Descrever a frequência de F. tularensis em Portugal, em amostras
humanas, artrópodes vetores e potenciais reservatórios como os lagomorfos
silvestres entre 1 de janeiro de 2011 e 15 de junho de 2015.FCT – Fundação para a Ciência e a Tecnologia (projeto
PTDC/SAU-ESA/104947/2008; C. Carvalho, bolseira de doutoramento
SFRH/BD/79225/2011

Carvalho, Carina

Carvalho, Isabel Lopes de

Núncio, Sofia

Repositório Científico do Instituto Nacional de Saúde

artigos breves_  n. 4162015número2ª série13Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge, IPDoutor Ricardo JorgeNacional de Saúde_Instituto Observações_ Boletim Epidemiológicowww.insa.pt_Tularémia: uma zoonose emergente?   Carina Carvalho1, Sofia Núncio1, Isabel Lopes de Carvalho1, 2 isabel.carvalho@insa.min-saude.pt(1) Laboratório Nacional de Referência de Doenças Infeciosas Transmitidas por Vetores; (2) Unidade de Resposta a Emergências e Biopreparação. Departamento de Doenças  Infeciosas, INSA._IntroduçãoA tularémia é uma zoonose causada pela bactéria Francisella tula-rensis, classificada pelo Centers for Disease Control and Preven-tion (CDC) como agente de Classe A (1,2).F. tularensis foi isolada pela primeira vez em 1912 na Califórnia por George McCoy e Charles Chapin e, desde então, detetada em várias espécies silvestres (1,3). Os lagomorfos e roedores são considerados os principais reservatórios de F. tularensis na natu-reza e assumem particular relevância face ao potencial risco de transmissão ao Homem, quer por contacto direto quer através dos vetores competentes, como carraças e mosquitos (4). A es-pécie F. tularensis é a mais patogénica do género Francisel la e engloba três subespécies (F. tularensis subsp. tularensis, F. tula-rensis subsp. holarctica e F. tularensis subsp. mediasiatica) com distribuições geográficas e graus de virulência distintos (5). F. no-vicida é reconhecida como uma quarta subspécie, embora esta classificação não tenha sido oficialmente adotada (6,7). Apenas as subespécies F. tularensis subsp. tularensis (Tipo A) e F. tula-rensis subsp. holarctica (Tipo B) têm uma distribuição geográfica expressiva na população humana (5). A principal via de infeção para o Homem é a cutânea. Outras vias in-cluem a conjuntiva ocular, as mucosas da boca e nariz e a via gas-trointestinal. O período de incubação é geralmente de três a cinco dias e a doença tem início agudo com febre (38-40ºC), cefaleias, fadiga, mialgias e arrepios de frio. Estão descritas várias formas clí-nicas de tularémia: ulceroglandular, glandular, oculoglandular, oro-faríngea, pneumónica, tifoidal e séptica. As duas primeiras são as mais comuns e encontram-se frequentemente associadas à picada de artrópodes ou ao contato com animais infetados (1, 8).Relativamente ao diagnóstico laboratorial, a cultura é o método de referência para o diagnóstico da tularémia e é realizada em condi-ções de biossegurança de nível 3 (BSL3) (1, 8). Os métodos mole-culares baseados na reação em cadeia da polimerase (PCR) têm sido aplicados com sucesso na identificação rápida e na classifi-cação de Francisel la, quando a cultura não é possível ou é nega-tiva. O PCR em tempo real TaqManTM (rtPCR) apresenta elevada especificidade e sensibilidade e baseia-se na amplificação de três sequências-alvo, nomeadamente o gene tul4, o gene fopA e o ele-mento de inserção ISFTu2. O rtPCR foi também desenvolvido para diferenciar subespécies e está direcionado para uma região vari-ável designada “ilha de patogenicidade” (9,10). Para genotipagem usam-se métodos mais discriminatórios como o MLVA (Multiple-locus Variable Number Tandem Repeat Analysis) (11).A vigilância epidemiológica da tularémia existe na Europa desde 2003 (Decisão n.