Tuberculose disseminada com manifestações cerebrais, pulmonares, ganglionares e intestinais em raposas

Coelho, A.C.

Dias, A.P.

Figueira, L.

Martins, M.H.

Martins, M.V.

Matos, A.C.

Matos, M.

Morais, M.

Pinto, M.L.

Repositório Científico do Instituto Politécnico de Castelo Branco

TUBERCULOSE DISSEMINADA COM MANISFESTAÇÕES CEREBRAIS, PULMONARES, 
GANGLIONARES E INTESTINAIS EM RAPOSAS-VERMELHAS (VULPES VULPES)
Matos Ana Cristina1,*, Coelho Ana Cláudia3, Figueira Luís1, Morais Márcia3, Dias Ana Patricia3, Martins Helena1, Martins Manuel1, Pinto 
Maria de Lurdes3, Matos Manuela2
1School of Agriculture, Polytechnic Institute of Castelo Branco, Portugal
2IBB-Institute for Biotechnology and Bioengineering, Centre of Genomic and Biotechnology, University of Trás-os-Montes and Alto-Douro, Department of Genetics and Biotechnology
3CECAV- Center for Animal Science and Veterinary,
University of Trás-os-Montes and Alto-Douro, Department of Veterinary Sciences,Portugal
*(acmatos@ipcb.pt)
INTRODUÇÃO
As raposas vermelhas (Vulpes vulpes). são mamíferos selvagens pertencentes à ordem Carnivora e família Canidae. Encontram-se em
toda a Europa exceto na Islândia. Em Portugal distribuem-se por todo o país, tolerando bem a presença humana.
A tuberculose disseminada é caracterizada por envolvimento concorrente de dois ou mais órgãos não contíguos. Este tipo de
apresentação de tuberculose é incomum, principalmente na ausência de imunodeficiência.
Neste trabalho efetuou-se a deteção por biologia molecular e por cultura de Complexo Mycobacterium tuberculosis em raposas
aparentemente saudáveis, encontradas mortas por atropelamento.
MATERIAL E MÉTODOS
Colheram-se amostras de 5 animais (Figura 1), durante os anos de 2010-2012. nos concelhos de Idanha-a-Nova e Penamacor do
distrito de Castelo Branco (Figura 2). Destes, 1 era fêmea e 4 eram machos e as idades variaram entre 5 meses e 8 anos. Colheram-se
amostras de diferentes órgãos (Figura 3) que foram submetidas à técnica de PCR e à cultura em meios específicos. Realizou-se a
extração de DNA a partir de tecidos através do “kit” comercial “DNeasy Blood & Tissue®” (Qiagen, Hilden, Germany) e a partir de
colónias através do “kit” comercial “UltraClean® Microbial DNA Isolation” (MO BIO Laboratories, Inc., Carlsbad, California) de acordo
com as instruções do fabricante (Figura 4). O complexo M. tuberculosis foi identificado pela presença de MPB70 com amplificação de
um fragmento de 372 pb.
Vulpes vulpes
Figura 2- Concelhos de Idanha-
a-Nova e Penamacor
Figura 1- Raposas analisadas Figura 4- Extração de DNA a 
partir de colónias
RESULTADOS
A técnica de PCR em DNA extraído a partir dos tecidos, revelou Complexo Mycobacterium tuberculosis (CMT) no cérebro de quatro
animais (Figura 5). A cultura microbiológica de cérebro foi positiva nos 5 animais (Figura 6), tendo sido as colónias confirmadas por
PCR. CMT foi detetado por biologia molecular nas amígdalas de 3 raposas, em pulmão e intestino de um animal e, nos gânglios
mesentéricos e mediastínicos de outra raposa.
CONSIDERAÇÕES FINAIS
Estes resultados confirmam a presença de tuberculose disseminada em raposas e indicam estes carnívoros como reservatórios de
Complexo Mycobacterium tuberculosis no nosso país, sendo necessário esclarecer o papel das espécies silváticas na transmissão
dos agentes do CMT.
Figura 5- Produtos de amplificação obtidos na PCR
MPB70 (M.M. - marcador molecular; Amostras; C+:
controlo positivo; C-: controlo negativo).
M.M  1     2  3      4     5      6     7      8     9    C+  C-
Figura 6- Colónias em meio Lowenstein - Jensen ®  
com Piruvato


