PEREIRA, L. F. P.

VANZELA, A. L. L.

VILAS-BOAS, L. A.

YUYAMA, P. M.

RCAAP - Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal

Distribuição de retroelementos em cromossomos de Coffea L. (Rubiaceae).

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Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasilwww.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2Yuyama, PM1; Pereira, LFP2; Sera, T3; Vilas-Boas, LA1; Vanzela, ALL11Departamento de Biologia Geral, Universidade Estadual de Londrina 2Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, EMBRAPA-Café3Instituto Agronômico do Paraná, IAPARandrevanzela@uel.brPalavras-chave: DNAr, FISH, heterocromatina, retroelemento e Ty3-gypsy-like.Introdução: O gênero Coffea L. (Rubiaceae) possui mais de 100 espécies, nativas das florestas tropicais da África e Madagascar. Coffea arabica é a espécie mais importante economicamente, autocompatível e a única tetraplóide do gênero com 2n = 44. As demais espécies são diplóides com 2n = 22 e autoincompatíveis. Estudos moleculares e de hibridação genômica in situ revelaram que as espécies de Coffea apresentam elevada similaridade genômica, podendo ser consequência da presença de famílias de DNA repetitivo em comum. Objetivos: Isolar e caracterizar elementos repetitivos em C. arabica variedade typica para utilizá-los como sondas em experimentos de hibridação in situ (FISH) em outras seis espécies do gênero, como C. canephora, C. eugenioides, C. kapakata, C. liberica var. dewevrei, C. racemosa e C. stenophylla. Métodos: Foram feitas análises citogenéticas das sete espécies de Coffea. Para confecção das lâminas, raízes foram digeridas em celulase/pectinase e esmagadas em ácido acético 60%. No bandamento C-CMA/DAPI, as lâminas foram tratadas em ácido acético 45%, Ba(OH)2 e 2×SSC, e coradas com CMA e DAPI. Para o isolamento de DNA repetitivo, o DNA genômico de C. arabica var. typica foi usado como molde para a reação de DOP-PCR. Os fragmentos gerados foram inseridos nos vetores, clonados e caracterizados a partir do sequenciamento. Resultados: O bandamento cromossômico mostrou predomínio de bandas terminais e intersticiais com diferenças no tamanho, número, distribuição e composição de bases. Coffea arabica e C. canephora mostraram bandas CMA+ e DAPI+ intersticiais próximas ao centrômero na maioria dos cromossomos, enquanto as outras espécies mostraram poucas bandas. As bandas CMA+ foram encontradas nas regiões terminais, associadas ou não à RON, e intersticiais próximos ao centrômero. As bandas DAPI+ foram encontradas somente nas regiões intersticiais próximos ao centrômero, exceto em C. liberica var. dewevrei e C. racemosa. A FISH com a sonda de DNAr 45S mostrou dois e quatro sítios de hibridação, com exceção de C. arabica, com seis sítios. A partir da DOP-PCR, foram feitos o isolamento e a caracterização de dois retroelementos: i) fragmento de grupo indeterminado com 292 pb (pCa21) e ii) fragmento do retroelemento Ty3-gypsy-like com 775 pb (pCa06). Esses clones foram utilizados como sondas na FISH, mostrando blocos e sinais dispersos na maioria dos cromossomos. Foram observados sinais co-localizados para os dois clones e alguns sinais específicos em determinadas regiões para cada clone, sugerindo que pCa21 e pCa06 sejam elementos diferentes. Conclusões: A distribuição das regiões heterocromáticas, sítios de DNAr 45S e dos retroelementos indicam que as famílias de DNA repetitivo se acumularam de modo independente na formação cariotípica dessas espécies. Este estudo mostrou que a elevada similaridade genômica entre estas espécies podem em parte ser explicada pela ocorrência comum desses retroelementos. Órgão financiador: CNPq, ProPPG-UEL e Instituto Agronômico do ParanáDistribuição de retroelementos em cromossomos de Coffea L. (Rubiaceae)56º Congresso Brasileiro de Genética116

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/bitstream/doc/880435/1/Distribuicaoderetroelementos.pdf

Distribuição de retroelementos em cromossomos de Coffea L. (Rubiaceae).

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