º 2003/534/CE) (12). Apesar de ser considerada uma doença pouco frequente têm sido notificados surtos recentes em vários países, nomeadamente em Espanha, França, na Escan-dinávia, nos Balcans e na Hungria e casos esporádicos na Áustria, em Itália ou no Reino Unido (13).Desde 1998, o Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge (INSA) disponibiliza o diagnóstico laboratorial desta patologia. Em Portugal, F. tularensis subsp. holarctica foi detetada pela primeira vez em  2007, por métodos moleculares, numa amostra humana e num ixodídeo (14). Dentro desta linha de investigação têm vindo a ser realizados vários estudos epidemiológicos com o intuito de es-clarecer a prevalência desta doença em Portugal. _ObjetivoDescrever a frequência de F. tularensis em Portugal, em amostras humanas, artrópodes vetores e potenciais reservatórios como os la-gomorfos silvestres entre 1 de janeiro de 2011 e 15 de junho de 2015._Materiais e métodosNo período em estudo foram estudadas 5372 amostras de diferen-tes origens. O tipo e número de amostras, período de amostragem espécies identificadas e técnicas laboratoriais realizadas constam do quadro 1._Doenças Infeciosas17_Resultados e discussãoEntre 1 de janeiro de 2011 e 15 de junho de 2015, o INSA recebeu 93 amostras humanas para confirmação de diagnóstico de infeção por Francisella tularensis (tabela 1). Todas as amostras analisadas foram negativas, não havendo também casos clínicos notificados em Portugal desde 2011.De um total de 237 carraças estudadas, 15 espécimens (6.33%) das espécies Dermacentor reticulatus, D. marginatus, Hyalomma lusitanicum, I. ricinus e R. sanguineus foram positivas para a pre-sença de F. tularensis subsp. holarctica, sugerindo que, no nosso país, as carraças possam ser os vetores mais importante desta zoonose, tal como acontece na maioria dos países europeus (15). Os 4949 mosquitos investigados foram negativos para a presença de F. tularensis, indicando que estes artrópodes não parecem desempenhar um papel relevante na transmissão da tularémia ao homem em Portugal (16). F. tularensis subsp. holarctica foi recentemente detetada em lagomorfos silvestres pela primeira vez em Portugal. Das 93 amos-tras analisadas, seis (6.45%) foram positivas para a presença desta bactéria (15). Os lagomorfos são indicadores biológicos de tularé-mia, estando diretamente implicados na transmissão da doença ao homem, uma vez que estão entre as espécies cinegéticas mais caçadas na Peninsula Ibérica. Neste contexto, o papel dos lagomorfos como reservatório e potencial veículo de transmissão de tularémia necessita de ser clarif icado continuando a ser objeto de estudo.artigos breves_   n. 42015número2ª série13Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge, IPDoutor Ricardo JorgeNacional de Saúde_Instituto Observações_ Boletim Epidemiológicowww.insa.ptQuadro 1:      Descrição das amostras analisadas e técnicas laboratoriais realizadas no INSA, 1 de janeiro de 2011 - 15 de junho de 2015. HumanasMosquitosCarraçasLagomorfos (Fígado e baço)Tipo de amostras Nº amostras Período de amostragem93494923793-12 a 7 b2 c2011-Junho 20152007-2010Época cinegética 2011 e 2012Território nacionalTerritório nacionalDistritos de Vila Real, Bragançae ÉvoraDistrito de ÉvoraColuna1Coluna1; fenol: clorofórmioColuna1Coluna1Microaglutinação in house /PCRPCRPCRrtPCR--sdhA, VNTRrtPCRNº espéciesidentificadasOrigem geográficaMétodo de extração de DNAMétodo de deteçãoMétodo de tipificaçãoa) 12 espécies pertencentes a 5 géneros: Culx spp., Ochleroctatus spp., Anopheles spp., Cul iseta spp, Aedes spp. (número muito limitado de espécimens Aedes aegypti da Ilha da Madeira); b) 7 espécies pertencentes a 4 géneros Dermacentor spp., Ixodes spp., Rhipicephalus spp., Hyalomma spp.; c) 2 Oryctolagus cuniculus; Lepus granatensis; 1) Dneasy Blood and Tissue k i t (Qiagen, Hilden, Germany).Tabela 1:      Diagnóstico laboratorial de infeção por Francisella tularensis realizado no INSA, 1 de janeiro de 2011 - 15 junho de 2015.Método Ano de diagnóstico2011 2012 2013 2014 2015Serologia (microaglutinação in house)PCR211213114225050artigos breves_ n. 4_ConclusõesApesar da tularémia ser considerada uma doença pouco frequente, a elevada infeciosidade de F. tularensis e a sua fácil dispersão por aérossois ou através de água contaminada tornam este agente etio-lógico numa potencial arma de bioterrorismo (8). Acresce que a sua ampla distribuição geográfica e emergência, atualmente observada na Europa, conduziram ao reforço da vigilância e do conhecimento sobre a doença, sobretudo entre as populações de risco, nomeada-mente caçadores e profissionais de saúde (3). Assim, e do ponto de vista de saúde pública, o potencial impacto desta doença enquanto zoonose emergente não deve ser negligenciado. A par da sensibili-zação junto às populações de risco, a vigilância da tularémia nos animais sentinela é essencial para a monitorização e prevenção de eventuais surtos epidémicos, sobretudo em regiões onde o contato com potenciais