GONÇALVES, A. O.

LUCIA JUNIOR, T.

MONDADORI, R. G.

PEGORARO, L. M. C.

PRADIEÉ, J.

SANTOS, E. C. da S.

VIEIRA, A. D.

Portuguese

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R193 - EMBRIOLOGIA, BIOLOGIA DO DESENVOLVIMENTO E FISIOLOGIA DA REPRODUc;:MMODULACM DA EXPRESSAO GENICA DE FATORES DE CRESCIMENTO UTERINOS PELO EMBRIAO BOVINOALAN DIEGO BEZERRA LIRA 1;ABIMAEL ESTEVAM SILVA JUNIOR2; LUCIANA ALVES FATIMA3; LAWRENCE DE OLIVEIRA BARROS4;PAULA DE CARVALHO PAPAs; DANILA BARREIRO CAMPOS6Na maloria das especies as bases moleculares da comunicalfao materno-fetal nao estao bem definidas e os estudos relacionados a modulalfaodos eventos uterinos pelo embriao sao limitados. Kashiwagi et al. (2007, Kashiwagi A., Endocrinology 148,4173-4184) demonstraram que 0embriao de camundongo tem papel ativo no estabelecimento do ambiente uterino durante a implantalfao, regulando 0 desenvolvimento ediferencialfao do endometrio. A observalfao de que em bovinos as caryjnculas do como uterino gestante tem maior desenvolvimento do que as docomo nao-gestante e que no caso de gestalfoes de embrioes produzidos in vitro diversas anomalias sac detectadas, incluindo insuficientedesenvolvimento e vascularizalfao caruncular, nos levaram a hipotese que nao so os hormonios ovarianos controlam 0 desenvolvimentocaruncular, mas tambem fatores fetais estao envolvidos. 0 objetivo do presente estudo foi investigar a modulalf3o do embriao bovino sobre aexpressao genica dos fatores de crescimento VEGF e bFGF e seus receptores em carunculas uterinas. Carunculas do como gestante e nao-gestante foram coletadas aos 35 dias de gestalfao e 0 RNA total fol isolado usando 0 reagente Trizol® (Invitrogen, Carlsbad, USA) e colunasespecificas para extralfao de RNA. As amostras foram tratadas com'DNase e a transcrilfao reversa foi realizada utilizando 0 kit Superscript III(Invitrogen, Carlsbad, USA) e 1IJg do extrato de RNA. A expressao doVEGF e seus receptores Flt-1, ~R, bem como do bFGF e seus receptoresR1, R2 e R4 foi determinada por PCR em tempo real, utilizando-se como controle endogeno a tubulina. Os dados foram expressos em relalf30 atubulina e calculados pelo metodo do L\L\Ct com correlfao pela eficiencia de amplificalfao. A analise dos resultados demonstrou que os niveis deexpressao do bFGF e do R2, foram significantemente menores em carunculas do como gestante quando comparadas as carunculas do comonao-gestante, nao havendo varialfao na expressao dos receptores R1 e R4, bem como do VEGF e dos receptores Flt-1 e KDR. Os fatores decrescimento VEGF e bFGF sac descritos como os mais importantes controlando a angiogenese na placenta, no entanto, Mingju et al. (2006,Mingju C., Matrix Biology 25,342-354) demonstraram que em celulas da granulosa 0 bFGF nao altera os niveis de proliferalfao celular e inibe aexpressao de genes relacionados a remodelalfao tecidual. Desta forma, a redulfao da expressao do bFGF e seu receptor R2 em carunculas docomo gestante poderia estar associada a intensa remodelalfao tecidual ocorrida durante 0 processo de placentalfao. Os resultados sugerem que 0embriao bovino pode estar envolvido no processo de desenvolvimer;lto caruncular atraves da modulalfao da expressao genica de fatores decrescimento uterinos.R194 - EMBRIOLOGIA, BIOLOGIA DO DESENVOLVIMENTO E FISIOLOGIA DA REPRODUc;:MNOVO MEIO PARA UTILIZACAo DO BRILLIANT CRESYL BLUE NA SELECAO DE 06CITOS PARA