GASPAROTTO, L.

HANADA, R. E.

MIRANDA, E. C. de

SILVA, G. F. da

SOUSA, N. R.

Portuguese

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20/05/2020 www.sbpcnet.org.br/livro/61ra/resumos/resumos/6087.htmwww.sbpcnet.org.br/livro/61ra/resumos/resumos/6087.htm 1/261ª Reunião Anual da SBPCC. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 1. Biologia MolecularCARACTERIZAÇÃO DE POLIGALACTURONASES DE MYCOSPHAERELLA FIJIENSIS AGENTE CAUSAL DASIGATOKA-NEGRA DA BANANEIRA.Edil Correa de Miranda 1Luadir Gasparotto 2Rogério E. Hanada 3Nelcimar Reis Sousa 4Gilvan Ferreira da Silva 41. 1. Universidade do Estado do Amazonas - UEA2. 2. Laboratório de Fitopatologia - Embrapa Amazônia Ocidental3. 3. INPA - Instituto Nacional de Pesquisa da Amazônia4. 4. Laboratório de Biologia - Molecular-Embrapa Amazônia OcidentalINTRODUÇÃO:O fungo Mycosphaerella fijiensis Morelet é o agente causal da Sigatoka-negra, doença que atinge cultivos debananeiras causando grande prejuízo econômico para os agricultores. Os reflexos da doença são sentidos pelarápida destruição da área foliar, reduzindo-se a capacidade fotossintética da planta. Durante a patogênese osfungos secretam pectinases capazes de degradar a pectina que é um dos principais componentes da paredecelular vegetal, levando a maceração do tecido do hospedeiro. Entre as enzimas pectinolíticas destacam-se aspoligalacturonases (PG) que são hidrolases que atuam sobre o ácido poligalacturônico e pectina de baixo grau deesterificação. As PGs são classificadas em endopoligalacturonase (endoPG) e exopoligalacturonase (exoPG) deacordo com o mecanismo de ação no substrato. Os genes que codificam PGs podem ser regulados pelos fatoresde transcrição CreA relacionado a repressão catabólica e por PacC um repressor de genes que codificam proteínasque atuam em pH ácido e ativador dos que atuam em condições alcalinas. Em muitos fungos fitopagonênicos ainativação dos genes que codificam PGs tem revelado que essas proteínas tem um importante papel na virulência(Degrassi 2008). O presente trabalho teve como objetivo analisar e caracterizar as PGs codificadas por M.fijiensis.METODOLOGIA:As sequências dos genes que codificam Poligalacturonases foram identificadas no banco genômico de M. fijiensis(http://genome.jgi-psf.org/Mycfi1/Mycfi1.home.html) usando a ferramenta advancedsearch. As sequênciashomólogas foram localizadas no banco de dados NCBI por meio da ferramenta BLASTP (Astschul et al., 1997),onde foram obtidas mais 20 ortólogas, totalizando 25 proteínas para a serem analisadas. A análise de 800 paresde base (pb) da região promotora foi realizada com o intuito de detectar cis-elementos de ligação aos fatores detranscrição PacC e CreA. As proteínas deduzidas tiveram seu peso molecular e ponto isoelétrico (pI) determinadospelo programa ExPasy (http://ca.expasy.org/tools/pi_tool.html). O peptídeo sinal e os sítios de glicosilação foramlocalizados pelo software SignalP 3.0 (Bendtsen et al, 2004 ) e NetNGlyc 1.0, respectivamente. O alinhamento foirealizado no programa ClustalX 2.0 (Larkin et al 2007) e editado com auxílio do Bioedit(http://jwbrown.mbio.ncsu.edu/BioEdit/bioedit.htm). Para análise filogenética foi utilizado o programa Mega 4.0com robustez dos ramos determinada por bootstrap de mil réplicas (Kumar et al 2008).RESULTADOS:Foram identificadas cinco sequências que codificam PGs em M. fijiensis, sendo duas com homologia à endoPGs etrês com exoPGs, estes genes foram denominados de endopgMf1 e 2 e exopgMf 1, 2 e 3. A análise da regiãopromotora revelou a presença de consensos para os fatores de transcrição PacC e CreA em todos os genes. Emrelação à glicosilação, a proteína EndopgMf1 não apresentou nenhum sítio (NXT/S) e em ExopgMf2 foramencontrados 15 prováveis sítios. O Peptídeo sinal não foi localizado nas EndopgMf1 e 2, já as ExoPG1, 2 e 3apresentam peptídeo sinal de 16, 23 e 19 aa, respectivamente. Quanto ao ponto isoelétrico (pI), houve umcontraste entre as endoPGs, pois a EndopgMf1 tem seu pI de 8.85 enquanto que a EndopgMf2 de 4.27, asExoPG1, 2 e 3 apresentaram pI respectivamente 5.01, 5.90 e 4.86. O motivo RIK considerado assinatura paraPGs foi identificado em todas as PGs de M. fijiensis exceto em ExopgMf2, que apresentou (RFK) uma substituiçãode Isoleucina por Fenilalanina (I302F). O gráfico filogenético deixou claro a separação de EndoPGs das ExoPGsrevelando que endoMf1 está mais proximamente relacionada com endoPG de Aspergillus niger, enquanto que asexoPGs1 e 3 se agruparam no mesmo grupo que as exoPGs de Aspergillus fumigatos e Botrytis fuckeliana,respectivamente.CONCLUSÃO:A identificação de cis-elementos na região promotora de todas as PGs de M fijiensis indica uma potencialregulação dos genes por pH ambiental e repressão catabólica, principalmente em ExopgMf1 com três consensos20/05/2020 www.sbpcnet.org.br/livro/61ra/resumos/resumos/6087.htmwww.sbpcnet.org.br/livro/61ra/resumos/resumos/6087.htm 2/2para PacC e oito para CreA. A ausência de peptídeo sinal nas endoPGs 1 e 2 é um indicativo da possível ausênciade secreção destas proteínas. Todas as proteínas apresentaram a assinatura RIK, exceto a ExopgMf2, onde houveuma substituição de I-302- F, devido uma mutação do tipo transversão (substituição de A>T na posição 904).Instituição de Fomento: CNPqPalavras-chave: Fitopatógeno, Exopoligalacturonase, Fatores de Virulencia.

Caracterização de poligalacturonases de Mycosphaerella fijiensis agente causal da Sigatoka-negra da bananeira.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/bitstream/doc/1122441/1/6087.pdf

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