickson que fue de 1.34 a los 90 días de crecimiento siendo superior a 
Tricovel ® que solo obtuvo 1.09 en el mismo tiempo. La conformación de estructuras 
reproductivas, confirman la presencia de Trichoderma en la raíz de las plantas de J. 
deppeana y A. cupreata, mostrando que es posible su empleo para la asociación de estas 
especies de importancia forestal.  
Palabras clave: cepas nativas de Trichoderma; rizosfera; importancia forestal; Índice de 
Dickson. 
 
 
Abstract  
A study was conducted to assess the significance of the addition of native strains of 
Trichoderma sp at rhizosphere of Juniperus deppeana and Agave cupreata, as an alternative 
to the establishment of a forest plantation in San Juan Tzicatlacoyan. These species are 
considered to recuperative soil and are widely distributed in arid areas, addition its rapid 
growth and adaptation. The inoculant based in wheat grain, it turned an excellent substrate 
for strain (TS1P1) of the Trichodrma sp where it was compared with a commercial inoculant 
"Tricovel®" brand, in order to determine the best addition between forest species. The results 
showed that the best addition is in the rhizosphere of A. cupreata with the native strain 
(TS1P1), also gives a better development in the Dickson quality index of 1.34 at 90 days of 
growth exceeding that Tricovel ®  1.09 in the same time. The formation of reproductives 
structures confirm the presence of Trichoderma at the root of the plants, showing that it is 
possible to use native strains to field for the association of these forest species. 
Keywords: native strains; rhizosphere; forest importance; Index Dickson. 
 
 
Introducción  
En el suelo existen diversos microorganismos con capacidad antagónica hacia 
microorganismos fitopatógenos, uno de los más estudiados es Trichoderma spp., debido a 
su fácil y rápido crecimiento en medio de cultivo. Éste hongo es un habitante natural del 
  
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suelo y se caracteriza por su comportamiento saprófito, propiedad que le proporciona 
ventajas antagónicas, tales como antibiosis, competencia por nutrientes, micoparasitismo a 
otros hongos; permitiendo su selección y uso para el biocontrol en determinados cultivos 
agrícolas (Howell y Stipanovic, 1995). En México la pobreza constituye un factor esencial en 
la degradación de los suelos, sobre todo en el medio rural; a causa de la descapitalización 
sufrida por el sector durante décadas. La situación es tal, que ocho de cada diez familias 
rurales son pobres y de éstas cuatro se encuentran en pobreza extrema (Carabias, 1993). El 
deterioro de la tierra o la desertificación es un problema ecológico contemporáneo de mayor 
importancia en los países en desarrollo (Duarte, 1990). Este proceso ha sido definido como 
“la disminución o destrucción del potencial biológico de los recursos naturales, ocasionado 
por el mal uso y manejo de los mismos; lo que trae como consecuencia procesos 
degenerativos del medio físico, económico y social de las comunidades involucradas en su 
entorno” (Ortiz et al., 1994). Las plantaciones forestales se establecen con fines comerciales 
o de rehabilitación y pueden desempeñar varias funciones en el ecosistema. En los lugares 
donde se han establecido con fines de rehabilitación del medio ambiente, ayudan a la 
conservación del suelo y agua (Grubb, 1995).  
 
Juniperus deppeana vegeta sobre una amplia variedad de suelos incluyendo los alcalinos, 
los de contenido moderado en sales solubles y con drenaje deficiente. Pero también es 
frecuente observarlos en suelos poco profundos y pedregosos. Vázquez Yanes et al., (1999) 
menciona que el Juniperus deppeana se asocia con Pinus cembroides,  Pinus leiophylla, 
Quercus rugosa, Quercus crassifolia, Agave sp., Cupressus sp., Platanus sp., Fraxinus sp. 
Los agaves son un grupo de plantas de gran importancia económica y ecológica para 
México (Gentry, 1982; Eguiarte et al., 2000). El género Agave cuenta con más de 160 
especies, 75 % de las cuales se encuentran presentes en el país (Eguiarte et al., 2000).  
De acuerdo a lo anterior, esta investigación tiene como objeto evaluar la adaptación de 
Trichoderma spp., asociado a plantas de Juniperus deppeana y Agave cupreata en suelos 
del municipio de San Juan Tzicatlacoyan Puebla, México, ya que no se han reportados 
datos de esta asociación inducida para la recuperación de suelos alargo plazo. 
 
