BALDANI, J. I.

ROUWS, L. F. M.

SCHWAB, S.

SOUZA, M. L. da C.

Portuguese

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    Categoria: Iniciação Científica Núcleo temático: ABC  Marcação de Bradyrhizobium spp. com proteína verde fluorescente  Mahyne Lopes da Cunha Souza1, Stefan Schwab2, José Ivo Baldani2, Luc Rouws2 1Graduanda de Agronomia, UFRRJ, mahynelopes@yahoo.com.br; 2Pesquisador Embrapa Agrobiologia.   ............................................................................................................................................................................................................  A marcação de microrganismos com fluorescência é uma ferramenta poderosa para estudo dos mesmos em interação com plantas mediante métodos de microscopia, por exemplo. Existem ainda poucos trabalhos aplicando a transformação com genes de fluorescência a espécies de Bradyrhizobium, embora um trabalho recente apresentou uma série de novos plasmídeos para essa finalidade (Ledermann et al., 2015). B. sacchari é uma espécie atípica de Bradyrhizobium por ter sido isolada de raízes de cana-de-açúcar, uma gramínea, por apresentar a capacidade de nodular leguminosas e, também, de fixar nitrogênio em vida livre. O objetivo desse estudo foi adaptar os plasmídeos e procedimentos descritos por Ledermann e colaboradores para uso em B. sacchari BR10280T. Inicialmente, um protocolo de conjugação para Bradyrhizobium foi estabelecido, onde a estirpe modelo B. diazoefficiens USDA 110T, naturalmente resistente a cloranfenicol, foi empregada como receptora. Como doadora usou-se Escherichia coli estirpe S17-1 carregando o plasmídeo pRJPaph-bjGFP, que carrega um gene gfp e um gene codificando resistência ao antibiótico tetraciclina (TcR). Para a conjugação, a estirpe doadora foi cultivada em meio LB líquido contendo Tc (20 µg/mL) à 37°C sob agitação durante 24 h, enquanto qu e a estirpe receptora foi cultivada em meio líquido TY à 30°C durante 96 h. Posteriormente, as duas estirp es foram misturadas e alíquotas de 25 µL foram depositadas em placa com meio YMA e, mantidas à 30°C. Após 48 h, a massa de células obtidas foi diluída seriadamente e as diluições plaqueadas em meio (YMA) contendo tetraciclina e/ou cloranfenicol de acordo com a necessidade. Colônias com características do gênero Bradyrhizobium cresceram em placas contendo cloranfenicol e tetraciclina, indicando o sucesso do processo de conjugação e a absorção do plasmídeo pRJPaph-bjGFP pela receptora, como também a ausência de crescimento da doadora nas mesmas condições. Quando investigados no microscópio confocal a laser, as células observadas se mostraram verdes-fluorescentes, confirmando o sucesso da marcação. Atualmente, uma versão modificada do plasmídeo, designado pBSGFP, vem sendo testada para a transformação de B. sacchari BR10280T.  Palavras chave: GFP, conjugação, cana-de-açúcar. 

Marcação de Bradyrhizobium spp. com proteína verde fluorescente.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/bitstream/doc/1120335/1/MarcacaodeBradyrhizobiumsppcomproteinaverdefluorescente.pdf

Marcação de Bradyrhizobium spp. com proteína verde fluorescente.

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