Foi objectivo deste estudo determinar a frequência de
isolados de E. coli produtores de β-lactamases de largo
espectro (ESBLs) tanto em infecções nosocomiais como da
comunidade, e avaliar a susceptibilidade aos antibióticos
entre as estirpes produtoras e não produtoras de ESBLs. Dos
131 isolados investigados apenas 9 (6.8%) se enquadraram
nos critérios definidos pelo CLSI para screening de ESBLs,
e a sua presença foi confirmada por Etest ESBL. Estes
isolados provieram maioritariamente de infecções da
comunidade em doentes com idade avançada e história de
hospitalização prévia. A maioria (66.6%) mostrou resistência
simultânea aos β-lactâmicos estudados, às quinolonas e aos
aminoglicosídeos.It was the purpose of this study to determine the frequency 
of extended­spectrum β­Lactamases (ESBLs) producing 
isolates in E. coli, from hospital acquired and community 
infections, and to evaluate antibiotic susceptibility between 
ESBL producing and non­producing strains. Of 131 isolates 
investigated only 9 (6.8%) fulfil CLSI screening criteria for 
ESBL, and its production was confirmed by ESBL Etest. This 
strains were mainly recovered form community infections in 
old aged patients, with an history of previous hospitalisation. 
The majority (66.6%) showed simultaneous resistance to the 
studied β­lactams, the quinolones and aminoglycosides

Freitas, Francisco

Queirós, A. M.

Ribeiro, J. M.

