Almeida, A.

Fonseca, S.

Gonçalves, M.

Lau, C.

Lima, M.

Queirós, M.L.

Santos, A.

Santos, M.

Teixeira, M.A.

Repositório Científico do Centro Hospitalar do Porto

2as JORNADAS DE INICIAÇÃO À INVESTIGAÇÃO CLÍNICA ___________________________________________________________________________________________________ P22. QUANTIFICAÇÃO DA PROTEÍNA DE FUSÃO BCR-ABL POR CITOMETRIA DE FLUXO Andreia Almeida1, Marta Gonçalves2, Ana Helena Santos2, Marlene Santos2, Sónia Fonseca2, Maria Luís Queirós2, Catarina Lau2, Maria Anjos Teixeira2, Margarida Lima2. 1. Escola Superior de Tecnologia da Saúde do Porto – Instituto Politécnico do Porto; 2. Laboratório de Citometria do Serviço de Hematologia Clínica do Hospital de Santo António, Centro Hospitalar do Porto.   Introdução A Leucemia Mielóide Crónica (LMC) é uma Doença Mieloproliferativa Crónica (DMPC) que tem origem numa translocação cromossómica que condiciona a fusão do gene BCR do cromossoma 22q11 com o gene ABL do cromossoma 9q34, levando à produção uma proteína quimérica (BCR-ABL) com actividade tirosina-cinase desregulada. O diagnóstico da LMC baseia-se tradicionalmente em técnicas citogenéticas (Hibridização In Situ por Fluorescência – FISH) e moleculares (Reverse Transcriptase Polimerase Chain Reaction – RT-PCR).  Objectivos Com este trabalho pretendeu-se alargar as técnicas de diagnóstico da LMC à área da Citometria de Fluxo (CF), através da detecção da proteína de fusão BCR-ABL. Material e Métodos Foram utilizadas amostras de sangue periférico (SP) de 5 indivíduos normais e 5 doentes com LMC para optimizar os procedimentos técnicos. Depois, foram estudadas mais 8 amostras de SP de indivíduos normais para definir os critérios de positividade e finalmente foram avaliadas amostras de SP de 7 doentes com LMC e 5 doentes com outras DMPC. Todas as amostras foram processadas com os reagentes “BCR-ABL Protein Kit”da Becton Dickinson Biosciences, San Jose, CA (BDB) e os resultados obtidos por CF foram comparados com os obtidos por FISH e RT-PCR Resultados e Conclusões A pesquisa da proteína BCR-ABL por CF apresenta uma grande especificidade e valor preditivo positivo muito elevado para o diagnóstico de LMC, sendo a sensibilidade e o valor preditivo negativo ligeiramente inferiores. As discordâncias entre a CF e a biologia molecular (resultado negativo por CF e positivo por RT-PCR) foram observadas nos casos com valores muito baixos de quantificação do gene BCR-ABL. Nos casos em que as amostras foram simultaneamente estudadas por FISH, os resultados foram semelhantes aos obtidos por CF. É no entanto necessário alargar o estudo a um maior número de doentes com DMPC para confirmar a especificidade e o valor preditivo positivo da CF e avaliar a correlação entre a quantificação do gene BCR-ABL (por RT-PCR) e da respectiva proteína de fusão (por CF), bem como para determinar o limite mínimo de detecção por CF. 

QUANTIFICAÇÃO DA PROTEÍNA DE FUSÃO BCR-ABL POR CITOMETRIA DE FLUXO

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