Expresión como proteína recombinante de dos fragmentos de alta unión a células b de la glicoproteina 350 (gp350) del virus de epstein-barr en escherichia coli

Abstract

El virus de Epstein-Barr (HHV-4) es un herpesvirus con tropismo dirigido exclusivamente a células humanas. Luego de la infección inicial, los viriones producidos durante el ciclo lítico, infectan principalmente células B. Esto se lleva a cabo gracias al reconocimiento inicial de la glicoproteína gp350, la cual se une al receptor CR2 (CD21) de los linfocitos B. En este trabajo se obtuvieron como proteínas recombinantes, tres péptidos identificados como los directamente implicados en el contacto gp350-CR2. En el fragmento denominado VEBI se incluyeron dos péptidos ubicados hacia el extremo N-terminal de gp350, mientras que el fragmento II o VEBII incluye un péptido localizado cerca de la región C-terminal de dicha proteína. La expresión de estos fragmentos se realizó en Escherichia coli y luego de corroborar por secuenciación la integridad de los mismos se identificó la cepa GD1 como la cepa molde que dio lugar a las construcciones plasmídicas. Se obtuvo un 0.6% aproximadamente de proteína pura para VEBI y cerca del 9.4% para VEBII, del total de lisado bacteriano de E. coli. La proteína recombinante obtenida, que incluye los péptidos localizados hacia el extremo N-terminal, puede ser de gran ayuda para diferentes ensayos pues luego de su obtención en E. coli, su conformación estructural podría no diferir mucho de su conformación nativa. Sería necesario realizar más predicciones con la finalidad de demostrar lo anterior para VEBII pues no existe un predictor de glicosilación exclusivo para proteínas virales. Las proteínas recombinantes que incluyen los fragmentos de alta unión a células B, se lograron producir y purificar en buena cantidad, a partir de su expresión en un sistema heterólogo como lo es E. coli.The Epstein-Barr virus (HHV-4) is a herpesvirus with exclusive tropism for human cells. Following an initial infection, virions produced during the lytic replication cycle infect mainly B cells. This is mediated by the initial recognition of the gp350 glycoprotein, which binds to the B lymphocyte CRD receptor (CDD21). In this work, we obtained three peptides identified to be directly implicated in the gp350-CR2 contact as recombinant proteins. The fragment designated as EBVI contained two peptides located towards the gp350 s N-terminal region, while fragment II or EBVII included a peptide localized near the protein s C-terminal region. These fragments were expressed in Escherichia coli and following the verification of their integrity by sequencing, the GD1 strain was identified as the template for plasmid constructs. Approximately 0.6% of pure EBVI and nearly 9.4% of pure EBVII out of the total E. coli protein content were obtained. The recombinant protein harboring the N-terminal peptides can be useful for different assays since its structural conformation might not vary from its native conformation after being isolated from E. co li. More predictions would be necessary to corroborate the latter suggestion for EBVII since a glycosylation predictor exclusive for viral proteins is not available. The recombinant proteins harboring fragments binding with high ability to B cells were produced and purified in good quantities by expressing them in the E. coli heterologous system.Biólogo (a)Pregrad