 
Metodología  
Material biológico 
Los trabajos se llevaron a cabo en el laboratorio de micología del Campus Tetela BUAP y 
los trabajos de campo se establecieron en el municipio San Juan Tzicatlacoyan, Puebla. Se 
trabajo con la cepa nativa (TS1P1) de Trichoderma spp., la cual forma parte del cepario del 
laboratorio de micología del Centro de Agroecología-BUAP y la cepa comercial de la marca 
Tricovel ®. Las plántulas de Agave cupreata y Juniperus deppeana fueron proporcionadas 
por la Comisión Nacional Forestal, procedentes del vivero Xoyatlan Municipio Palmar del 
Bravo, Puebla, México, con 8 meses de edad y una altura promedio de 11.7 y 24.5 
respectivamente. 
 
Descripción del área de estudio  
El Municipio de Tzicatlacoyan se localiza en la parte central del estado de Puebla, México, 
limita al norte con los municipios de Cuautinchán y Tecali de Herrera, al sur con San Juan 
Atzompa, Huatlatlauca y La Magdalena. Presenta un clima templado subhúmedo, con lluvias 
en verano y suelos con gran diversidad edafológica, identificándose el grupo de los 
Leptosoles como los más abundantes (INEGI, 2013). 
 
Establecimiento de la plantación  
La plantación se estableció bajo el sistema de cepa común en el predio ejidal bajo la tutela 
del C. Cupertino Rodríguez; consistió en establecer líneas paralelas, con la previa medición 
  
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de curvas de nivel, donde se realizaron cepas de 40*40 cm con una profundidad de 40 cm, 
procurando que se depositen a un lado de la cepa los primeros 20 cm de tierra que es la 
más fértil y del otro lado los otros 20 cm más profundos, se retiró el envase de plástico sin 
dañar a la raíz y se colocó en la cepa, después de cocar la planta se relleno con la tierra 
más profunda procurando apisonar ligeramente para que tenga una mejor aireación y 
drenaje el suelo. Las plantas se distribuyeron en tres parcelas de diferentes medidas (Figura 
1), pero con el mismo criterio de acomodo: Agave cupreata intercalado con un Juniperus 
deppeana siguiendo esta secuencia cada dos metros hasta completar las líneas de cada 
parcela.  Las líneas se intercalaron a razón de los siguientes tratamientos: ST (Sin 
Tratamiento), CTC (Con Tricovel ®) y CTN (Cepa TS1P1) esperando un total de 12 hileras 
por 16 plantas en el bloque 1, 20 hileras por 49 plantas en el bloque 2 y 8 hileras con 4 
plantas para el bloque 3. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FIGURA 1. Macro localización del municipio y micro localización de la zona a reforestar. 
 
Inoculación de las Plantas con Trichoderma spp  
En el caso de la cepa TS1P1 (Nativo), se colonizó incorporando 8 g de semillas de trigo con 
109 conidios g-1 a la planta ya establecida, con ayuda de una pala de jardinería al costado 
derecho procurando una profundidad de 30 cm, con la finalidad de que los granos queden 
en contacto en todos los niveles de la raíz. Para la aplicación de Tricovel ® se seguirán las 
recomendaciones de la marca mezclando los granos de arroz con Trichoderma spp. En un 
bote de 25 L de agua para después dosificar 10 mL de solución a una concentración de 109 
conidios g-1 a cada planta.  
 
Análisis destructivo del material y determinación de Trichioderma spp 
Se realizaron 3 muestreos destructivos de 15 plantas por tratamiento, al término de 90 días, 
cuidadosamente retirados del suelo con ayuda de pala derecha procurando no dañar el 
sistema radical. Las planas de Agave cupreata y Juniperus deppeana se observaron al 
microscopio óptico, en presencia de suelo; para observar la presencia de estructuras de 
Trichioderma spp., para determinar la relación inducida entre la planta y el microorganismo. 
Esta observación se realizó a nivel raíz, para ello se tomaron tres niveles a) alto “el más 
cercano al cuello de la raíz b) intermedio c) bajo “el segmento más cercano a la cofia de la 
raíz”. Además se retiró 10 g de suelo cercano a la raíz para observar la coloración del suelo 
y las muestras fueron observadas al microscopio a 10x, 40x. 
 
