Organizado por Patricia Póvoa de Mattos, Celso Garcia Auer, Rejane Stumpf Sberze, Katia Regina Pichelli e Paulo César Botosso

SANTOS, D. C. dos

SOUZA JÚNIOR, L.

WENDLING, I

SANTOS, D. C. dos.

RCAAP - Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal

Fitorreguladores de crescimento no alongamento in vitro de Pinus greggii.

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II EVENTO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DA Embrapa Florestas Colombo – 09 a 11 de dezembro de 2003    027  FITORREGULADORES DE CRESCIMENTO NO ALONGAMENTO  IN VITRO DE Pinus greggii 1   Levi Souza Junior2 Ivar Wendling3 Danielle Cristine dos Santos4   RESUMO   O objetivo deste trabalho foi avaliar o comportamento de explantes de P.greggii oriundos do trigésimo subcultivo in vitro em meio JADS 89 modificado em relação aos seguintes tratamentos de alongamento: T1 – 1 mg L-1 de GA3; T2 – 1,2 mg L-1 de AIA + 0,08 mg L-1 de BAP + 5 mg L-1 de Tiamina HCl; T3 – 0,1 mg L-1 de AIB + 0,1 mg L-1 de BAP e; T4 - 0,1 mg L-1 ANA + 0,05 mg L-1 de BAP. Foi avaliada a sobrevivência dos brotos, a produção de brotos e a altura das microestacas. Os resultados indicaram a toxidade do GA3 na concentração utilizada. De forma geral observou-se que o P. greggii se adaptou bem ao alongamento, mas não se adaptou ao enraizamento ex vitro e que seria necessário o estudo de enraizamento in vitro  ou ainda estudar outra técnica de clonagem para a propagação vegetativa desta espécie.  Palavras-chave: micropropagação, Pinus greggii, propagação vegetativa.   INTRODUÇÃO Pinus greggii é um pinheiro endêmico do México que apresenta altura variada, geralmente entre 10 e 25 metros e acículas de coloração verde clara (Borsato, 2000). A copa, irregularmente arredondada, pode apresentar os galhos inferiores na posição horizontal ou, ainda de forma pendente, com galhos tocando o chão. Do ponto de vista morfológico, Pinus greggii é muito semelhante ao Pinus patula, mas pode ser diferenciado pelas acículas muito curtas, ásperas e eretas (Mirov, 1967; Perry, 1991).  A micropropagação é uma técnica de produção de plantas a partir de órgãos diferenciados podendo ser gemas, embriões, partes de órgãos ou simples células (Gomes, 1987), que visa o rejuvenescimento do material selecionado para o processo de produção de mudas (Xavier e Comério, 1996).  A micropropagação é dividida em algumas fases, sendo que na fase de multiplicação o objetivo é produzir o maior número de explantes possíveis a um curto período. A fase de alongamento o objetivo é que o material se torne apto para o enraizamento que pode ser in vitro ou ex vitro (Santos et al., 2002).                                                   1 Trabalho desenvolvido na Embrapa Florestas 2 Aluno do curso de Biologia, Faculdades Integradas Espírita 3 Pesquisador Embrapa Florestas  ivar@cnpf.embrapa.br 4  Aluna do curso de Química, Universidade Federal do Paraná    O presente estudo teve como objetivo avaliar o comportamento de explantes de Pinus greggii, em meio JADS 89 modificado (Correia, 1992), em relação a diferentes tratamentos de fitorreguladores de crescimento para alongamento in vitro. MATERIAL E MÉTODOS Para o presente estudo, durante a fase de multiplicação, foram utilizados tufos (brotações originadas de um explante introduzido no meio de cultura) de Pinus greggii provenientes de mudas produzidas via semente, submetidos a 30 subcultivos in vitro em meio JADS 89 modificado (Quadro 1), a intervalos de 30 dias. Após a fase de multiplicação, os explantes foram transferidos para meio de alongamento constituído de meio JADS 89 modificado, acrescido com 25 g L-1 de sacarose, 6 g L-1 de ágar e  pH 5,8.  Quadro 1 – Sais e vitaminas utilizadas para o preparo do meio de cultura para multiplicação e alongamento de explantes de Pinus greggii.  COMPOSIÇÃO CONCENTRAÇÃO (g L-1) NH4NO3    32,4 KNO3                            80,9 Ca (NO3)2 . 4 H20  118,1 KH2PO4   40,8 MgSO4 . 7 H2O  73,95 MnSO4 . 7 H2O  1,69 CuSO4 . 5 H2O  0,125 ZnSO4 . 7 H2O  0,432 FeSO4 . 7 H2O  7,450 Na2EDTA . 2 H2O  5,560 H3Bo3    0,310 Na2MoO4 . 2 H2O  0,015 CoCl2 . 6 H2O  0,025 KI    0,016 Tiamina HCl 0,050 Mio Inositol 5,000 Glicina 0,025 Ácido Nicotínico  0,025 Piridoxina HCl  0,025 Foram utilizados quatro tratamentos constituídos de diferentes tipos de reguladores de crescimento em combinações distintas: T1 – 1 mg L-1 de GA3; T2 – 1,2 mg L-1 de AIA + 0,08 mg L-1 de BAP + 5 mg L-1 de Tiamina HCl ; T3 – 0,1 mg L-1 de AIB + 0,1 mg L-1 de BAP e; T4 - 0,1 mg L-1 ANA + 0,05 mg L-1 de BAP. