ARAÚJO, E. de O.

MENDES, D. A. E.

MERCANTE, F. M.

NUNES, D. P.

SCALON, S. de P. Q.

VITORINO, A. C. T.

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EFEITO DA ADUBAÇÃO NITROGENADA NO DESEMPENHOFISIOLÓGICO DE SEMENTES DE MILHO INOCULADAS COMAzospirillum brasilense e Herbaspirillum seropedicaeÉrica de Oliveira Araújo(1), Danieli Pieretti Nunes(1), Fábio Martins Mercante (2), Antonio Carlos Tadeu Vitorino(3), Diego Augusto Espindola Mendes(4) Silvana de Paula Quintão Scalon(3)IntroduçãoNo agronegócio brasileiro a cultura do milho tem se destacado como uma das prin-cipais atividades. A área plantada com milho no Brasil na safra 2012/2013 foi de 156,5 milhectares com uma produção estimada de 72.569,9 mil toneladas de grãos (CONAB, 2013).Esta cultura é considerada uma das mais exigentes em fertilizantes para o seu desenvolvi-mento, destacando-se principalmente os nitrogenados (OHLAND et al., 2005).Entre os organismos de vida livre empregados na agricultura para biofertilização, asbactérias diazotróficas microaeróbias, dos gêneros Azospirillum e Herbaspirillum, se desta-cam por sua capacidade de fixar nitrogênio atmosférico e também por estimular o cresci-mento das plantas, de forma a permitir seu bom desenvolvimento, e quando associadas à ri-zosfera podem, contribuir com a adubação nitrogenada (CAVALLET et al., 2000). O efeito  do  Azospirillum spp.  e  do  Herbaspirillum spp.  no desenvolvimento  domilho e de outras gramíneas, tem sido pesquisado nos últimos anos, não somente quanto aorendimento  das  culturas,  mas  também  com  relação  às  causas  fisiológicas  que,1 Doutorando  (a)  em  Agronomia,  Universidade  Federal  da  Grande  Dourados,  Faculdade  de  CiênciasAgrárias, Rodovia Dourados/Itahum, km 12, Cidade Universitária, CEP 79804-970, Dourados-MS, Brasil.Caixa Postal 533.ericabb25@hotmail.com; danipiereti@gmail.com; (2) Pesquisador da Embrapa Agropecuária Oeste, BR 163, km 253,6, CEP 79804-970, Dourados-MS,Brasil. fabio.mercante@cpao.embrapa.br; (3) Professor da Universidade Federal da Grande Dourados, Faculdade de Ciências Agrárias, RodoviaDourados/Itahum, km 12, Cidade Universitária, CEP 79804-970, Dourados-MS, Brasil. Caixa Postal 533.antoniovitorino@ufgd.edu.br. (4) Graduando em Agronomia, Universidade Federal da Grande Dourados, Faculdade de CiênciasAgrárias, Rodovia Dourados/Itahum, km 12, Cidade Universitária, CEP 79804-970, Dourados-MS, Brasil.Caixa Postal 533. diegobetfuer@hotmail.com.[1]possivelmente,  aumentam  esse  rendimento,  esperando  que  a  aplicação  dessa  formaalternativa de adubo reduza a necessidade de aplicação de N fertilizante para a cultura. Recentemente,  estudos  têm  sido  realizados  no  sentido  de  avaliar  os  aspectosbenéficos da associação de bactérias diazotróficas com a qualidade fisiológica de sementes(ARAUJO et a. 2010; LEE et al., 2006; PINTO JUNIOR et al., 2012). Nessa perspectiva,objetivou-se  com  o  presente  trabalho  avaliar  o  efeito  da  adubação  nitrogenada  nodesempenho fisiológico de sementes de milho inoculadas com  Azospirillum brasilense eHerbaspirillum seropedicae.Material e MétodosO  primeiro  experimento  foi  realizado, na  área  experimental  da  EmbrapaAgropecuária Oeste, situada no município de Dourados-MS, de março a agosto de 2012.As coordenadas geográficas são 22° 14' S e 54° 9' W, com altitude média de 450 metros. Oclima é do tipo Cwa, segundo a classificação de Köppen. O solo foi classificado comoLatossolo