 
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Determinación del porcentaje de viabilidad de Trichoderma spp., en suelo  
Para la determinación del porcentaje de viabilidad de esporas, se recolectó 10 g de suelo de 
cada uno de los tratamientos evaluados a una distancia de 10 * 40 cm de profundidad. Se 
realizaron diluciones seriadas decimales con 1 g hasta llegar a la concentración 1x109. Las 
muestras de la concentración de esporas de cada suspensión obtenida se realizaron con la 
ayuda de una cámara hematimétrica de Neubauer (Lumycite, Propper, Manufacturing Co. 
Inc. Long Island, NY). El conteo en la cámara se realizó cuatro veces para cada tratamiento 
y repetición. Posteriormente se determinó la viabilidad de las esporas, en cajas Petri de 9 
cm de diámetro con medio de cultivo papa dextrosa agar (PDA), donde se inocularon 100 
esporas contenidas en 20 μL por caja. A las 48 horas posteriores a la siembra, se contabilizó 
el número de unidades formadoras de colonias (ufc) germinadas (Romero, 2007).  
 
Análisis estadístico  
Con los datos que se obtuvieron de las variables se realizó la separación de medias, prueba 
de Tukey (α=0.05), para evaluar por especie, por periodo y por tratamiento, para ello se 
utilizó el programa SPSS®, además de evaluar el Índice de Calidad de Dickson a los 90 días 
de ambas especies forestales. 
 
 
Resultados y discusiones  
La determinación del porcentaje de supervivencia de las cepas TS1P1 en comparación con 
Tricovel ® a los 90 días inoculación mostró que el comportamiento de Agave cupreata 
asociado a ambos tratamientos, donde el establecimiento de la cepa TS1P1 presentó en DR 
0 cm el 100% de presencia mientras que Tricovel ® alcanzo el 50% de colonización 
superando en DR10 cm y DR20 cm a TS1P1 alcanzando el 25 y 10% respectivamente (Fig. 
1). Para Juniperus deppeana la cepa TS1P1 DR0 cm no disminuyó sus niveles de 
colonización, manteniendo el 100% en la rizosfera. El tratamiento con Tricovel ® no 
presentó desarrollo en DR20 cm (Fig. 2 y 3). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
La determinación del porcentaje de viabilidad de cada uno de los tratamientos a las 48 hrs., 
presento 13 UFC para la Cepa TS1P1 con Juniperus deppeana, 16 UFC para la Cepa 
FIGURA 2. Comportamiento de TS1P1 Y Tricovel ® a 
los 90 días de crecimiento en Agave cupreata. 
 
FIGURA 3. Comportamiento de TS1P1 Y Tricovel ® 
a los 90 días de crecimiento en Juniperus 
deppeana. 
 
  
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TS1P1 asociado a Agave cupreata, 8 UFC para la cepa Tricovel® con Juniperus depeana y 
1 UFC para la asociación Cepa Tricovel ® con Agave cupreata.  
 
El Índice de Calidad de Dickson se calculó a los 90 días de inoculación en plantas de Agave 
cupreata y Juniperus deppeana, donde la prueba de Tukey presenta diferencias 
significativas, en el caso de Agave cupreata presenta la conformación de 2 grupos: el grupo 
“a” TS1P1 con los niveles altos en diferencia al grupo “b” que fueron Tricovel ® y el testigo 
(Tabla 1). En el caso de Juniperus deppeana, los tratamientos como el testigo mostraron 
diferencias significativas; siendo TS1P1 la cepa con los valores más altos. Se presenta la 
conformación de 3 grupos: el grupo “a” TS1P1 con los niveles altos en diferencia al grupo “b” 
Tricovel ® y el grupo “c” testigo (Tabla 1). 
 