Silva, Manuela

Repositório do Instituto Politécnico de Castelo Branco

Bioanálise / Ano III • N.º 2 • Jul/Dez - 200690 Copyright © 2006, Sociedade Portuguesa de BioAnalistas da SaúdeFrequência de Isolados Clínicos de Escherichia coli  Produtores de β-Lactamases de Largo Espectro*frAnCisCo freiTAs, José miGuel ribeiro, AnA mAriA Queirós, mAnuelA silvALaboratório de Microbiologia, Serviço de Patologia Clínica, Hospital S. Teotónio, Viseu•••••••••••••••••••••••••••••• NOTA DE INVESTIGAÇÃO / COMUNICAÇÃO BREVE ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••*Correspondência:Laboratório de Microbiologia, Hospital S. Teotónio, Viseu,Av. Rei D. Duarte, 3500 Viseu.e­mail: francyske@portugalmail.ptResumoFoi objectivo deste estudo determinar a frequência de isolados de E. coli produtores de β­lactamases de largo espectro (ESBLs) tanto em infecções nosocomiais como da comunidade, e avaliar a susceptibilidade aos antibióticos entre as estirpes produtoras e não produtoras de ESBLs. Dos 131 isolados investigados apenas 9 (6.8%) se enquadraram nos critérios definidos pelo CLSI para screening de ESBLs, e a sua presença foi confirmada por Etest ESBL. Estes isolados provieram maioritariamente de infecções da comunidade em doentes com idade avançada e história de hospitalização prévia. A maioria (66.6%) mostrou resistência simultânea aos β­lactâmicos estudados, às quinolonas e aos aminoglicosídeos.Palavras chave: E. coli • ESBL • Etest ESBLAceite para publicação: 8 de Maio de 2006AbstRActIt was the purpose of this study to determine the frequency of extended­spectrum β­Lactamases (ESBLs) producing isolates in E. coli, from hospital acquired and community infections, and to evaluate antibiotic susceptibility between ESBL producing and non­producing strains. Of 131 isolates investigated only 9 (6.8%) fulfil CLSI screening criteria for ESBL, and its production was confirmed by ESBL Etest. This strains were mainly recovered form community infections in old aged patients, with an history of previous hospitalisation. The majority (66.6%) showed simultaneous resistance to the studied β­lactams, the quinolones and aminoglycosides.Key words: E. coli • ESBL • Etest ESBLAccepted for publication: 8 May 2006A produção de β­lactamases de largo espectro (ESBLs) é o principal mecanismo de resistên­cia aos antibióticos entre a família das Enterobacte-riaceae, nomeadamente em E. coli e K. pneumoniae (1). Estas enzimas têm a particularidade de hidrolizar as oximinocefalosporinas (cefuroxima, cefotaxima, ceftriaxona, ceftazidima, cefepime e cefpiroma) e os monobactamos. Não são activas contra as cefamicinas (cefoxitina e cefotetan) e os carbapenemos, e apre­sentam como característica serem inibidas pelo ácido clavulânico (2). A maioria deriva de mutações pontu­ais das enzimas parentais TEM­1, TEM­2 e SHV­1, sendo codificadas principalmente em genes de locali­zação plasmídica, mas também cromossómica (3,4). Actualmente o Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI ­ anteriormente NCCLS) recomenda o screening de ESBLs em todos os isolados de E. coli e K. pneumoniae que apresentem CMIs ≥ 2 μg/mL frente aos antibióticos cefpodoxima, ceftazidima, aztreonamo, cefotaxima ou ceftriaxona (5). Dado não existirem dados recentes sobre a ocorrência de ESBLs em isolados clínicos de E. coli em hospitais portugueses, mas apenas a caracterização de enzimas isoladas em estirpes muito resistentes (6,7), foi nosso objectivo determinar a frequência de estirpes produtoras de ESBLs tanto em infecções nosocomiais como da comunidade, e avaliar a susceptibilidade aos antibióticos entre as estirpes produtoras e não produtoras de ESBLs.Durante um período de três meses (Janeiro a Março de 2006) 131 isolados de E. coli foram inves­tigados no Laboratório de Microbiologia do Hospital S. Teotónio, Viseu. Não se incluíram isolados duplica­Bioanálise / Ano III • N.º 2 • Jul/Dez - 200691Copyright © 2006, Sociedade Portuguesa de BioAnalistas da Saúdedos, sendo todos de pacientes diferentes. A identifica­ção das estirpes e os testes de susceptibilidade aos an­tibióticos (ampicilina, amoxicilina/ácido clavulânico, aztreonamo, ceftazidima ceftriaxona, ciprofloxacina, gentamicina, imipenemo, nitrofurantoína, cotrimoxa­zol) foram realizados no aparelho BD Phoenix® (Bec­ton Dickinson, Sparks, USA) com recurso à galeria UNMIC/ID­62 utilizando as guidelines do CLSI. Foi usada como controlo a estirpe E. coli ATCC 25922. Para a confirmação da produção de ESBLs utilizámos tiras de Etest ESBL® (AB Biodisk, Solna, Sweden) contendo num dos lados um gradiente de cefotaxima (0.25­16 μg/mL) e no outro lado cefotaxima+ácido clavulânico (0.016­1.0 μg/mL). A interpretação dos resultados foi efectuada segundo a relação CMI da cefotaxima/CMI cefalosporina+ácido clavulânico ≥8, pela aparição duma zona “fantasma” redonda (Fig. 1) ou pela deformação da elipse do lado da cefalosporina. Como controlo positivo e negativo