Caracterizar uma amilase de extratos aquosos de sementes de L. ferrea quanto à estabilidade térmica e massa molecular

ALVES, J. P. de A.

ANDRADE, L. B. da S.

BRITO, M. S. de

FIGUEIREDO, M. F.

LIMA, T. C.

SALLES, H. O.

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12/12/13 www.sbpcnet.org.br/livro/65ra/resumos/resumos/3668.htmwww.sbpcnet.org.br/livro/65ra/resumos/resumos/3668.htm 1/165ª Reunião Anual da SBPCC. Ciências Biológicas - 3. Bioquímica - 6. BioquímicaCARACTERIZAÇÃO DE UMA AMILASE DE SEMENTES DE Libidibia ferrea (Mart. ex. Tul.)Thalita Costa Lima - Aluna de Ciências Biológicas-Bacharelado (UVA)Jamille Perdigão de Andrade Alves - Aluna de Ciências Biológicas- (UVA)-Bolsista CNPqMonica Silva de Brito - Graduada em Biologia-UVAMarlene Feliciano Figueiredo - Profa. Dra. Curso de C. Biológicas/Universidade Estadual Vale do Acaraú (UVA)Hévila Oliveira Salles - Dra./Pesquisadora Embrapa Caprinos e OvinosLúcia Betânia da Silva Andrade - Profa. Dra./Orientadora - Curso de Ciências Biológicas (UVA)INTRODUÇÃO:O amido é um componente importante da dieta humana e, para este fim, a indústria de alimentos temtransformado-o química e enzimaticamente em uma variedade de diferentes produtos como o amidohidrolisado, xarope de glicose, frutose e maltodextrina. Amilases são enzimas digestivas que hidrolisamligações glicosídicas do amido, tendo como produto final glicose, maltose, maltotriose e dextrinas. Amilasestêm um grande potencial de aplicação nas indústrias alimentícias e farmacêuticas (AIYER, 2005). Podem serobtidas de plantas, animais e micro-organismos, sendo que as de origem microbiana são as de maiorimportância comercial (GUPTA et al., 2003). Libidibia ferrea (Mart. ex. Tul), anteriormente denominadaCaesalpinia ferrea é uma leguminosa nativa do Brasil, conhecida popularmente por jucá. A detecção deamilases no extrato aquoso de suas sementes já foi reportada por Cavalheiro et al., (2009). Levando emconsideração a importância das amilases como enzimas industriais, a caracterização desta enzima emsementes de uma espécie nativa do Brasil fornece informações preciosas para o conhecimento de novoscompostos bioativos de nossa flora, com potencialidades de uso em diversos processos tecnológicos.OBJETIVO DO TRABALHO:Caracterizar uma amilase de extratos aquosos de sementes de L. ferrea quanto à estabilidade térmica emassa molecular.MÉTODOS:Sementes de jucá foram descascadas e trituradas em moinho elétrico. Da farinha obtida, foi feita umaextração com tampão fosfato de sódio 0,1 M pH 6,7, na proporção de 1:10 (m/v), sob agitação, por 1 hora.Após isto, o extrato foi centrifugado por 30 minutos a 10.000xg, 4ºC. O sobrenadante (extrato amilolítico-EA)foi usado como fonte enzimática. O ensaio qualitativo para a atividade enzimática foi realizado por difusão emágar a 2%, usando amido a 1% como substrato. Para avaliar a estabilidade térmica, o extrato foi aquecidoem banho-maria por 5, 10, 30 e 60 minutos nas temperaturas de 50 °C, 60 °C, 70 °C e 80 °C. O extrato semaquecimento foi usado como controle. O perfil de proteínas do EA foi visualizado por eletroforese em gel depoliacrilamida-(SDS-PAGE). A identificação da banda proteica com atividade amilolítica e estimativa de suamassa molecular foi realizada por zimograma.RESULTADOS E DISCUSSÃO:A atividade amilolítica do extrato de sementes de jucá foi observada após o EA ser submetido a temperaturade 60°C, por até 60 minutos. Em temperaturas acima de 60ºC, a atividade foi perdida. O perfil eletroforéticodo EA mostrou a presença de várias bandas proteicas sendo três de maior intensidade comaproximadamente 66 kDa, 20 kDa e 14 kDa. Por zimograma, foi possível estimar que a massa molecular daamilase do EA é de, aproximadamente, 45 kDa. A atividade biológica de uma proteína pode serprofundamente influenciada pela temperatura, sendo que temperaturas acima de 40ºC poderão causardesnaturação proteica em muitas enzimas. Porém, alguns organismos produzem enzimas termoestáveis, taiscomo bactérias e fungos termófilos, que produzem amilases estáveis a uma temperatura acima de 40ºC,algumas delas estáveis até a 80ºC (DERDE et al., 2012; AYGAN et al., 2008; GOMES et al., 2007). A relativaestabilidade a 60ºC da amilase presente no extrato de jucá é uma característica particularmenteinteressante, podendo ser estas sementes uma nova fonte de enzimas para fins biotecnológicos.CONCLUSÕES:Sementes de L. ferrea possuem uma amilase termoestável com potencial aplicação industrial. Estudosposteriores visando o isolamento desta enzima faz-se necessário para o conhecimento de suascaracterísticas bioquímicas com o intuito de conhecer suas propriedades e possibilidades de aplicação emprocessos industriais, principalmente aqueles envolvendo o processamento do amido.Palavras-chave: Proteínas, Enzimas, Glicosidases.

Caracterização de uma amilase de sementes de Libidibia ferrea (Mart. ex. Tul.).

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