BEDENDO, G. C.

CONTREIRA, C. L.

COREZZOLLA, L. R.

KRABBE, E. L.

SUREK, D.

Portuguese

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 17  EFEITO DO FORMALDEÍDO NA QUANTIFICAÇÃO DE AMINAS BIOGÊNICAS EM FARINHAS DE ORIGEM ANIMAL  Larissa R. Corezzolla1, Gizelle C. Bedendo2, Diego Surek2, Cristiéle L. Contreira3,  Everton Krabbe4 1Graduanda em Farmácia pela Universidade do Contestado, Campus Concórdia, estagiária da Embrapa Suínos e Aves, Bolsista CNPQ/PIBIC, lari.rc@outlook.com 2Analista da Embrapa Suínos e Aves 3Doutoranda da Embrapa Suínos e Aves, Bolsista CAPES/UFPel 4Pesquisador da Embrapa Suínos e Aves  Palavras-chave: farinha de origem animal, formaldeído, aminas biogênicas.  INTRODUÇÃO A farinha de origem animal é um produto que pode ser composto por ossos e tecidos de animais, sangue, penas ou carcaças inteiras oriundas do abate de suínos, bovinos, ovinos e aves que apresenta interesses econômicos e nutricionais, proveitoso no uso em rações animais. Para evitar a degradação e a contaminação microbiana, no âmbito industrial, são adicionados alguns produtos como misturas de formaldeído, ácido propiônico, pirossulfito de sódio, ácido fórmico e outros agentes dispersantes. Neste sentido, o formaldeído juntamente com ácido propiônico é considerado um dos principais e mais eficientes antimicrobianos. Usualmente são utilizados cerca de 2 - 4kg do produto por tonelada de farinha, como relatado no estudo de Longo (2010). Contudo, a partir do abate, as proteínas animais decompõem-se facilmente e são convertidas em aminas biogênicas, os quais são compostos nitrogenados providos da descarboxilação de aminoácidos (2) que apresentam toxicidade química que acresce com o aumento da carga e do peso molecular (3), e estão presentes em diferentes concentrações em alimentos ricos em proteínas, bem como os próprios subprodutos de animais. As principais aminas biogênicas encontradas são histamina, cadaverina, feniletilamina, putrescina, triptamina, tiramina, espermina e espermidina. Uma das metodologias mais utilizadas para determinação destas aminas é descrito por Smella at. all (2003), que compreende o uso da extração por ácido perclórico, extração da gordura com hexano, seguido da derivatização por cloreto de dansila e quantificação pela técnica de cromatografia liquida acoplada o detector DAD. Essa metodologia apresenta uma série de vantagens, como baixos limites de detecção, ainda que não esteja livre das interferências de componentes das matrizes. Neste contexto e com base nas reações demonstradas nos estudos de Latypova (2013), Fernandez (1963), Falck (1962) e Binz (1940), que evidenciaram à formação de um complexo condensado que ocorre entre o formaldeído e aminas biogênicas primárias e secundárias, se faz necessário realização de estudo para verificar a interferência desta substância em análises quantitativas de aminas biogênicas em produtos onde o mesmo é aplicado.   MATERIAL E MÉTODOS A metodologia aplicada para determinação das aminas foi modificada a partir do descrito por Smella at all (2003). Foram utilizadas concentrações de 2µL, 4µL e 8µL de formaldeído dispostos em 28 tubos com mix de padrões de aminas biogênicas nas concentrações de 1µg/mL e 20 µg/mL e 1,7- diaminoheptano como padrão interno na concentração de 10µg/mL. Estas soluções foram derivatizadas com adição do tampão NaOH:NaHCO3 (2:3 até pH>14), em seguida, adicionou-se 2mL de cloreto de dansila (solubilizado em acetonitrila na concentração de 5mg/mL). A mistura foi agitada em vórtex (1min) e mantida em repouso no escuro por 1 hora, agitando as amostras em vórtex (30seg) na metade do tempo decorrido. Após isto foi adicionado 0,1mL de hidróxido de amônio e agitado em vórtex (30seg) e novamente deixado em repouso no escuro (30 min). Posteriormente foi realizada uma extração líquido-líquido das aminas biogênicas, com a adição de 1 mL de NaCl saturado, seguido de 0,5mL de éter etílico por três vezes, homogeneizando as duas fases para maior interação, separando a fase orgânica (sobrenadante) para outro tubo. Em seguida, evaporou-se por completo o éter com atmosfera inerte por nitrogênio e aquecimento em 55oC. O conteúdo seco foi ressuspendido em 1mL de acetonitrila, agitando em vórtex até solubilização e filtrado em seringas de 1mL utilizando filtro de 0,22um diretamente para os vials. As amostras foram quantificadas por meio de cromatografia líquida de alta eficiência – CLAE em HPLC utilizando coluna C18 (15 cm x 4,6) com acetonitrila e água no gradiente de fase móvel.    