Portuguese

Matos, Ana Cristina

Coelho, Ana Cláudia

Figueira, Luís

Morais, Márcia

Dias, Ana Paula

Martins, Maria Helena

Martins, Manuel

Pinto, Maria de Lurdes

Matos, Manuela

Repositório do Instituto Politécnico de Castelo Branco

TUBERCULOSE DISSEMINADA COM MANISFESTAÇÕES CEREBRAIS, PULMONARES, GANGLIONARES E INTESTINAIS EM RAPOSAS-VERMELHAS (VULPES VULPES)Matos Ana Cristina1,*, Coelho Ana Cláudia3, Figueira Luís1, Morais Márcia3, Dias Ana Patricia3, Martins Helena1, Martins Manuel1, Pinto Maria de Lurdes3, Matos Manuela21School of Agriculture, Polytechnic Institute of Castelo Branco, Portugal2IBB-Institute for Biotechnology and Bioengineering, Centre of Genomic and Biotechnology, University of Trás-os-Montes and Alto-Douro, Department of Genetics and Biotechnology3CECAV- Center for Animal Science and Veterinary,University of Trás-os-Montes and Alto-Douro, Department of Veterinary Sciences,Portugal*(acmatos@ipcb.pt)INTRODUÇÃOAs raposas vermelhas (Vulpes vulpes). são mamíferos selvagens pertencentes à ordem Carnivora e família Canidae. Encontram-se emtoda a Europa exceto na Islândia. Em Portugal distribuem-se por todo o país, tolerando bem a presença humana.A tuberculose disseminada é caracterizada por envolvimento concorrente de dois ou mais órgãos não contíguos. Este tipo deapresentação de tuberculose é incomum, principalmente na ausência de imunodeficiência.Neste trabalho efetuou-se a deteção por biologia molecular e por cultura de Complexo Mycobacterium tuberculosis em raposasaparentemente saudáveis, encontradas mortas por atropelamento.MATERIAL E MÉTODOSColheram-se amostras de 5 animais (Figura 1), durante os anos de 2010-2012. nos concelhos de Idanha-a-Nova e Penamacor dodistrito de Castelo Branco (Figura 2). Destes, 1 era fêmea e 4 eram machos e as idades variaram entre 5 meses e 8 anos. Colheram-seamostras de diferentes órgãos (Figura 3) que foram submetidas à técnica de PCR e à cultura em meios específicos. Realizou-se aextração de DNA a partir de tecidos através do “kit” comercial “DNeasy Blood & Tissue®” (Qiagen, Hilden, Germany) e a partir decolónias através do “kit” comercial “UltraClean® Microbial DNA Isolation” (MO BIO Laboratories, Inc., Carlsbad, California) de acordocom as instruções do fabricante (Figura 4). O complexo M. tuberculosis foi identificado pela presença de MPB70 com amplificação deum fragmento de 372 pb.Vulpes vulpesFigura 2- Concelhos de Idanha-a-Nova e PenamacorFigura 1- Raposas analisadas Figura 4- Extração de DNA a partir de colóniasRESULTADOSA técnica de PCR em DNA extraído a partir dos tecidos, revelou Complexo Mycobacterium tuberculosis (CMT) no cérebro de quatroanimais (Figura 5). A cultura microbiológica de cérebro foi positiva nos 5 animais (Figura 6), tendo sido as colónias confirmadas porPCR. CMT foi detetado por biologia molecular nas amígdalas de 3 raposas, em pulmão e intestino de um animal e, nos gângliosmesentéricos e mediastínicos de outra raposa.CONSIDERAÇÕES FINAISEstes resultados confirmam a presença de tuberculose disseminada em raposas e indicam estes carnívoros como reservatórios deComplexo Mycobacterium tuberculosis no nosso país, sendo necessário esclarecer o papel das espécies silváticas na transmissãodos agentes do CMT.Figura 5- Produtos de amplificação obtidos na PCRMPB70 (M.M. - marcador molecular; Amostras; C+:controlo positivo; C-: controlo negativo).M.M  1     2  3      4     5      6     7      8     9    C+  C-Figura 6- Colónias em meio Lowenstein - Jensen ®  com Piruvato

http://repositorio.ipcb.pt/bitstream/10400.11/3274/1/Tuberculose%20Disseminada%20em%20raposas-Vermelhas%20%28Vulpes%20vulpes%29.pdf

Tuberculose disseminada com manifestações cerebrais, pulmonares, ganglionares e intestinais em raposas

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