Vermelho distroférrico, de textura muito argilosa (EMBRAPA, 2006). Os resultados da análise química do solo, na profundidade de 0-20 cm, antes dainstalação do experimento, resultaram nos seguintes valores: pH (CaCl2) 4,5; M.O. 31,18 gdm-3; C: 18,13 g dm-3; P (melich): 22,07 mg dm-3; K: 6 ,0  mmolc dm-3; Ca: 35,4 mmolcdm-3; Mg: 8,7  mmolc dm-3; Al: 4,8 mmolc  dm-3; H+Al: 6 2 , 1  mmolc  dm-3; SB: 50,1mmolc dm-3;  CTC: 1 1 2 , 2  m molc dm-3, saturação por bases 44,65%. A correção do soloe a adubação de base foram realizadas considerando-se os resultados da análise do solo. Aárea foi irrigada após a implantação da cultura e em períodos de maior déficit hídrico. O delineamento  experimental  utilizado  foi  o  de  blocos  casualizados,  com novetratamentos e seis repetições, sendo: 1. Controle sem N e sem inoculação; 2. Controle semN e com Azospirillum brasilense; 3. Controle sem N e com Herbaspirillum seropedicae; 4.30 kg N ha-1 na semeadura; 5. 30 Kg N ha-1 na semeadura + Azospirillum brasilense; 6. 30Kg N ha-1 na semeadura + Herbaspirillum seropedicae; 7. 30 kg N ha-1 na semeadura + 90kg N ha-1 na cobertura; 8. 30 Kg N ha-1 na semeadura +  Azospirillum brasilense  + 90 KgN ha-1 na cobertura; 9. 30 Kg N ha-1 na semeadura + Herbaspirillum seropedicae + 90 KgN ha-1 na cobertura. [2]Foram  utilizadas  sementes  do  híbrido  simples  P3646H,  sendo  previamenteinoculadas com o produto comercial Azototal, contendo uma combinação de duas estirpesde  Azospirillum brasilense  (Ab-V5 e Ab-V6) em inoculante com formulação líquida e oinoculante contendo a estirpe Z-94 de Herbaspirillum seropedicae, em veículo à base deturfa, produzido na Embrapa Agrobiologia, Seropédica-RJ. A dose aplicada foi de 150 mLpara cada 50 kg de sementes de milho para o inoculante com formulação líquida, e de 250g para cada 10 kg de sementes de milho do inoculante com veículo à base de turfa. A semeadura  foi  realizada  manualmente,  com o auxílio  de “matraca”,  colocando-seduas sementes por cova, deixando-se após o desbaste seis plantas por metro linear. Cadaunidade  experimental  foi  composta  por  quatro  linhas  de  seis  metros  de  comprimentoespaçadas em 0,90 m entre linhas. Foram eliminadas as duas linhas laterais e 0,5 m de cadaextremidade da parcela, avaliando os cinco metros de cada uma das duas linhas centrais.  A colheita do milho foi realizada manualmente, coletando-se todas as espigas daparcela útil. As espigas foram debulhadas com o auxílio de uma máquina manual. A massade  100  sementes  e  a  produtividade  foi  determinada em  balança  analítica,  sendo  osresultados posteriormente corrigidos para 13% de umidade.  Após a colheita a qualidade fisiológica das sementes foi avaliada no Laboratório deAnálise  de  Sementes  da  Faculdade  de  Ciências  Agrárias  da  Universidade  Federal  daGrande Dourados, em Dourados-MS. O delineamento experimental adotado no segundoexperimento  foi  o inteiramente  casualizado,  com nove tratamentos  e quatro  repetições,conforme descritos acima.Os  lotes  de  sementes  foram  submetidos  aos  seguintes  testes:  Envelhecimentoacelerado  a 42°C/96 horas: realizado utilizando a  metodologia recomendada pela AOSA(1983) e descrita em Marcos Filho (1999), em caixas gerbox (10 x 10 x 3cm), utilizandoquatro repetições de 50 sementes distribuídas, em camada uniforme e única, sobre bandejade tela metálica fixada no interior de caixa plástica contendo 40 mL de água destilada. Ascaixas, tampadas e acondicionadas em estufa foram mantidas a 42ºC por 96 horas. Apóseste período, quatro repetições de 25 sementes foram submetidas à determinação do teor deágua e, quatro repetições de 50 sementes submetidas ao teste padrão de germinação.  