ABDELNOOR, R. V.

ARIAS, C. A. A.

NEPOMUCENO, A. L.

NOGUEIRA, L. M.

PASSIANOTTO, A. L. de L.

PEREIRA, S. dos S.

SANTOS, J. V. M. dos

SILVA, D. C. G. da

YAMANAKA, N.

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11 Jornada Acadêmica da Ernbrapa Soja 	 175 Saturação com marcadores de microssatélites dos grupos J e G nas regiões de ligação dos genes de resistência à ferrugem asiática da soja Selma dos Santos Pereira 1 ' 25 ; D. C. O. da Silval.2.3*;  N. Yamanaka"4; L. M. Nogueira' 2 ; A. L. de L. Passianott& 2; J. V. M. dos Santos; Carlos Alberto Arrabal Arias 1 ; Alexandre Lima Nepomuceno 1 ; Ricardo VilelaAbdelnoor'. 1 Embrapa Soja, selma@ cnpso.embrapa.br ; 2Fundação Faculdades Luiz Meneghel - FFALM; 3Universidade Estadual Paulista, UNESP-Jaboticabal; 4Japan International Research Center for Agricultural Sciences - JIRCAS; 5 Universidade Estadual de Londrina. introdução O Brasil é o segundo maior produtor mundial de soja e um dos poucos com potencial para aumentar a produção no futuro, dado a existência de áreas ainda não cultivadas e a crescente demanda mundial por produtos de soja. Entre os problemas que afetam a produção de soja no Brasil, a ferrugem asiática, doença causada pelo fungo Phakopsora pachyrhizi Syd & Syd., tem causado enormes danos econômicos. Perdas de produtividade maiores que 75% já foram observadas quando nenhuma medida de controle da doença foi aplicada (Yorinori et ai., 2005). Até o momento, não existem cultivares de soja resistentes a ferrugem asiá-tica e, o que torna é imprescindível a identificação e o desenvolvimento de cultivares resistentes. Quatro genes de resistência à ferrugem asiática foram descritos na literatura: Rppl, Rpp2, Rpp3 e Rpp4 (Hartwig e Bromfield, 1983; Hartwig, 1986). Genes de resistência também foram identificados em outros genótipos, como a FT-2, uma cultivar brasileira (Arias et ai., 2004). Quando a doença foi primeiramente detectada no Brasil todos estes genes eram efetivos. Entretanto, em 2003, um isolado de P. pachyrhizi in-fectou plantas portadoras dos genes Rppl, Rpp3 e pelo locus identificado na cultivar FT-2. Atualmente, dos genes descritos na literatura, somente o Rpp2 e o Rpp4 permanecem efetivos (Arias et ai., 2004). Em trabalho 176 	 Embrapa Soja. Documentos. 276 desenvolvido na Embrapa Soja, os genes Rpp2 e Rpp4 foram mapeados nos grupos de ligação J e G, respectivamente (Silva et ai,. 2006a; Silva et ai,. 2006b). Entretanto, os marcadores que foram descobertos flanqueando esses genes estão a distâncias muito altas dos respectivos loci para se-rem utilizados na seleção assistida por marcadores (SAM), em programas de melhoramento. O objetivo deste trabalho foi saturar com marcadores microssatéktes os grupos de ligação J e G nas regiões de localização dos genes Rpp2 e Rpp4, possibilitando utilizá-los na SAM. Materiais o Métodos Para o mapeamento dos genes Rpp2 e Rpp4 foram utilizados cruzamentos entre a cultivar "BRS-184" e as PIs 230970 e 459025, respectivamente. Das plantas F 1 , foram obtidas populações segregantes F 2 . 3 , compostas por 130 e 80 indivíduos, para o mapeamento dos genes Rpp2 e Rpp4, respec-tivamente. Tais populações foram inoculadas com o fungo P pachyrhizi e avaliadas fenotipicamente quanto à resistência, mediante a identificação de lesões RB, características de genótipos resistentes, e de lesões TAN, características de genótipos suscetíveis. Trifólios dos genôtipos parentais e dos indivíduos das populações segregan-tes foram submetidos à extração de DNA, amplificação de microssatélites e à análise dos fragmentos amplificados (Cervigni 2004). Inicialmente, os primers de microssatélites foram testados nos parentais para verificar po-limorfismo. Foi utilizada a estratégia de bulks segregantes. Os marcadores polimórficos entre os bulks foram testados nas populações F 2 e a informa-ção genotípica gerada foi cruzada com a informação fenotípica oriunda da avaliação de resistência para a confirmação da ligação. A proporção de segregação para os marcadores e para a resistência a doença foi analisada pelo teste do x2 . Para a análise de ligação, o progra-ma GQMOL. 