PRODUCAO IN VITRO DE EMBRICESSUiNOS • DADOS PRELIMINARESELISA CAROLINE DA SIL.VASANTOS1; JORGEA PRADlEE2; ALEXANDER OLIVEIRA GONCALVES3; RAFAEL GIANELA MONDADORI4;THOMAZ LUCIA JRs; ARNALDO DINIZ VIEIRA6; L1GIA MARGARETH CANTARELLI PEGORAR071,2,3,4,5,6UFPEL,PELOTAS, RS, BRASIL; 7EMBRAPAlCPAGT, PELOTAS, RS, BRASILPalavras-chave: brilliant cresyl blue; oocitos suinos; meio de manutenlfaoA selelfao de oocitos competentes contribui para 0 aumento da produlfao embrionaria in vitro. Dentre os metodos de sele9ao disponiveis, 0 BrilliantCresyl Blue (BCB) e um corante de viabilidade celular que determina a presenlfa de glicose-6-fosfato desidrogenase. Esta enzima encontra-seativa em oocitos em crescimento e inativa naqueles que tiveram seu crescimento completo. Sendo assim, oocitos que coram sob alfao do BCBsac considerados mais competentes, pois ja atingiram seu crescimento completo. Este metodo de selelfao ja foi testado em varias especies, noentanto, sua eficiencia ainda e contraditoria. Nos estudos em que a exposilfao ao corante resultou em queda de viabilidade oocitaria, sugere-seque 0 meio de manutenlfao (PBS) e 0 tempo de exposilfao durante 0 processo de coloralfao sejam os responsaveis por diminuir a viabilidadeoocitaria. Os objetivos deste estudo foram testar 0 "porcine zygote medium" modificado (PZM-4m) para a coloralfao de oocitos suinos com 0 BCB,bem como reduzir 0 tempo de exposilfao ao corante de 90 para 60 minutos. Foram utilizados 388 complexos cumulus oocito (CCOs) procedentesde ovarios de abatedouro, distribuidos nos meios contendo 26IJM de BCB em meio PZM-4m (n=133), PBS (n=142) e controle (PZM-4m sem BCB,n=113). Os CGOs foram mantidos durante 60 min em sOlulfao de BCB, a 390 C. Apos isso, foram separados em 5 grupos conforme reaifao aocorante: PZM-4m corado e nao corado, PBS corado e nao corado e controle. Apos a exposiifao ao corante e seleifao, todos os CCOs foramsubmetidos a maturalfao in vitro. Nas primeiras 24h a MIV foi conduzida em meio PZM4-m contendo EGF, LH, FSH, AMPc e fiuido folicular suino.Decorrido este perfodo, permaneceram por mais 24h, no mesmo meio, porem, sem hormonios e sem AMPc. A maturaifao nuclear foi avaliada comHoeschst (Sigma®H33342), atraves de microscopia de epifiuorescencia. Foram c1assificados como maturos os oocitos em metafase II (Mil). Osdados foram comparados pelo teste qui-quadrado. A taxa de Mil foi de 38% no controle (n=113), 23% no PZM-4m corado (n=91), 7% no PZM-4nao corado (n=42), 24% no PBS corado (n=82) e 19% no PBS nao corado (n=60). Os resultados mostram que os meios testados podem serutilizados para coloralfao com BCB. A taxa de MIV no grupo PZM-4m nao corado foi inferior ao controle (P<0,05). Esses resultados preliminaresmostram que 0 BCB aliado ao meio PZM-4m e um periodo de exposiifao de 60 minutos, podem ser usados na seleifao de estruturas maiscompetentes visando a produifao in vitro de embrioes suinos. Visando a confirmaifao da informalfao serao realizadas mais repetilfoes.

Novo meio para utilização do Brilliant Cresyl Blue na seleção de oócitos para produção in vitro de embriões suínos: dados preliminares.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/bitstream/doc/903822/1/Digitalizar0072.pdf

Novo meio para utilização do Brilliant Cresyl Blue na seleção de oócitos para produção in vitro de embriões suínos: dados preliminares.

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