Estandarización y aplicación de un método espectrofluorométrico para la identificación de inhibidores de la Proteasa Aspartica Secretada (SAP) de cándida ALBICANS, a partir de extractos de plantas de la familia melastomataceae y rubiaceae

Abstract

En el presente trabajo se realizó la estandarización de un método espectrofluorométrico para la medición de Sap de C. albicans, para lo cual se utilizo un espectrofotómetro de fluorescencia. Se determinaron las condiciones óptimas de funcionamiento del equipo y se hallaron las concentraciones ideales para los reactivos utilizados, también se estableció las condiciones del cultivo para la obtención de Sap. Con el fin de encontrar inhibidores de esta proteasa, se evaluaron extractos acuosos, butanólicos y en acetato de etilo de las plantas Polycurea lirystipula (Rubiácea), Miconia coronata y Clidemia hirta (Melastomatácea). Además de esta técnica, se utilizaron otras metodologías para corroborar la actividad de Sap y su inhibición, como fue la cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC), electroforesis SDS-PAGE e hidrólisis en medio de hemoglobina, mediante las cuales se monitoreó la producción de Sap durante un periodo de incubación de 26 horas, donde se observó el tiempo en que se inicia la secreción de Sap y se identificó el periodo de mayor producción. Se realizaron ensayos para verificar la acción inhibitoria de pepstatin A y se evaluaron los extractos aplicando las metodologías antes mencionadas, obteniendo como resultado inhibición de Sap por parte de los extractos acuosos de Polycurea lirystipula y Miconia coronata, y butanólicos de Polycurea lirystipula y Clidemia hirta, donde Polycurea lirystipula presentó los porcentajes más altos de inhibición