Estos resultados confirman que el biocontrol de hongos fitopatógenos y la biofertilización 
empleando Trichoderma spp., es un método utilizado en diversos cultivos en diferentes 
partes del mundo, sin embargo el uso de cepas comerciales presenta dificultades con su 
persistencia en el suelo, debido a factores como la genética de los aislamientos, las 
condiciones del medio ambiente (González et al., 1999), sin embargo, el empleo de cepas 
mas adaptadas a las condiciones agroecológicas de la región y que cuenten con la 
capacidad conjunta de biocontrol y biofertilización presentan mayor adaptación al medio 
(Kleifeld y Chet, 1992; Michel et al., 2001) por estas razones es importante la selección de 
aislamientos nativos mejor adaptados a las condiciones edafoclimáticas de la zona 
especifica donde serán utilizados. 
 
 
           TABLA 1. Índice de Calidad de Dickson a los 90 días de inoculación. 
 
Tratamientos N 
Agave cupreata Juniperus deppeana 
b a c b a 
Testigo 15 1.094  0.194   
Tricovel ® 15 1.099   0.269  
TS1P1 15  1.345   0.343 
Sig.  0.651 1.000 1.000 1.000 1.000 
 
Las especies de Trichoderma incrementaron el crecimiento radical y el desarrollo de las 
plantas. Kleifeld y Chet (1992) atribuyen el efecto sobre el crecimiento no únicamente a la 
protección contra patógenos, sino también a la presencia de un factor regulador de 
crecimiento. Alatomare et al., (1999) señalan que T. harzianum posee la habilidad para 
solubilizar varios nutrientes de las plantas de sus fases minerales insolubles o escasamente 
solubles mediante mecanismos quelatantes y reductores; debido a estos mecanismos es 
que los fosfatos (principalmente de calcio) Fe, Cu y Zn suelen ser más asimilables por las 
plantas, de ahí que el empleo de las cepas nativas pueden representar importantes ventajas 
para la nutrición del cultivo.  
 
 
Conclusiones  
El desarrollo de las unidades formadoras de colonias de TS1P1 fueron más altas en 
comparación con Tricovel® en ambas plantas con 13 UFC para la Cepa TS1P1 con 
Juniperus deppeana, 16 UFC para la Cepa TS1P1 asociado a Agave cupreata, 8 UFC para 
la cepa Tricovel® con Juniperus depeana y 1 UFC para la asociación Cepa Tricovel ® con 
Agave cupreata.  
 
  
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De acuerdo a la prueba de Tukey, el Índice de Calidad de Dickson en la cepa TS1P1, tuvo 
diferencias significativas respecto a Tricovel ® y el Testigo durante los 90 días de 
tratamiento asociado en Agave cupreata y Juniperus deppeana. 
 
La confirmación de la presencia de estructuras de Trichoderma en la rizósfera de las plantas 
de Juniperus deppeana y Agave cupreata, son indicios de que es posible su empleo en 
campo para la asociación de estas especies de importancia forestal. 
 
 
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Arbustos potencialmente valiosos para la Restauracion Ecologica y la Reforestacion. Reporte 
Tecnico. CONABIO Instituto de Ecología, UNAM.  
 
 
 
 


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Evaluación de Trichoderma spp., en asociación con <i>Agave cupreata</i> y <i>Juniperus deppeana</i> en suelos del municipio San Juan Tzicatlacoyan, Puebla- México

