Berruete Rodríguez, Isabel María

Cambra Alvarez, Miguel Angel

Collados Collados, Raquel

Cubero, J.

Garita Cambronero, J.

López, M.M.

Palacio Bielsa, Ana

Palazón Español, María Luisa

citaREA Repositorio Electrónico Agroalimentario

DETERMINACIÓN DE LA CAPACIDAD DE SUPERVIVENCIA Y TRANSMISIÓN POR SEMILLA DE Xanthomonas arboricolapv. pruni EN ALMENDROPalacio-Bielsa, A., Cambra, M. A., Berruete, I. M., Collados, R., Palazón, M. L., Cubero, J., Garita, J., López, M. M.(Proyecto INIA RTA 2011-00140-C03-03)SEGUNDA REUNIÓN DE COORDINACIÓN DE LA RED CYTED 112RT0441-Taller sobre producción de  plantas de alta calidad genético-sanitariaPelotas, Brasil, 5 a 7 noviembre 2013I V I ANSTI T UT O AL ENCI A NO DE NV ESTI GA CI ONES GRA RI A SXanthomonas arboricola pv. pruni(Mancha bacteriana de frutales de hueso y del almendro)Organismo nocivo de cuarentena en la Unión Europeaque afecta a frutales y ornamentales del género Prunus X. arboricola pv. pruni (Smith 1903) Vauterin et al.1995, es una Gammaproteobacteria perteneciente al orden Xanthomonadales, familia Xanthomonadaceaey género Xanthomonas Las células presentan una forma bacilar, de tamaño 0,2-0,8 µm de ancho y 0,8-1,7 µm de largo, y móviles por un solo flagelo polar Gram negativa, aerobia estricta, con las características propias de su género (Bradbury, 1984)Taxonomía de X. arboricola pv. pruniMorfología de X. arboricola pv. pruniJ. Garita (INIA) Multiplicación favorecida por temperaturas cálidas (19-28º C) y humedad elevada Bacteria epífita y endófita, que penetra por estomas o heridas en hojas, frutos y ramas Transmisión: lluvia, viento, técnicas culturales. Material vegetal, con o sin síntomas (frecuentes infecciones latentes). Por semilla (estudios en almendro, no publicados)Epidemiología de X. arboricola pv. pruni Frutos afectados carecen de valor comercial. Debilitamiento del árbol y disminución de producciónNo se dispone de información sobre los daños debidos a la enfermedad en España Sin embargo, en Estados Unidos se ha citado que puede causar entre 25 y 75% de frutos no comercializables, en función del año (Dunegan 1932) En Italia se ha estimado que las pérdidas pueden superar los 10.000 €/ha en ciruelo (Stefani 2010)Importancia de la enfermedadCiclo de la enfermedadPresente en casi todos los países productores de frutales de hueso (EPPO, 2013)África: Sudáfrica y ZimbabweAmérica: Argentina, Bermudas, Brasil, Canadá, EE. UU., Méjico y UruguayAsia: Arabia Saudí, República Popular Democrática de Corea (Corea del Norte), República de Corea (Corea del Sur), China, India, Japón, Líbano, Pakistán, Tayikistán y TaiwánEuropa: Bulgaria, Eslovenia, España, Francia, Holanda,Italia, Moldavia, Montenegro, Rumanía, Rusia, Suiza y UcraniaOceanía: Australia y Nueva ZelandaNo son correctas las citas de Japón y Sicilia (Italia) en almendro(Ishiyama, 1923; Ciccarone, 1958, 1959)EPPO Plant Quarantine Retrieval System (PQR), 2013https://www.eppo.int/DATABASES/pqr/pqr.htm+  Presente (cita nacional)• Presente (cita subnacional)Situación actual en España Primera detección en Extremadura, en 2002 en cirueloi  i   ,    i l DETECCIONES POSTERIORES (enfermedad emergente)• Comunidad Valenciana• Aragón• Cataluña• Navarra• Baleares• Previsibles nuevas detecciones en otras CC. AA.I  I    Detectada en ciruelo, melocotonero, nectarino, almendro y, puntualmente, en albaricoquero y cerezoSe están adoptado medidas de erradicaciónDetección cronológica de brotes de X. arboricola pv. pruni en España627 km833 kmBadajozValenciaAlicanteZaragozaHuescaLéridaNavarraMallorcaPORTUGALFRANCIAEspaña tiene una extensión de 504.645 km2Cultivo de frutales de hueso y almendro en EspañaSuperficies cultivadas y producción (FAOSTAT, 2011; MAGRAMA, 2012) Albaricoquero: 21.172 ha (12o productor mundial) Cerezo: 32.419 ha (5o productor mundial) Ciruelo: 15.097 ha (8o productor mundial) Melocotonero y nectarino: 79.617 ha (3er productor mundial)Almendro: 571.183 ha2O productor mundial y 1o de la UEEstudio de la supervivencia y transmisiónde X. arboricola pv. pruni en los procesos de multiplicación por semillaX. arboricola pv. pruni en hojas de almendroX. arboricola pv. pruni en