Cambra Alvarez, Miguel Angel

Palacio Bielsa, Ana

citaREA Repositorio Electrónico Agroalimentario

ASPECTOS FITOSANITARIOS DEL CULTIVO DEL AZAFRÁN DEL JILOCA: ENFERMEDADES… 29Aspectos fitosanitarios del cultivo del azafrán delJiloca: enfermedades de etiología bacterianaAna Palacio-Bielsa1, Miguel Cambra Álvarez21 Unidad de Sanidad Vegetal Centro de Investigación y Tecnología Agroali-mentaria de Aragón (C.I.T.A.), Av. Montañana, 930, 50059 Zaragoza (apa-lacio@aragon.es)2 Centro de Protección Vegetal, Av. Montañana, 930, 50059 Zaragoza(mcambra@aragon.es)1. Introducción: enfermedades de etiología bacteriana del cultivodel azafránLa principal enfermedad de etiología bacteriana del cultivo del aza-frán está causada por Burkholderia gladioli pv. gladioli Severini, 1913(ex Pseudomonas gladioli). B. gladioli pv. gladioli es una bacteria pató-gena que también afecta a Gladiolus spp., Freesia hybrida, diversas espe-cies del género Crocus, y otros miembros de la familia Iridaceae. AunqueB. gladioli pv. gladioli ha sido citada en América, Australia y algunos pa-íses de Europa (Hayward, 1983; Fiori et al., 2005) no existen referenciasde su presencia en España hasta el momento.Los síntomas producidos por esta bacteria consisten en manchas ypodredumbres en las hojas de la planta y en el cormo. Las hojas comien-zan a secarse en las puntas y se observa clorosis a lo largo de uno o ambosmárgenes de las mismas. Generalmente, las lesiones se centran en la zonabasal e inicialmente son de pequeño tamaño, brillantes y de color marrónrojizo. Posteriormente, las manchas aumentan de tamaño, presentandolos márgenes ligeramente elevados y hundidas en su centro, y adquierenun color marrón oscuro a negro. En estados avanzados de la enfermedad,las partes aéreas de la planta se pueden desprender del cormo con facili-dad. En el cormo, las lesiones aparecen como zonas hundidas, con unacoloración entre amarillenta y rojiza. Finalmente, el cormo queda flác-cido, liberando exudados inodoros al ser presionado. Las contaminacio-nes de B. gladioli pv. gladioli también pueden dificultar la propagación invitro de explantes de cormos de azafrán.Muestreos realizados en plantaciones de azafrán del Jiloca (años2008, 2009 y 2010)30 PROYECTO MEJORA INTEGRAL DEL CULTIVO DE AZAFRÁN DEL JILOCACon el objeto de determinar el estado fitosanitario en lo referente a lasinfecciones por bacterias fitopatógenas de las plantaciones de azafrán dela zona del Jiloca, se estudiaron parcelas situadas en las localidades deBlancas, Muniesa, Fuentes Claras, Peracense y Monreal del Campo, cul-tivadas tanto en secano como en regadío.Las prospecciones en campo se llevaron a cabo en el mes de marzomediante la observación visual de posibles síntomas en la parte aérea, elmuestreo de plantas enteras (incluyendo los cormos) y la realización delos oportunos análisis en laboratorio.Una selección de los cormos por su tamaño y ausencia de defectos antesde replantar permite una continua selección, incluso en ausencia de repro-ducción sexual, lo que puede conducir a la conservación de las mejores ca-racterísticas morfológicas y productivas. Por ello, en los meses de junio,julio y septiembre, se estudiaron cormos que habían sido desechados parasu resiembra por presentar alguna anomalía morfológica (destrío).2. Materiales y métodosSe realizaron observaciones del aspecto externo de la parte aérea y delos cormos. Las muestras que presentaban síntomas de flacidez o podre-dumbre, compatibles con una posible infección de origen bacteriano fue-ron analizadas mediante aislamiento en placas con medio de cultivo KingB (King et al., 1954). Los cultivos bacterianos obtenidos fueron purifica-dos e identificados mediante técnicas bioquímicas y análisis moleculares,utilizando para ello la amplificación del ADN mediante la reacción encadena de la polimerasa (PCR) y la secuenciación del ADN ribosómico16S. Para los análisis de PCR se utilizaron iniciadores específicos de B.gladioli (GLA-f / GLA-r), que amplifican un fragmento de 300 pares debases de la región intergénica 16S-23S rDNA (Furuya et al., 2002). Paraevaluar el poder patógeno de los aislados se realizaron ensayos de hiper-sensibilidad en tabaco y tomate. Para poder asociar los síntomas a la pre-sencia de una bacteria fitopatógena, se deberán cumplir los postulados deKoch, mediante la inoculación de cormos y, en su caso, el reaislamientode la bacteria a partir de los síntomas inducidos.3. ResultadosEn la parte aérea de las plantas no se observaron, en ningún caso, sín-tomas sospechosos de estar causados por una infección bacteriana. DeASPECTOS FITOSANITARIOS DEL CULTIVO DEL AZAFRÁN DEL JILOCA: ENFERMEDADES… 31un total de 476 cormos estudiados, únicamente 48 de ellos (10%) presen-taban síntomas de flacidez y podredumbre, compatibles con la posiblepresencia de bacterias fitopatógenas (Figura 1) (Tabla 1). Sin embargo,estos síntomas no coincidían plenamente con los descritos en la bibliogra-fía para la bacteria fitopatógena B. gladioli pv. gladioli y la observacióna la lupa binocular de los cormos permitió constatar la presencia de áca-ros en la zona de avance de las lesiones.En los cormos analizados en las campañas de 2008 y 2009, única-mente se logró el aislamiento de bacterias saprofitas, correspondientes ainfecciones secundarias oportunistas, asociadas a los ataques primarios deácaros o nematodos.En la campaña del año 2010, se obtuvieron cultivos bacterianos cuyascolonias presentaban una morfología similar a la del patógeno B. gladiolipv. gladioli, por lo que se procedió a su caracterización. Los resultados dela caracterización bioquímica coincidieron con los descritos para Pseudo-monas sp., pero no aquellos descritos para B. gladioli pv. gladioli. Losanálisis de PCR dieron resultados negativos. La secuenciación parcial delADN 16S mostró homología de secuencia con Pseudomonas cedrina(Behrendt et al., 2009). Contrariamente a lo esperado para la mayoríade las bacterias fitopatógenas, las pruebas de hipersensibilidad, tanto entomate como en tabaco, fueron negativas (Klement et al., 1964; Klement,1982). Todavía no se dispone de los resultados de las inoculaciones encormos.4. ConclusionesLos muestreos realizados en plantaciones de azafrán de diversas loca-lidades de la zona del Jiloca no permitieron detectar la presencia de labacteria fitopatógena B. gladioli pv. gladioli en los cormos analizados. Seha observado la existencia de otras bacterias saprofitas que son conside-radas como infecciones secundarias asociadas a ataques primarios de áca-ros u otros organismos. En cualquier caso, el porcentaje de cormosafectados es bajo.Aunque también se han identificado otras bacterias del género Pseu-domonas, su patogenicidad en azafrán todavía no ha podido ser determi-nada. Sin embargo, los resultados negativos obtenidos en la reacción dehipersensibilidad en plantas de tabaco y tomate no serían, en principio,compatibles con el carácter fitopatógeno de estas bacterias. Por tanto, los32 PROYECTO MEJORA INTEGRAL DEL CULTIVO DE AZAFRÁN DEL JILOCAdatos disponibles hasta el momento permitirían concluir la ausencia debacterias fitopatógenas en las plantaciones de azafrán de la zona del Ji-loca.5. Referencias bibliográficasBehrendt U., Schumann P., Meyer J.M., Ulrich A. (2009). Pseudomo-nas cedrina subsp. fulgida subsp. nov., a fluorescent bacterium isolatedfrom the phyllosphere of grasses; emended description of Pseudomonascedrina and description of Pseudomonas cedrina subsp. cedrina subsp.nov. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology59: 1331-1335.Fiori M. Virdis S., Schiaffino A., (2005). A bacterial disease of saffroncaused by Burkolderia gladioli and Pseudomonas spp. XII Congresso Na-zionale S.I.Pa.V.Scilla (RC).Furuya N., Ura H., Ilyama K., Matsumoto M., Takeshita M., Taka-nami Y. (2002). Specific oligonucleotide primers based on sequences ofthe 16S-23S rDNA spacer region for the detection of Burkholderia gla-diolii by PCR. Journal of General Plant Pathology 68: 220-224.Hayward A.C. (1983). Pseudomonas: The Non-Fluorescent Pseudo-monas. En: Plant Bacterial Diseases. Academic Press, Australia. pp. 107-135.King E.O., Ward M.K., Raney D.E. (1954). Two simple media for thedemonstration of pyocianin and fluorescein. Journal of Laboratory Cli-nical Medicine 44: 301-307.Klement K. (1982). Hypersensitivity. En: Phytopathogenic Prokaryo-tes, ed. M.S. Mount, G.H. Lacy. Vol. 2. Academic Press, New York. Pp.149-177.Kement K., Farkas G.L., Lovrekovich L. (1964). Hypersensitive reac-tion induced by phytopathogenic bacteria in the tobacco leaf. Phytopa-thology 54: 474-477.Fecha Localidad Nº muestras Nº muestras Nº muestrasestudiadas con síntomas positivasaJunio y julio 2008 BlancasFuentes Claras 127 46 0 (flora saprofita)MuniesaSeptiembre 2009 Blancas 284 0 0 (flora saprofita)BlancasMarzo 2010 Fuentes ClarasMonreal del CampoPeracense 65 2 0* (flora saprofita)TOTAL 476 48 0aAislamiento en medio KB e identificación de bacterias fitopatógenas.* Identificada como Pseudomonas sp.ASPECTOS FITOSANITARIOS DEL CULTIVO DEL AZAFRÁN DEL JILOCA: ENFERMEDADES… 33Tabla 1. Análisis de bacterias fitopatógenas realizados en cormos deazafrán del JilocaFigura 1. Síntomas en cormos de azafrán.a Aspecto externo de cormosSíntoma sospechoso (podredumbre blanda)bSíntoma sospechoso(podredumbre blanda) Aspecto normal34 PROYECTO MEJORA INTEGRAL DEL CULTIVO DE AZAFRÁN DEL JILOCA

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