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  1 MEMORIAS DEL V CONGRESO LATINOAMERICANO DE AGROECOLOGÍA Archivo Digital: descarga y online ISBN 978-950-34-1265-7 A1-191 Evaluación de Trichoderma spp., en asociación con Agave cupreata y Juniperus deppeana en suelos del municipio San Juan Tzicatlacoyan, Puebla-México.  Omar Romero-Arenas1, Miguel Angel Damian Huato1, José A., Rivera Tapia2, Fernando Aldana3, y Conrado Parraguirre Lezama4  1 Centro de Agroecología, Instituto de Ciencias; Benemérita Universidad Autónoma de Puebla (BUAP); 2 Centro de Investigación en Ciencias Microbiológicas, Instituto de Ciencias-BUAP; 3 Departamento de Química del Agua, Instituto de Ciencias-BUAP 4 Ingenieria Agroforestal, Campus Tetela-BUAP.   Resumen Se realizó un estudio para evaluar la importancia de la adición de cepas nativas de Trichoderma sp a la rizosfera de Juniperus deppeana y Agave cupreata, como alternativa para el establecimiento de una plantación forestal en San Juan Tzicatlacoyan. Estas especies están consideradas recuperadoras de suelos y presentan una amplia distribución en zonas áridas, así como rápido crecimiento y adaptación. El inoculante con base de grano de trigo resultó un excelente sustrato para la cepa (TS1P1) de Trichoderma sp donde se comparó con un inoculante comercial marca Tricovel®, con el fin de determinar la mejor adherencia entre especies forestales. Los resultados mostraron que  la cepa nativa (TS1P1) en la rizosfera de A. cupreata presentó mayor adherencia con mejor desarrollo en el índice de calidad de Dickson que fue de 1.34 a los 90 días de crecimiento siendo superior a Tricovel ® que solo obtuvo 1.09 en el mismo tiempo. La conformación de estructuras reproductivas, confirman la presencia de Trichoderma en la raíz de las plantas de J. deppeana y A. cupreata, mostrando que es posible su empleo para la asociación de estas especies de importancia forestal.  Palabras clave: cepas nativas de Trichoderma; rizosfera; importancia forestal; Índice de Dickson.   Abstract  A study was conducted to assess the significance of the addition of native strains of Trichoderma sp at rhizosphere of Juniperus deppeana and Agave cupreata, as an alternative to the establishment of a forest plantation in San Juan Tzicatlacoyan. These species are considered to recuperative soil and are widely distributed in arid areas, addition its rapid growth and adaptation. The inoculant based in wheat grain, it turned an excellent substrate for strain (TS1P1) of the Trichodrma sp where it was compared with a commercial inoculant "Tricovel®" brand, in order to determine the best addition between forest species. The results showed that the best addition is in the rhizosphere of A. cupreata with the native strain (TS1P1), also gives a better development in the Dickson quality index of 1.34 at 90 days of growth exceeding that Tricovel ®  1.09 in the same time. The formation of reproductives structures confirm the presence of Trichoderma at the root of the plants, showing that it is possible to use native strains to field for the association of these forest species. Keywords: native strains; rhizosphere; forest importance; Index Dickson.   Introducción  En el suelo existen diversos microorganismos con capacidad antagónica hacia microorganismos fitopatógenos, uno de los más estudiados es Trichoderma spp., debido a su fácil y rápido crecimiento en medio de cultivo. Éste hongo es un habitante natural del   2 MEMORIAS DEL V CONGRESO LATINOAMERICANO DE AGROECOLOGÍA Archivo Digital: descarga y online ISBN 978-950-34-1265-7 suelo y se caracteriza por su comportamiento saprófito, propiedad que le proporciona ventajas antagónicas, tales como antibiosis, competencia por nutrientes, micoparasitismo a otros hongos; permitiendo su selección y uso para el biocontrol en determinados cultivos agrícolas (Howell y Stipanovic, 1995). En México la pobreza constituye un factor esencial en la degradación de los suelos, sobre todo en el medio rural; a causa de la descapitalización sufrida por el sector durante décadas. La situación es tal, que ocho de cada diez familias