Evaluación y adaptación de un protocolo de extracción y amplificación de ADN en orquídeas conservadas en herbarios en un exsicado de oncidium ornithorhynchum con más de 200 años

Abstract

Las plantas preservadas en herbarios son una fuente importante de material vegetal, ya que permiten, en principio, acceder a información genética por el ADN que contienen, a partir del cual es posible resolver conceptos y problemas taxonómicos, evolutivos y de distribución de poblaciones. Sin embargo, se dispone de muy pocas referencias metodológicas para la adecuada extracción, amplificación y posterior secuenciación del material genético en plantas preservadas muchos años en estado seco. El presente estudio se realizó con el fin de evaluar y adaptar el protocolo de extracción de ADN propuesto por Mazo (2011), para determinar si este permitía extraer ADN de buena calidad y cantidad a partir de un exsicado de Oncidium ornithorhynchum colectado hace más de 200 años, siendo este ADN susceptible de amplificación por técnicas de PCR para una posterior secuenciación de fragmentos del gen matK con el propósito de ayudar a esclarecer su prioridad taxonómica. Se utilizaron 5 mg de tejidos provenientes de 4 exsicados de orquídeas de O. ornithorhynchum, 3 de ellos preservados en el Herbario de la Pontificia Universidad Javeriana, colectados entre los años 1968 y 2003, y uno de ellos preservado en el Herbario del Museo Nacional de Historia Natural de París, colectado entre 1801 y 1802. Se cuantificaron y midieron las relaciones de pureza ADN/proteína (260/280 y 260/230) de los extraídos, se obtuvieron los productos correspondientes después de su amplificación por PCR, los cuales fueron secuenciados exitosamente.Plants preserved in herbaria are an important source of vegetal material, because they allow to access to genetic information due to their DNA, from which is possible to solve evolutionary and taxonomic problems, and populations distribution. However, there are few methodological references for appropriate extraction, amplification and sequencing of the genetic material of dry plants preserved for many years. The present study was headed to evaluate and adapt the protocol PUJ BG Normas para la entrega de Tesis y Trabajos de grado a la Biblioteca General Junio de 2013 of DNA extraction proposed by Mazo (2011) to determine if this allowed to extract DNA of good quality and quantity from a specimen of Oncidium ornithorhynchum collected more than 200 years ago, being this DNA susceptible of amplification for PCR techniques and sequencing fragments of the gene matK in order to help to clarify their taxonomic priority. 5 mg of tissue from 4 dry specimens of orchids of O. ornithorhynchum were used, 3 of them are preserved in the herbarium of the Pontificia Universidad Javeriana, collected between 1968 and 2003, and one of them is preserved in the herbarium of the National Museum of Natural History of Paris, collected between 1801 and 1802. The relations of purity of DNA/protein were quantified and measured (260/280 and 260/230), and the products after PCR amplification were successfully sequenced. In conclusion, the protocol was adapted with success, achieving good DNA quality from the dry orchid with more than 200 years, and products of amplification and gene sequences. From these results a new protocol is proposed for extraction and amplification for dry plants up to 2 centuries old, and complement it with the use of taxonomic keys with new polymorphic genotypic markers (plastid and nuclear) for more complete classification of genres and species.Biólogo (a)Pregrad