Páscoa, Ricardo N. M. J.

Rangel, António O. S. S.

Tóth, Ildikó V.

Vidigal, Susana S. M. P.

Portuguese

Repositório Institucional da Universidade Católica Portuguesa

SISTEMA DE INJECÇÃO  SEQUENCIAL PARA A DETERMINAÇÃO DE ETANOL EM VINHOSRicardo N. M. J. Páscoa, Susana S. M. P. Vidigal, Ildikó V. Tóth & António O. S. S. RangelEscola Superior de Biotecnologia, Universidade Católica Portuguesa,Rua Dr. António Bernardino de Almeida, 4200-072 Porto, PortugalObjectivo: Desenvolvimento de um sistema SIA baseado na reacção enzimática entre o etanol e a álcool desidrogenase (ADH) na presença de NAD+ com detecção espectrofotométrica a 340nm.Etanol + NAD+ ADH Acetaldeído + NADHAgradecimentos: I.V. Toth agradece à Fundação para a Ciência e Tecnologia  e á FSE (III Quadro Comunitário de Apoio) pela bolsa SFRH/BPD/5631/2001.MontagemE15 672438ADHNAD+CCVSB15 672438ERTAλFigura 1: Esquema do sistema desenvolvido. A, amostras ou padrões; ADH, álcool desidrogenase; NAD+, cofactor 20 mM; T, transportador tampão fosfato pH 9,5; B, bomba peristáltica; CC, canal central; VS, válvula de selecção; E, esgoto; R, reactor (100 cm); λ espectrofotómetro UV-Vis (340 nm)<3<6<2,2<2,3DPR (%)120263025Ritmo de amostragem (ens/ h)30150250,1Amostra (µL/ ens)0,70,50,61NAD+ (µmol/ ens)48------1,1ADH (U/ ens)em soluçãoimobilizadaimobilizadaem soluçãoEnzima---meio ferm.vinhovinhoMatrizLab onValvecSIAbFIA aSistema desenvolvidoParâmetro Figura 2: Comparação dos resultados obtidos para diferentes tipos de vinho com o método de referência.ConclusõesFigura 3: Perfil dos picos obtidos por injecção de azul de bromotimol (25 mg L-1); Di, coeficiente de dispersão.2,1791,7598,10,529±0,0060,539±0,0095tcriticotRecuperação%Valor obtido% (v/v)CRM 653a% (v/v)•Os resultados obtidos estão de acordo com o método de referência;•Em relação ao método de referência o tempo de ensaio e o consumo de amostra são muito inferiores;•O sistema desenvolvido apresenta vantagens sobre métodos automáticos jádescritos.Ciclo de ensaioReferências: a) Rangel & Tóth (1999) Am. J. Enol. Vitic., 50: 259-263; b)  Hedenfalk & Matiasson (1996) Anal. Lett., 29(7): 1109-1124; c) Chen & Ruzicka (2004) Analyst, 129:  597-601 .Envio para o detector18008Tempo de espera (60 s)08Envio para o reactor2008Aspiração da solução de NAD503Aspiração da enzima502Aspiração da amostra ou padrão1001DescriçãoVolume (µL)Posição daválvulaSistemaResultadosSobreposição de zonasAmostrasTransportadorAmostraNAD+Enzima0,000tempo, s01,5001,000AAtempo, s0,25060 1200 60 120Dtransp.= 1.8Damostra= 3.5DNAD+= 5.5DEnz.= 5.9a amostra de vinho certificada de valor nominal de álcool de 5% v/v 05101520250 5 10 15 20 25Mét.ref.( % v/v)SIA ( % v/v)05101520250 5 10 15 20 25ét.ref.(  v/v)SIA ( % v/v)CSIA = -0,66 (± 1,06) + 1,069 (± 0,076) x Cmát refR2 = 0,994

Sistema de injecção sequencial para a determinação de etanol em vinhos

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