RESULTADOS E DISCUSSÃO A presença de formaldeído na quantificação de aminas biogênicas em amostras de farinhas de origem animal apresentou uma expressiva redução na concentração de algumas aminas e alterações nos perfis cromatográficos das amostras (Figura 1). As aminas biogênicas analisadas apresentaram diferentes respostas frente ao interferente, observou-se um efeito de decréscimo sobre a triptamina, putrescina, espermidina e espermina, sendo que as duas últimas, na presença de formaldeído, ficaram abaixo do limite de quantificação. Com base na Figura 2, observa-se que a triptamina apresentou um decréscimo gradativo de 35%, 45% e 57%, nas concentrações de 2µL, 4µL e 8µL de formaldeído, respectivamente. Enquanto a putrescina sofreu uma redução de 90% na concentração e, a espermidina e espemina sofreram uma redução de 97% a 99%, não tendo sido possível sua determinação. As demais aminas,  18  como a cadaverina, feniletilamina, histamina e tiramina tiveram uma pequena diminuição de suas concentrações, porém essas alterações não foram expressivas dado que são equivalentes ao coeficiente de variação estabelecido para o método para as aminas supracitadas que está entre 10 e 15%.  Acredita-se que estas alterações nas concentrações ocorrem pela reação de condensação entre o formaldeído e as aminas biogênicas, formando compostos estáveis que impossibilita a reação de derivatização pelo cloreto de dansila e consequentemente a quantificação destas pelo método proposto.  CONCLUSÕES Os resultados mostram que o formaldeído interfere na quantificação das aminas biogênicas em amostras de farinha de origem animal. Observou-se redução expressiva na quantificação das aminas triptamina, putrescina, espermina e espermidina, através da adição de formaldeído em soluções de mix de padrões, o que em condições proteicas implicaria em uma quantificação equivocada destas em amostras contendo o produto.  REFERÊNCIAS 1. LONGO, A. Flavio; SILVA, F. Ivone; LANZARIN, A. Márcio. A Importância do controle microbiológico em rações para aves. Em: Simpósio Brasil Sul de Avicultura - ll Brasil Sul Poultry Fair. Anais.... Chapecó, SC, 2010. p. 36 – 53.   2. TAMIM, N. M; DOERR, J. A. Effect of Putrefaction of Poultry Carcasses Prior to Rendering on Biogenic Amine Production. The Journal of Applied Poultry Research, 2003. 3. BARBOSA, L. Lucas. Características bromatológicas de farinhas de origem animal utilizadas em dietas para frangos. 2015. Curitiba.    4. SMELA, D. et al. Liquid Chromatographic Determination of Biogenic Amines in a Meat Product during Fermentation and Long-term Storage. Czech J. Food Sci., Brno, República Tcheca, 2003.  5. LATYPOVA, D.R; BADAMSHIN, A. G; LOBOV, A. N; DOKICHEV, V. A. Reaction of Ethyl Acetoacetate with Formaldehyde and Primary Amines. Russian Journal of Organic Chemistry, 2013. 6. FERNANDEZ J. E; BUTLER, G. B. The Reaction of Secondary Amines with Formaldehyde. The Journal of Organic Chemistry, 1963. 7. FALCK, B. HILLARP, N.A. THIEME, G. TORP, A. Fluorescence of Catechol Amines and Related Compounds Condensed with Formaldehyde. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 1962. 8. BINZ, H. A; REINHART, E. F; WINTER, C. H. The Reaction between Hydrogen Selenide, Formaldehyde, and Secondary Amines. Journal of the American Chemical Society, 1940.     Figura 1. Combinação de cromatogramas de aminas biogênicas com ausência (A) e presença (B) de formaldeído em amostra de farinha de origem animal.     Figura 2. Efeito das diferentes concentrações de formaldeído sob as principais aminas biogênicas afetadas. A B 

Efeito do formaldeído na quantificação de aminas biogênicas em farinhas de origem animal.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/bitstream/doc/1083274/1/final8748.pdf

Efeito do formaldeído na quantificação de aminas biogênicas em farinhas de origem animal.

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