rurales son pobres y de éstas cuatro se encuentran en pobreza extrema (Carabias, 1993). El deterioro de la tierra o la desertificación es un problema ecológico contemporáneo de mayor importancia en los países en desarrollo (Duarte, 1990). Este proceso ha sido definido como “la disminución o destrucción del potencial biológico de los recursos naturales, ocasionado por el mal uso y manejo de los mismos; lo que trae como consecuencia procesos degenerativos del medio físico, económico y social de las comunidades involucradas en su entorno” (Ortiz et al., 1994). Las plantaciones forestales se establecen con fines comerciales o de rehabilitación y pueden desempeñar varias funciones en el ecosistema. En los lugares donde se han establecido con fines de rehabilitación del medio ambiente, ayudan a la conservación del suelo y agua (Grubb, 1995).   Juniperus deppeana vegeta sobre una amplia variedad de suelos incluyendo los alcalinos, los de contenido moderado en sales solubles y con drenaje deficiente. Pero también es frecuente observarlos en suelos poco profundos y pedregosos. Vázquez Yanes et al., (1999) menciona que el Juniperus deppeana se asocia con Pinus cembroides,  Pinus leiophylla, Quercus rugosa, Quercus crassifolia, Agave sp., Cupressus sp., Platanus sp., Fraxinus sp. Los agaves son un grupo de plantas de gran importancia económica y ecológica para México (Gentry, 1982; Eguiarte et al., 2000). El género Agave cuenta con más de 160 especies, 75 % de las cuales se encuentran presentes en el país (Eguiarte et al., 2000).  De acuerdo a lo anterior, esta investigación tiene como objeto evaluar la adaptación de Trichoderma spp., asociado a plantas de Juniperus deppeana y Agave cupreata en suelos del municipio de San Juan Tzicatlacoyan Puebla, México, ya que no se han reportados datos de esta asociación inducida para la recuperación de suelos alargo plazo.   Metodología  Material biológico Los trabajos se llevaron a cabo en el laboratorio de micología del Campus Tetela BUAP y los trabajos de campo se establecieron en el municipio San Juan Tzicatlacoyan, Puebla. Se trabajo con la cepa nativa (TS1P1) de Trichoderma spp., la cual forma parte del cepario del laboratorio de micología del Centro de Agroecología-BUAP y la cepa comercial de la marca Tricovel ®. Las plántulas de Agave cupreata y Juniperus deppeana fueron proporcionadas por la Comisión Nacional Forestal, procedentes del vivero Xoyatlan Municipio Palmar del Bravo, Puebla, México, con 8 meses de edad y una altura promedio de 11.7 y 24.5 respectivamente.  Descripción del área de estudio  El Municipio de Tzicatlacoyan se localiza en la parte central del estado de Puebla, México, limita al norte con los municipios de Cuautinchán y Tecali de Herrera, al sur con San Juan Atzompa, Huatlatlauca y La Magdalena. Presenta un clima templado subhúmedo, con lluvias en verano y suelos con gran diversidad edafológica, identificándose el grupo de los Leptosoles como los más abundantes (INEGI, 2013).  Establecimiento de la plantación  La plantación se estableció bajo el sistema de cepa común en el predio ejidal bajo la tutela del C. Cupertino Rodríguez; consistió en establecer líneas paralelas, con la previa medición   3 MEMORIAS DEL V CONGRESO LATINOAMERICANO DE AGROECOLOGÍA Archivo Digital: descarga y online ISBN 978-950-34-1265-7 de curvas de nivel, donde se realizaron cepas de 40*40 cm con una profundidad de 40 cm, procurando que se depositen a un lado de la cepa los primeros 20 cm de tierra que es la más fértil y del otro lado los otros 20 cm más profundos, se retiró el envase de plástico sin dañar a la raíz y se colocó en la cepa, después de cocar la planta se relleno con la tierra más profunda procurando apisonar ligeramente para que tenga una mejor aireación y drenaje el suelo. Las plantas se distribuyeron en tres parcelas de diferentes medidas (Figura 1), pero con el mismo criterio de acomodo: Agave cupreata intercalado con un Juniperus deppeana siguiendo esta secuencia cada dos metros hasta completar las líneas de cada parcela.  