Edição dos resumos do XXI Annual Meeting of the Brazilian Embryo Technology Society (SBTE), Salvador, BA, ago. 2007

ANGHINONI, L. B.

DODE, M.

PEGORARO, L. M. C.

RHEINGANTZ, M. G. T.

SANTOS, B.

SILVA, P. S.

Portuguese

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Acta Scientiae Veterinariae 35(Supl. 3): 2007s1176EFEITO DO TEMPO DE MATURAÇÃO OVOCITÁRIA SOBRE A TAXA DE DESENVOLVIMENTO,A PROPORÇÃO SEXUAL E A CRIOTOLERÂNCIA DOS EMBRIÕES BOVINOS PRODUZIDOS INVITROPegoraro, L.M.C.1; Rheingantz, M.G.T.2; Silva, P.S.3; Santos, B.3; Anghinoni, L.B.1; Dode, M.41Laboratório de Reprodução Animal da Embrapa Clima Temperado. Br 392 km 78 CP 403 Pelotas 96001-970RS (ligia@cpact.embrapa.br); 2Prof. Adjunto do Instituto de Biologia da Universidade Federal de PelotasUFPel. 3Estagiárias do Laboratório de Reprodução Animal da Embrapa Clima Temperado. 4Embrapa Centro deRecursos Genéticos e Biotecnologia.O objetivo do experimento foi avaliar o efeito de diferentes tempos de maturação ovocitária (18 e 24 horas) sobrea taxa de desenvolvimento embrionário, a proporção sexual e a criotolerância dos embriões bovinos produzidos invitro. Ovários de bovinos foram coletados em abatedouros e transportados em solução fisiológica adicionada deantibióticos até o laboratório. Foram puncionados os folículos de 2-8 mm com auxilio de agulha 18 G e seringa. Amaturação dos ovócitos de grau I e II foi realizada em meio TCM 199 adicionado de FSH/LH e antibióticos a 39°Ce 5% de CO2 durante o período de 18 horas (G1) ou 24 horas (G2). O método de seleção dos espermatozóidesutilizado foi o Gradiente de Percoll (90 e 45%) e o meio de fecundação utilizado foi o meio FERT-TALP. Decorridas18-24h da fecundação, os zigotos foram transferidos para o cultivo em gotas de 200 µl de meio SOFaa, sob óleomineral, em estufa a 39°C e 5% de CO2.. No oitavo dia após a fecundação, foram comparados os índices dedesenvolvimento embrionário nos dois grupos (% blastocistos de grau I e II/clivados). Os blastocistos de qualidadeI e II foram destinados à sexagem pelo método de PCR (G1 n=179; G2 n=159). Para a sexagem, os embriõesforam agrupados segundo a velocidade de desenvolvimento em lentos (blastocistos iniciais - Bi e blastocistos –Bl,G1 n=42; G2 n=37), intermediários (blastocistos expandidos – Bx; G1 n=101; G2 n=104) e rápidos (blastocistosem eclosão - Bh e blastocistos eclodidos – Be; G1 n=36; G2 n=18). A criopreservação dos blastocistos produzidos(G1 n=15; G2 n=20) foi efetuada pela vitrificação segundo a metodologia descrita por Vajta (Mol. Reprod. Dev.,51, p. 53-58, 1998). A viabilidade embrionária após descongelação foi avaliada mediante desenvolvimento durantecultivo in vitro por 24 (re-expansão) e 48 horas (eclosão). A análise estatística do experimento, quanto aodesenvolvimento embrionário, sobrevivência após descongelação, proporção macho:fêmea entre os tratamentos ede cada tratamento com a teoricamente esperada de 1:1, foi realizada pelo teste do χ2. Não houve diferençaquanto ao desenvolvimento embrionário (G1 42,8% vs G2 42,2%) e quanto à sobrevivência após descongelaçãodurante cultivo in vitro (G1 65% vs G2 75%; G1, 46,6% vs G2 45,5%; respectivamente para 24 e 48 horas decultivo). Houve diferença entre os tratamentos somente quando foram analisados os embriões de desenvolvimentorápido (50% versus 83,3% de machos no grupo 18 e 24 h respectivamente, P<0,05). Não foram detectadas diferençasentre os grupos de desenvolvimento lento e intermediário, assim como entre a proporção total de machos de cadatratamento e a teoricamente esperada. A redução do tempo de maturação para 18 horas pode ser incorporada àrotina do processo de produção in vitro de embriões bovinos sem alterações dos índices de desenvolvimento,criotolerância e proporção de machos obtida.EFFECT OF OOCYTES MATURATION CULTURE TIME TO DEVELOPMENT RATES, SEX RATIOAND FREEZABILITY OF BOVINE EMBRYOS PRODUCED IN VITROThe objective of this study was to evaluate the effect different maturation culture time (18 and 24 hours) todevelopment rates, sex ratio and freezability of bovine embryos produced in vitro. Ovaries .were collected fromcows at a local abattoir and brought to laboratory in physiological saline solution with antibiotics. The oocyteswere aspirated from 2-8 mm follicle with an 18 gauge needle and syringe. The maturation culture of oocytesgraded as I and II was performed in different time (G1 18 h and G2 24 h) in TCM 199 medium added with FH/LHand antibiotics at 39°C in a atmosphere of 5% CO2. The sperm preparation method used was the Percoll densitygradient (90 and 45%) and in vitro fertilization medium used was FERT-TALP. After fertilization period, thezygotes were transferred to culture dish containing 200 µl micro droplets SOFaa medium under a layer of mineraloil at 39°C in a atmosphere of 5% CO2.  The development rate (% blastocyst I and II/cleaved) was comparedamong treatments at eight day after fertilization   At the same day of culture, blastocyst graded as I and II wereharvested and the sex was examined by PCR reaction (G1 n=179; G2 n=159). According to their developmentalstages, they were distributed in three groups: Slow (initial Blastocyst, Bi; Blastocyst, Bl; G1 n=42; G2 n=37),Intermediate (expanding blastocyst, Bx; G1 n=101; G2 n=104) and Fast (hatched, Bh and hatching blastocyst,Be; G1 n=36; G2 n=18). Cryopreservation (G1 n=15; G2; n=20) was performed by vitrification followingmethodology described by Vajta (Mol. Reprod. Dev., 51, p. 53-58, 1998). Embryo survival after vitrification wasevaluated by in vitro culture during 24 (re-expansion) and 48 hours (eclosion). A χ2 analysis was performed tocompare development rates, survival after vitrification, sex ratios among different maturation time and eachtreatment from an expected ratio of 50:50. There was no difference between development rates (G1 42.8% vs G242.2%) and survival rates after vitrification during in vitro culture (G1 65% vs G2 75% at 24 h; G1, 46,6% vs G245,5%; at 48 h in vitro culture). There was difference between treatments only in the fast group (50% vs 83,3% ofmales in G1 and G2, respectively P<0.05). There was no difference among slow and intermediate group, as wellas total male proportion in each treatment and 50% expected sex ratio. The maturation time of 18 h may beincorporated in IVP bovine system without damage to development rates, freezability and sex ratio.

Efeito do tempo de maturação ovocitária sobre a taxa de desenvolvimento, a proporção sexual e a criotolerância dos embriões bovinos produzidos in vitro.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/bitstream/doc/189299/1/ID291831g.pdf

Efeito do tempo de maturação ovocitária sobre a taxa de desenvolvimento, a proporção sexual e a criotolerância dos embriões bovinos produzidos in vitro.

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