Ainterpretação do teste foi realizada aos quarto dia após a semeadura. Os resultados foramexpressos  em porcentagem  de  plântulas  normais. Teste  de  frio:  realizado  com quatro[3]repetições de 50 sementes selecionadas ao acaso da produção por tratamento, que foramdistribuídas sobre o papel germitest previamente umedecido da mesma maneira que para oteste de germinação. Após a montagem, os rolos foram colocados em sacos plásticos evedados,  sendo  então  mantidos  em câmara  fria  a  10°C por  sete  dias,  de  acordo  comCarvalho et al. (2000). Em seguida, os rolos foram transferidos a um germinador ajustado a25°C, durante sete dias, procedendo-se, em seguida, a avaliação do número de plântulasnormais, conforme Brasil (2009).  Condutividade elétrica: realizado  segundo metodologiaproposta pela AOSA (1983) com quatro repetições de 50 sementes, com massa conhecida,colocadas para embeber em recipientes plásticos contendo 75 ml de água deionizada, porum  período  de  24  horas  a  25ºC.  Em  seguida,  as  amostras  foram  agitadas  parahomogeneização dos exsudados liberados na água, efetuando-se a leitura da condutividadeelétrica  da  solução  de  embebição  em  condutivímetro  modelo  Digimed,  previamentecalibrado, com eletrodo de constante 1,0, expressando-se os resultados em µmhos.cm-1.g-1de sementes (VIEIRA, 1994). Os  resultados  obtidos  foram  submetidos  à  análise  de  variância  e  as  médiascomparadas  pelo  teste  de  Tukey  a  5%  de  probabilidade,  utilizando-se  o  programaestatístico SISVAR.Resultados e DiscussãoOs  resultados  de  envelhecimento  acelerado  e  condutividade  elétrica  não  foramafetados pela adubação nitrogenada e a inoculação com bactérias diazotróficas,  ou seja,não houve diferença significativa entre os tratamentos (Tabela 1).  Bassan et al. (2001),também não verificaram efeito  da inoculação  de semente  com  Rhizobium tropici  nosresultados do envelhecimento acelerado de sementes de feijão cultivar Pérola. Quanto ao teste de frio sem solo, houve diferença significativa entre os tratamentos(Tabela  1).  O  tratamentos  2  (Controle  sem N  e  com  Azospirillum  brasilense) diferiuestatisticamente da testemunha, sendo o que apresentou maior desempenho, ou seja, maiorporcentagem de plântulas normais. Por outro lado, o tratamento 4 (30 kg N ha-1 no plantio)obteve o pior resultado, sendo possível afirmar que de modo geral apenas o manejo daadubação  nitrogenada  não  melhorou  a  qualidade  fisiológica  das  sementes.  Dadossemelhantes foram obtidos por Meira et al. (2005).  [4]Tabela  1. Valores  de  F,  coeficiente  de  variação  (CV),  diferença  mínima  significativa(DMS)  e  teste  de  Tukey  para  envelhecimento  acelerado  (EA),  teste  de  frio  (TF)  econdutividade elétrica (CE) de sementes de milho em resposta a doses de nitrogênio e ainoculação com bactérias diazotróficas. Dourados, MS (2012).Tratamentos EA (%) TF (%) CE (µmhos.cm-1.g-1)1 92,50 87,50 ab 0,00672 93,50 93,50 a 0,00683 94,00 82,00 ab 0,00714 92,50 78,50 b 0,00645 97,00 92,00 ab 0,00856 91,00 86,50 ab 0,00797 91,50 84,50 ab 0,00618 89,50 83,00 ab 0,00799 90,00 82,00 ab 0,0076Média 92,38 85,50 0,007Teste F 0,93ns 2,76* 1,03 nsDMS 