Las líneas se intercalaron a razón de los siguientes tratamientos: ST (Sin Tratamiento), CTC (Con Tricovel ®) y CTN (Cepa TS1P1) esperando un total de 12 hileras por 16 plantas en el bloque 1, 20 hileras por 49 plantas en el bloque 2 y 8 hileras con 4 plantas para el bloque 3.                  FIGURA 1. Macro localización del municipio y micro localización de la zona a reforestar.  Inoculación de las Plantas con Trichoderma spp  En el caso de la cepa TS1P1 (Nativo), se colonizó incorporando 8 g de semillas de trigo con 109 conidios g-1 a la planta ya establecida, con ayuda de una pala de jardinería al costado derecho procurando una profundidad de 30 cm, con la finalidad de que los granos queden en contacto en todos los niveles de la raíz. Para la aplicación de Tricovel ® se seguirán las recomendaciones de la marca mezclando los granos de arroz con Trichoderma spp. En un bote de 25 L de agua para después dosificar 10 mL de solución a una concentración de 109 conidios g-1 a cada planta.   Análisis destructivo del material y determinación de Trichioderma spp Se realizaron 3 muestreos destructivos de 15 plantas por tratamiento, al término de 90 días, cuidadosamente retirados del suelo con ayuda de pala derecha procurando no dañar el sistema radical. Las planas de Agave cupreata y Juniperus deppeana se observaron al microscopio óptico, en presencia de suelo; para observar la presencia de estructuras de Trichioderma spp., para determinar la relación inducida entre la planta y el microorganismo. Esta observación se realizó a nivel raíz, para ello se tomaron tres niveles a) alto “el más cercano al cuello de la raíz b) intermedio c) bajo “el segmento más cercano a la cofia de la raíz”. Además se retiró 10 g de suelo cercano a la raíz para observar la coloración del suelo y las muestras fueron observadas al microscopio a 10x, 40x.   1 3 2   4 MEMORIAS DEL V CONGRESO LATINOAMERICANO DE AGROECOLOGÍA Archivo Digital: descarga y online ISBN 978-950-34-1265-7  Determinación del porcentaje de viabilidad de Trichoderma spp., en suelo  Para la determinación del porcentaje de viabilidad de esporas, se recolectó 10 g de suelo de cada uno de los tratamientos evaluados a una distancia de 10 * 40 cm de profundidad. Se realizaron diluciones seriadas decimales con 1 g hasta llegar a la concentración 1x109. Las muestras de la concentración de esporas de cada suspensión obtenida se realizaron con la ayuda de una cámara hematimétrica de Neubauer (Lumycite, Propper, Manufacturing Co. Inc. Long Island, NY). El conteo en la cámara se realizó cuatro veces para cada tratamiento y repetición. Posteriormente se determinó la viabilidad de las esporas, en cajas Petri de 9 cm de diámetro con medio de cultivo papa dextrosa agar (PDA), donde se inocularon 100 esporas contenidas en 20 μL por caja. A las 48 horas posteriores a la siembra, se contabilizó el número de unidades formadoras de colonias (ufc) germinadas (Romero, 2007).   Análisis estadístico  Con los datos que se obtuvieron de las variables se realizó la separación de medias, prueba de Tukey (α=0.05), para evaluar por especie, por periodo y por tratamiento, para ello se utilizó el programa SPSS®, además de evaluar el Índice de Calidad de Dickson a los 90 días de ambas especies forestales.   Resultados y discusiones  La determinación del porcentaje de supervivencia de las cepas TS1P1 en comparación con Tricovel ® a los 90 días inoculación mostró que el comportamiento de Agave cupreata asociado a ambos tratamientos, donde el establecimiento de la cepa TS1P1 presentó en DR 0 cm el 100% de presencia mientras que Tricovel ® alcanzo el 50% de colonización superando en DR10 cm y DR20 cm a TS1P1 alcanzando el 25 y 10% respectivamente (Fig. 1). Para Juniperus deppeana la cepa TS1P1 DR0 cm no disminuyó sus niveles de colonización, manteniendo el 100% en la rizosfera. El tratamiento con Tricovel ® no presentó desarrollo en DR20 cm (Fig. 2 y 3).                    La determinación del porcentaje de viabilidad de cada uno de los tratamientos a las 48 hrs., presento 13 UFC para la Cepa TS1P1 con Juniperus deppeana, 16 UFC para la Cepa FIGURA 2. Comportamiento de TS1P1 Y Tricovel ® a los 90 días de crecimiento en Agave cupreata.  