11 Jornada Académica da Embrapa Soja 	 177 Resultados Para a saturação do grupo de ligação J na região de localização do gene Rpp2 foram testados entre os parentais os primers Sat_366, Satt244, Satt620, Satt621, Sct_OO1, Sat_255 e Sat_361, dos quais foram polimórfi-cos os primers Sat_366, Satt620, Sct_OO1, Sat_255. No grupo de ligação G na região de localização do Rpp4, foram testados os marcadores Sct_199, Satt472, Satt61 2, AF1 62283 e Sat_1 43, sendo polimórfico a'ienas o mar-cadorAFl 62283.marcadorAFl62283. Não houve distorção de segregação significativa para nenhum dos loci de microssatélites, analisados de acordo com o teste do x2  (P>0,05). A análise de ligação mapeou o locus Rpp2 a 7,3 CM do marcador Satt255 e a 5,6cM do marcador Satt620, no grupo de ligação J. O locus Rpp4 foi mapeado a 13cM e 12,3 cM dos microssatélites Satt288 eAF162283, respectivamente, no grupo de ligação G. 22,51 cl' CL] GLG SattS29 -P1---- Sat_093 J4 Sct0O1 9, cM U 	 Sat__255 11 Rpp2 6,54cM 2,50cM El  14,49 cl'! -JJ--  Sat_366  M 1,89 cM 12,76 cM Satt547 12,30 cM 3,50 cM 1,10 cM 1,10 cM 7,34 CM 5,62 cM 4,80 cM SattOl2 Sattl99 Satt5l7 SattSO3 Satt2SS Rpp4 AF162283 Sattl9l Figural. Mapas dos grupos de ligação (GL) Je G evidenciando as regiões de localizaçãados genes Rpp2 e Rpp4. (lado esquerdo: distâncias em cM e lado direito: marcadores microssatélites identificados). 778 	Ernbrapa Soja. Documentos, 276 Considerações Finais Os marcadores identificados neste estudo apresentaram distâncias menores dos respectivos genes de resistência do que as encontradas anteriormente, sendo estas satisfatórias para a utilização dos mesmas em programas de melhoramento. O próximo passo será a analise destas populações com outros marcadores, como RFLP, SCAR e AFLP, para a obtenção de um mapa mais saturado. Outros genes de resistência à ferrugem asiática foram recentemente identificados pela equipe de Melhoramento da Embrapa Soja os quais estão sendo mapeados. Com o mapeamento desses genes de resistência, a introdução conjunta dos mesmos em cultivares comerciais será grandemente facilitada pelo uso da SAM. Apoio: Japan International Research Center for Agricultural Sciences-JIRCAS; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq, Financiadora de estudos e Projetos - FINEP e Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária - Embrapa Soja. Referências ARIAS, O. A. A.; RIBEIRO, A. 5.; VORINORI, J. 1; BROGIN, R. L., OLIVEIRA, M. F.; TOLEDO, J. F. F. 2004. Inheritance of resistance of soy-bean to rust (Phakop.sora pachyrhizi Sydow). In: F. Moscardi ei ai. (Ed.), Abstracts of Contributed Papers and Posters, VII World Saybean Research Conference, Embrapa Soybean, Londrina, p. 100. CERVIGNI, G. D. L.; SCHUSTER, 1; BARROS, E. G.; MOREIRA, M. A. 2004. Two microsatellite markers flanking a dominant gene for resistance to soybean cyst nematode race 3. Euphytica 135, 99-105. HARTWIG, E. E.; BROMFIELD, K. R., 1963. Relationsiips among three genes conferring specific resistance to rust in soybeans. Crop Science 23: 237-239. HARTWIG, E. E., 1986. Identification of a fourth major gene conferring resistanceto soybean rust. Crop Science 26: 1135-1136. SILVA, D. O. G.; YAMANAKA, N.; BROGIN, R. L.; ARIAS, C. A. A.; NEPOMUCENO,A. L.; DI MAURO,A. O.; NOGUEIRA, L. M.; PASSIANOTTO, 1/Jornada Acadêmica da Embrapa Soja 	 179 A. L.; PEREIRA, S. dos 5.; ABDELNOOR, R. V. Mapeamento do gene Rpp4 que confere resistência à ferrugem asiática da soja. In: IV Congresso Brasileiro de Soja. Documentos - Embrapa p. 45. 2006a. SILVA, D. C. G.; YAMANAKA, N.; BROGIN, R. L.; ARIAS, C. A. A.; NEPOMUCENO,A. L.; Dl MAURO,A. O.; NOGUEIRA, L. M.; PASSIANOTTO, A. L.; PEREIRA, S. dos 5.; ABDELNOOR, R. V. Mapeamento do gene Rpp2 que confere resistência à ferrugem asiática da soja. In: IV Congresso Brasileiro de Soja. Documentos - Embrapa p. 45. 2006b. YORINORI, J. li; PAIVA, W. M.; FREDERICK, R. D.; COSTAMILAN, L. M.; BERTAGNOLI, P. E; HARTMAN, G. L.; GODOY, C. J; NUNES, J. J., 2005. Epidemics of soybean rust (Phakop.sora pachyrhizi) in Brazil and Paraguay from 2001 to 2003. Plant Disease 89: 75-677. 

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