11,28 14,03 0,003CV(%) 5,13 6,90 21,13 * e ns– significativo e não significativo. Médias seguidas da mesma letra na linha, não diferem estatisticamente entre sipelo teste de Tukey a 5% de probabilidade.ConclusõesO emprego de A. brasilense em associação com 30 kg N ha-1 na semeadura melhoraa qualidade fisiológica das sementes  de milho pelo teste  de frio sem solo somente emrelação ao tratamento com 30 kg N ha-1 na semeadura.ReferênciasARAÚJO, A,E,S.; ROSSETO, C.A.V.; BALDANI,V,L,D.; BALDANI, J.I. Germinação evigor  de  sementes  de  arroz  inoculadas  com  bactérias  diazotróficas.  CiênciaAgrotecnologia, Lavras,  v. 34, n. 4, p. 932-939, 2010.AOSA.  Association  of  Official  Seed  Analysts.  Seed  vigor  testing  handbook.  EastLansing, AOSA, 1983. 88p.BASSAN, D.A.Z.; ARF, O.; BUZETTI, S.; CaARVALHO, M.A.C.; SANTOS, N.C.B. S;SÁ, M.E. Inoculação de sementes e aplicação de nitrogênio e molibdênio na cultura dofeijão de inverno: produção e qualidade fisiológica de sementes.  Revista Brasileira deSementes, v. 23, n.1, p.76-83, 2001.[5]BRASIL.  Ministério  da  Agricultura  e  da  Reforma  Agrária.  Regras  para  análise  desementes. Brasília, DF: SNDA/DNDV/CLAV, 2009. 398 p.CARVALHO, N.M..; NAKAGAWA, J. (Ed.) Sementes: ciências, tecnologia e produção.4 ed. Jaboticabal: FUNEP, 2000. 588p.CAVALLET, L. E.; PESSOA, A. C. dos S.; HELMICH, J. J.; HELMICH, P. R.; OST, C.F. Produtividade do milho em resposta à aplicação de nitrogênio e inoculação das sementescom  Azospirillum  spp.  Revista  Brasileira  de  Engenharia  Agrícola  e  Ambiental,Campina Grande, v.4, n.1, p.129-132, 2000. CONAB. 2013. Acompanhamento da safra brasileira 2012/2013: quinto levantamento,Fevereiro, 2013. Companhia Nacional de Abastecimento, CONAB, 2013.EMPRESA BRASILEIRA DE PESQUISA - Embrapa.  Centro Nacional de Pesquisa deSolos. Sistema brasileiro de classificação de solos. Brasília: Embrapa/DPI, 2006. 306p.LEE, H.S.;  MADHAIYAN, M.; KIM, C.W.;  CHOI, S.J.;  CHUNG, K.Y. Physiologicalenhancement  of  early  growth  of  rice  seedlings  (Oryza  sativa L.)  by  production  ofphytohormone  of  N2-fixing  methylotrophic  isolates.  Biology  and  Fertility  of  Soils,Berlin, v.42, n.5, p.402-408, 2006. MARCOS FILHO, J.  Teste de envelhecimento acelerado. In: Krzyzanowski CF, VieiraRD & França-Neto JB (Eds.) Vigor de sementes: Conceitos e testes. Londrina, ABRATES,1999,  p.1-24. MEIRA,  F.A.;  SÁ,  M.E.,  BUZETTI,  S.;  ARF,  O.  Doses  e  épocas  de  aplicação  denitrogênio  no  feijoeiro  irrigado  cultivado  em  plantio  direto.  Pesquisa  AgropecuáriaBrasileira, Brasília, v.40, n.4, p.383-388, 2005.OHLAND, R. A. A. et al. Culturas de cobertura do solo e adubação nitrogenada no milhoemplantio direto. Ciência e Agrotecnologia, Lavras, v. 29, n. 3, p. 538-544, 2005.PINTO  JUNIOR,  A.S.;  GUIMARÃES,  V.F.;  RODRIGUES,  L.F.O.S.;  SILVA,  M.B.;INAGAKI,  A.M.;  DIAMANTE,  M.S.;  OFFEMANN,  L.C.  Qualidade  de  sementes  demilho oriundas da inoculação combinada de três estirpes de  Azospirillum brasilense.  In:XXIX Congresso Nacional de Milho e Sorgo. Anais... Águas de Lindóia – SP,  2012.VIEIRA, R. D. Teste de condutividade elétrica. In: Vieira, R. D.; Carvalho, N. M. Testesde vigor em sementes. Jaboticabal: Funep, 1994. p. 103–139.[6]

Efeito da adubação nitrogenada no desempenho fisiológico de sementes de milho inoculadas com Azospirillum brasilense e Herbaspirillum seropedicae.

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