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado, com cinco explantes de 1 a 3 cm por repetição. As médias obtidas foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Uma vez inoculados, os tufos foram mantidos em sala de crescimento com temperatura de 25 °C ± 2 °C e luminosidade mantida por meio de lâmpadas fluorescente branca-fria, por um período de 16 horas luz/dia e intensidade lumínica de 1800 klux. Após 30 dias em meio de cultura, foram avaliados o percentual de sobrevivência, o número de brotos produzidos para cada explante introduzido, a altura e o enraizamento ex vitro. Nesta última etapa as microestacas foram acondicionadas em casa de vegetação com temperatura variando de 22 a 28 ºC e umidade relativa do ar acima de 80%. Utilizou-se como substrato uma mistura de composto orgânico (30%), vermiculita fina (35%) e casca de arroz carbonizada (35%)  em tubetes de 55 cm3. RESULTADOS E DISCUSSÃO O percentual de sobrevivência de pinus greggii em meio de alongamento foi T1 (0%), T2 (100%), T3 (100%) e T4 (100%), demonstrando que o T1 (1 mg L-1 de GA3) é inapropriado para o alongamento in vitro desta espécie, o que pode ser atribuído a uma provável intoxicação por GA3 na concentração utilizada, enquanto que os demais tratamentos não diferiram entre si quanto a esta característica. (Figura 1A). Desta forma não foi possível a avaliação do T1 nas demais características avaliadas, corroborando os resultados obtidos por Rosa et al. (2003), quanto ao efeito tóxico do GA3 na mesma concentração sobre a mortalidade de 100% dos explantes de Eucalyptus pellita. Sob%T1 T2 T3 T4Tratamentos 0.550.420.670.00.20.40.60.81.0NbrotosT2 T3 T4Tratamentos020406080100A B A A 100 100 100 A  Figura 1- Percentual de sobrevivência de explantes de Pinus greggii no meio de alongamento (Sob% - A); média de número de brotos produzidos por tratamentos dePinus greggii (Nbrotos – B). Médias seguidas de uma mesma letra entreosdiferentes tratamentos não diferem entre si, pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade.  Com relação ao número de brotos produzidos, Figura (1B), não foi observada diferença significativa. O tratamento superior foi o T4, T2 e T3 com 0,67, 0,55 e 0,42 brotos por explante respectivamente.Rosa et al. (2003) encontraram 1,75 brotos por explante para Eucalyptus pellita,enquanto que Wiecheteck et al. (1991) conseguiram 6,2 brotos por explante para Eucalyptus viminalis.Também deve-se considerar que os tratamentos foram elaborados com a finalidade de alongar as brotações para o enraizamento (formação de microestacas) e não para a formação de brotos, mesmo assim conforme citado acima houve produção de brotos nos três diferentes tratamentos o que pode ser atribuído ao acréscimo de BAP nos três tratamentos.  Quanto a altura dos explantes (Figura 2) , as microestacas estavam com uma altura padrão para o enraizamento ex vitro, tendo como média geral 4,7 cm de comprimento. Esse resultado médio de altura é superior àqueles encontrados por Rosa et al. (2003), e Wiecheteck et al. (1991) para Eucalyptus pellita  (com 2,3 cm) e Eucalyptus viminalis (com 1,85 cm), respectivamente. Para Del Ponte et al. (2001), a concentração de BAP que produziu brotações mais alongadas foi 0,2 mg L-1, seguida da testemunha, sem aplicação de regulador de crescimento.Valores bastante díspares quando comparados ao alongamento do Pinus greggii o que pode ser atribuído a melhor adaptação desta espécie no alongamento  in vitro. Apesar da diferença nos valores da altura os tratamentos não se diferenciaram significativamente entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. 4,902468Alt\cmT2tratam  A   Figura 2 - Altura média das micseguidas de uma mesma letra entre os dTukey a 5% de probabilidade No enraizamento ex vitro das micem casa de vegetação, o que leva a conespécie na fase de alongamento, ou apropagação vegetativa. CONCLUSÃO Nas condições em que o trabalhogreggii para a formação de microestacporém esta espécie necessita de maioreGA3 no meio de alongamento de Pinus gREFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BORSATO, R. Variação genética ereflorestamento no Sul do Brasil. 86 f. CORREIA, D. Otimização da fase de 1992. 236f. (Dissertação de mestrado). DEL PONTE, E. M.; MATTEI, V. L.; PETin vitro de Eucalyptus globulus subsSIF, 2001. p. 1 – 8. GOMES, A. L. Propagação clonal: priTrás-os-Montes e Alto Douro, 1987. 69 pMIROV, N.T. The genus pinus. New YorPERRY, J.R. 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(dissertação de mestrado). multiplicação de gemas in vitro de Eucalyptus spp. ERS, J. A.; ASSIS, T. F. Multiplicação e enraizamento p. Globulus Labill. Revista Árvore. v. 25. n. 1. Viçosa: ncípios e particularidades. Vila Real: Universidade de . (Série Didáctica, Ciências Aplicadas, 1). k: The Ronald Press Company, 602p. 1967. Central America: Timber Press, 1991. D.C. Reguladores de crescimento no alongamento in vitro  : 8º. CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO. Anais... I, F. Influência de diferentes reguladores de crescimento  de Grevillea robusta (Cunn.) In: I Evento de Iniciação bo – PR: Embrapa Florestas, 2002. p. 009 – 013. : uma maximização da micropropagação em Eucalyptus. .C. ; ARAÚJO, A.J. Micropropagação de Eucalyptus CONGRESSO FLORESTAL E DO MEIO AMBIENTE DO . P. 219-230. 1991. 

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