reservatórios e vetores é mais frequente.AgradecimentosOs autores agradecem à Equipa REVIVE – Rede de Vigilância de Ve-tores, à FCT – Fundação para a Ciência e a Tecnologia (projeto PTDC/SAU-ESA/104947/2008; C. Carvalho, bolseira de doutoramento SFRH/BD/79225/2011) e à Doutora Cristina Furtado pela revisão científ ica do artigo.182015número2ª série13Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge, IPDoutor Ricardo JorgeNacional de Saúde_Instituto Observações_ Boletim Epidemiológicowww.insa.ptReferências bibliográficas:(1) Mandell GL, Bennett JE, Dolin R (eds). Mandell, Douglas, and Bennett's principles and practice of infectious diseases. 6th ed. New York : Elsevier/Churchill Livingstone, 2005. Vol 2, pp. 2674-83.(2) Centers for Disease Control and Prevention. Emergency Preparedness and Response [Em linha]. [consult. 9/7/2015] http://emergency.cdc.gov/f irsthours/bioterrorism.asp(3) Carvalho CL, Lopes de Carvalho I, Zé-Zé L, et al. Tularaemia: a challenging zoonosis. Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 2014;37(2):85-96. Review. (4) Gyuranecz M, Szeredi L, Makrai L, et al. Tularemia of European Brown Hare (Lepus europaeus): a pathological, histopathological, and immunohistochemical study. Vet Pathol. 2010;47(5):958-63. http://vet.sagepub.com/content/47/5/958.ful l.pdf+html (5) 5.Vogler AJ, Birdsell D, Price LB, et al. Phylogeography of Francisel la tularensis: global expansion of a highly f it clone. J Bacteriol. 2009;191(8):2474-84.  http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/ar ticles/PMC2668398/ (6) Johansson A, Celli J, Conlan W, et al. Objections to the transfer of Francisella novicida to the subspecies rank of Francisella tularensis. Int J Syst Evol Microbiol. 2010;60(Pt 8):1717-8.(7) Busse HJ, Huber B, Anda P, et al. Objections to the transfer of Francisella novicida to the subspecies rank of Francisella tularensis - response to Johansson et al. Int J Syst Evol Microbiol. 2010;60(Pt 8):1718-20.(8) WHO Guidelines on Tularaemia. Geneva: World Health Organization, 2007, p. 115http://www.who.int/csr/resources/publications/WHO_CDS_EPR_2007_7.pdf (9) Versage JL, Severin DD, Chu MC, et al. Development of a multitarget real-time TaqMan PCR assay for enhanced detection of Francisella tularensis in complex specimens. J Clin Microbiol. 2003;41(12):5492-9. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC309004/ (10) Kugeler KJ, Pappert R, Zhou Y, et al. Real-time PCR for Francisel la tularensis types A and B. Emerg Infect Dis. 2006;12(11):1799-801. http://wwwnc.cdc.gov/eid/article/12/11/06-0629_article (11) Vogler AJ, Birdsell D, Wagner DM, et al. An optimized, multiplexed multi-locus variable-number tandem repeat analysis system for genotyping Francisella tularensis. Lett Appl Microbiol. 2009;48(1):140-4. Epub 2008 Nov 19.(12) União Europeia. Comissão das Comunidades Europeias. Decisão n.º 2003/534/CE, de 17 de Julho de 2003 que altera a Decisão n.º 2119/98/CE do Parlamento Europeu e do Conselho e a Decisão n.º 2000/96/CE no que diz respeito às doenças transmissíveis enumeradas naquelas decisões e que altera a Decisão n.º 2002/253/CE no que diz respeito às definições de casos de doenças transmissíveis. JO. 23.7.2003: L 184/35-39.http://eur-lex.europa.eu/legal-content/PT/TXT/PDF/?uri=CELEX:32003D0534&from=PT (13) European Center for Disease Control and Prevention. Annual Epidemiologic Report: repor ting on 2010 surveil lance data and 2011 epidemic intel l igence data. Stockholm: ECDC, 2013, pp. 119-121.http://ecdc.europa.eu/en/publications/Publications/Annual-Epidemiological-Report-2012.pdf (14) de Carvalho IL, Escudero R, Garcia-Amil C, et al. Francisella tularensis, Portugal. Emerg Infect Dis. 2007;13(4):666-7. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2725955/ (15) Lopes de Carvalho I, Toledo A, Carvalho CL, et al. Francisel la species in ticks and animals, Iberian Peninsula. Ticks Tick Borne Dis. 2015 (em publicação).(16) Carvalho CL, Zé-Zé L, Duar te EL, et al. Screening of mosquitoes as vectors of F. tularensis in Por tugal. 7th International Conference on Tularemia, Breckenridge, Colorado, 2012. 

Tularémia: uma zoonose emergente?

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Repositório Científico do Instituto Nacional de Saúde

Scientific Repository of the National Health Institute Doutor Ricardo Jorge