FIGURA 3. Comportamiento de TS1P1 Y Tricovel ® a los 90 días de crecimiento en Juniperus deppeana.    5 MEMORIAS DEL V CONGRESO LATINOAMERICANO DE AGROECOLOGÍA Archivo Digital: descarga y online ISBN 978-950-34-1265-7 TS1P1 asociado a Agave cupreata, 8 UFC para la cepa Tricovel® con Juniperus depeana y 1 UFC para la asociación Cepa Tricovel ® con Agave cupreata.   El Índice de Calidad de Dickson se calculó a los 90 días de inoculación en plantas de Agave cupreata y Juniperus deppeana, donde la prueba de Tukey presenta diferencias significativas, en el caso de Agave cupreata presenta la conformación de 2 grupos: el grupo “a” TS1P1 con los niveles altos en diferencia al grupo “b” que fueron Tricovel ® y el testigo (Tabla 1). En el caso de Juniperus deppeana, los tratamientos como el testigo mostraron diferencias significativas; siendo TS1P1 la cepa con los valores más altos. Se presenta la conformación de 3 grupos: el grupo “a” TS1P1 con los niveles altos en diferencia al grupo “b” Tricovel ® y el grupo “c” testigo (Tabla 1).  Estos resultados confirman que el biocontrol de hongos fitopatógenos y la biofertilización empleando Trichoderma spp., es un método utilizado en diversos cultivos en diferentes partes del mundo, sin embargo el uso de cepas comerciales presenta dificultades con su persistencia en el suelo, debido a factores como la genética de los aislamientos, las condiciones del medio ambiente (González et al., 1999), sin embargo, el empleo de cepas mas adaptadas a las condiciones agroecológicas de la región y que cuenten con la capacidad conjunta de biocontrol y biofertilización presentan mayor adaptación al medio (Kleifeld y Chet, 1992; Michel et al., 2001) por estas razones es importante la selección de aislamientos nativos mejor adaptados a las condiciones edafoclimáticas de la zona especifica donde serán utilizados.              TABLA 1. Índice de Calidad de Dickson a los 90 días de inoculación.  Tratamientos N Agave cupreata Juniperus deppeana b a c b a Testigo 15 1.094  0.194   Tricovel ® 15 1.099   0.269  TS1P1 15  1.345   0.343 Sig.  0.651 1.000 1.000 1.000 1.000  Las especies de Trichoderma incrementaron el crecimiento radical y el desarrollo de las plantas. Kleifeld y Chet (1992) atribuyen el efecto sobre el crecimiento no únicamente a la protección contra patógenos, sino también a la presencia de un factor regulador de crecimiento. Alatomare et al., (1999) señalan que T. harzianum posee la habilidad para solubilizar varios nutrientes de las plantas de sus fases minerales insolubles o escasamente solubles mediante mecanismos quelatantes y reductores; debido a estos mecanismos es que los fosfatos (principalmente de calcio) Fe, Cu y Zn suelen ser más asimilables por las plantas, de ahí que el empleo de las cepas nativas pueden representar importantes ventajas para la nutrición del cultivo.    Conclusiones  El desarrollo de las unidades formadoras de colonias de TS1P1 fueron más altas en comparación con Tricovel® en ambas plantas con 13 UFC para la Cepa TS1P1 con Juniperus deppeana, 16 UFC para la Cepa TS1P1 asociado a Agave cupreata, 8 UFC para la cepa Tricovel® con Juniperus depeana y 1 UFC para la asociación Cepa Tricovel ® con Agave cupreata.     6 MEMORIAS DEL V CONGRESO LATINOAMERICANO DE AGROECOLOGÍA Archivo Digital: descarga y online ISBN 978-950-34-1265-7 De acuerdo a la prueba de Tukey, el Índice de Calidad de Dickson en la cepa TS1P1, tuvo diferencias significativas respecto a Tricovel ® y el Testigo durante los 90 días de tratamiento asociado en Agave cupreata y Juniperus deppeana.  La confirmación de la presencia de estructuras de Trichoderma en la rizósfera de las plantas de Juniperus deppeana y Agave cupreata, son indicios de que es posible su empleo en campo para la asociación de estas especies de importancia forestal.   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Evaluación de Trichoderma spp., en asociación con <i>Agave cupreata</i> y <i>Juniperus deppeana</i> en suelos del municipio San Juan Tzicatlacoyan, Puebla- México

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