frutos de almendroPrimeros estadíos Evolución de los síntomasPérdidas de cosechaCaída prematura de frutos Frutos adheridos al árbol tras recolecciónDisminución del rendimientoX. arboricola pv. pruni puede sobrevivirdurante el invierno en las momiasAlmendras con síntomas(4oC, 2 años) y sanas (control)Estratificación (4oC, 9 semanas) 50% perlita y arena estéril (humedad)GerminaciónPlántulas sin síntomas(4 a 7 semanas)Siembravermiculita estéril25oC día/21oC noche y 16 h luz PCR-tr (transportador ABC) (Palacio-Bielsa y col., 2011). Poblaciones estimadas mediante rectas de calibración de muestras inoculadas Aislamiento (cultivabilidad/viables) LPGA+cicloheximida(250 mg/l)  Análisis de secuencias multilocus de genes conservados en Xanthomonas (gyrB, dnaK, fyuA y rpoD) de una selección al azarde cepas aisladas de almendras para verificar la identidad de X. arboricola pv. pruni (J. Cubero y J. Garita, INIA, Madrid) Poder patógeno de una selección al azar de cepas aisladas de almendras y plántulas (inoculación en patrón de melocotonero GF-305)Técnicas de detección e identificaciónDistintos compuestos fenólicos en las diferentes partes de la almendra (epicarpio, mesocarpio, endocarpio, semilla) ANÁLISIS PCR-tr: preparación de las muestraspocos inhibidoresAlmendra enterainhibidoresSemillaAlmendra cascadainhibidores Machacado ligero y extracción de ADN para minimizar riesgo de falsos negativos en PCR-tr Lavado (método no destructivo) y extracción de ADN (Llop y col., 1999) para minimizar riesgo de falsos negativos en PCR-tr216 almendras con síntomas50 almendras sanas (control) *Congruencia: 31,7%-+00-6932+PCR-trAislamientoCongruencia: 97,7%-+00-5211+PCR-trAislamientoEstratificación 29 fallos de germinación187 almendras germinadas(101 analizadas por PCR-tr y aislamiento) * No se detectó X. arboricola pv. pruni en los controles sanosPCR-tr Y AISLAMIENTO-+AislamientoCongruencia: 80,2%PCR-tr111980-+CotiledónSiembra de 187 almendras86 fallos de nascencia101  plántulas sin síntomas-+AislamientoCongruencia: 75,2%PCR-tr102575-+Parte aéreaNo se detectó X. arboricola pv. pruni en los controles sanos La inoculación en GF-305 confirmó la patogenicidadde la selección de cepas estudiadas. Las cepas aisladas de las plántulas mantenían su poder patógeno en GF-305 Los análisis de secuencias multilocus de las cepas seleccionadas confirmaron su identidad como X. arboricola pv. pruniOTRAS TÉCNICAS UTILIZADAS0,99%1,98%0013,96%000101PostestratificaciónPreestratificaciónPoblaciones (ufc/ml)4,95%00010211,88%3,96%00,46%10316,83%8,91%1%0,92%10417,82%31,76%20,8%5,55%10532,67%40,59%63,4%53,7%10610,89%12,87%14,8%39,35%107Parte aéreaCotiledónPlántulasPoblaciones estimadas de X. arboricola pv. pruni(rectas de calibración PCR-tr) Las poblaciones de X. arboricola pv. pruni disminuyeron a lo largo de las distintas etapas del ensayoCONCLUSIONES I El éxito del aislamiento de X. arboricola pv. pruni en las almendras antes de estratificar fue el 97,7%, disminuyótras la estratificación (31,7% de muestras positivas), y se recuperó parcialmente en plántulas (80,2% de muestras de cotiledones positivas y 74,2% de partes aéreas, respectivamente). Mediante PCR-tr se detectó X. arboricola pv. pruniprácticamente en todas las muestras (100% de almendras antes y después de la estratificación, 98% de cotiledones y 99% de partes aéreas de plántulas, respectivamente).CONCLUSIONES II La dificultad del aislamiento de X. arboricola pv. prunien almendras estratificadas podría estar relacionada con la presencia de microbiota que interfiriera en su crecimiento, y no se debe descartar la posible inducción del estado VNC. Los resultados de este trabajo demuestran, por primera vez,  la supervivencia y transmisión de X. arboricola pv. pruni a través de semilla en almendro. Su detección a lo largo del ensayo mediante PCR-tr y aislamiento, pone de manifiesto el riesgo de dispersión del patógeno en la multiplicación por semilla   (estudios de variedades).¡¡GRACIAS POR SU ATENCIÓN!!

Determinación de la capacidad de supervivencia y transmisión por semilla de Xanthomonas arboricola pv. pruni en almendro

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