foram usadas as estirpes H50FFUP (produtora de TEM­24) e H6FFUP cedidas pela Faculdade de Farmácia da Universidade do Porto.Dos 131 isolados investigados apenas 9 se enquadraram nos critérios definidos pelo CLSI para screening de ESBLs. Estes isolados provieram maioritariamente de infecções da comunidade em doentes com idade avançada e história de hospitalização prévia (Tabela I). Após a execução do Etest confirmatório todos se revelaram produtores de ESBLs, sendo portanto a frequência de 6.8%. No entanto, se considerarmos a frequência por origem da infecção verificamos que, na infecção nosocomial por E. coli 12.5% (3/24) são produtores de ESBLs e na infecção da comunidade 5.6% (6/107). Verificou­se resistência simultânea aos β­lactâmicos estudados, às quinolonas (ciprofloxacina) e aos aminoglicosídeos (gentamicina) em 6 (66.6%) dos 9 isolados. Quanto à susceptibilidade aos antibióticos nas estirpes não produtoras de ESBLs, verificámos que 54.9% (67/122) foram susceptíveis a todos os anti­bióticos testados, não se registando resistências ao aztreonamo, ceftriaxona, ceftazidima e imipenemo. A susceptibilidade à ampicilina, cotrimoxazol, amoxici­lina/ácido clavulânico, ciprofloxacina, gentamicina e nitrofurantoína foi respectivamente de 57.4%, 77.9%, 81.1%, 89.4 %, 95.9% e 96.5%.Recentemente, Winokur et al. verificaram que a prevalência de ESBLs é maior na América Latina e predominantemente em K. pneumoniae (45.4%). A prevalência em E. coli variava entre 4.2­8.5% em vários continentes, sendo de 5.3% na Europa (3). Em Espanha vários estudos reportaram prevalências relativamente baixas, variando de 1.55% a 3%, verificando­se também um elevado número de isolados produtores de ESBLs na comunidade. A resistência a antibióticos não β­lactâmicos (cotrimoxazol, ciprofloxacina e gentamicina) foi mais prevalente em isolados resistentes à ampicilina (8­11). Rodriguez­­Baño et al. identificaram como factores de risco da infecção na comunidade por E. coli produtora de ESBLs, a diabetes, o uso de fluoroquinolonas, infecções recorrentes do tracto urinário, admissão hospitalar prévia e idade avançada (12).Embora no nosso estudo tenhamos sido capazes de detectar a produção de ESBLs em E. coli apenas com a cefotaxima como teste confirmatório, relembramos que nem sempre isso é possível devido ao diferente perfil hidrolítico das ESBLs (as famílias TEM e SHV hidrolizam preferencialmente a ceftazidima, e a família CTX­M a cefotaxima), à hiperprodução da enzima indutível AmpC cromossómica e alteração de porinas, especialmente em isolados resistentes à cefoxitina. A presença de β­lactamases resistentes aos inibidores (IRT­β­lactamases) que apresentam mutações na sequência codificante é também uma possibilidade (2,13­16). Daí que o CLSI recomende o Fig.1 – Exemplo de um Etest ESBL confirmatório positivo (notar a zona “fantasma).FREITAS F et alBioanálise / Ano III • N.º 2 • Jul/Dez - 200692 Copyright © 2006, Sociedade Portuguesa de BioAnalistas da Saúdeuso simultâneo de pelo menos duas cefalosporinas, a cefotaxima e a ceftazidima (5). Os genes que codificam as ESBLs são usualmente encontrados em plasmídeos conjugativos, contudo, têm também sido descritos em integrões, que são estruturas genéticas altamente eficientes na captura de cassetes de genes que conferem resistência a vários grupos de antibióticos (aminoglicosídeos, quinolonas, tetraciclinas, trimetoprim, sulfonamidas), diminuindo fortemente as opções terapêuticas (17­19). O controlo e prevenção da infecção (lavagem das mãos) são portanto, altamente prioritários perante pacientes infectados com E. coli produtoras de ESBLs, devendo ser isolados dos restantes doentes de modo a evitar a ocorrência de surtos em enfermarias. A informação do laboratório também é fundamental, pelo que a ficha de resultados deve reportar a presença de ESBL, e resistência a todos os β­lactâmicos excepto aos carbapenemos (15,20).A frequência encontrada no nosso estudo (6.8%) é semelhante à encontrada para a generalidade da Europa. No entanto, tendo em conta o carácter disseminativo deste tipo de estirpes, deve perspectivar­se uma monitorização subsequente, incluindo a caracterização das enzimas produzidas.RefeRêncIAs Tabela I ­ Caracterização das 9 estirpes produtoras de ESBLs.Caracterização das estirpes CMIs no BD Phoenix (μg/mL) CMIs Etest (μg/mL)Estirpe Produto O. I. H. P. AZT CAZ CRO FOX CIP GEN CT CT/CTL0676889 Urina C Sim >16 >16 >32 ≤4 >2 >8 >16 0.0320676949 Urina C Sim >16 >16 >32 ≤4 >2 >8 >16 0.06406139319 Urina C Sim >16 >16 >32 ≤4 >2 >8 >16 0.09406157079 Ex.Vaginal C Não 16 2 >32 ≤4 ≤0.125 ≤2 >16 0.02306167119 Sangue C Não 8 ≤1 >32 ≤4 >2 ≤2 >16 0.06406197679 Urina N Sim >16 >16 >32 ≤4 >2 >8 >16 0.12506278439 Pus N Sim >16 >16 >32 ≤4 >2 >8 >16 0.06406287419 Expectoração N Sim >16 >16 >32 ≤4 >2 >8 >16 0.09406361479 Urina C Não 8 >16 >32 8 >2 ≤2 >16 0.047Legenda: O. I. – Origem da Infecção; C – Comunidade; N – Nosocomial; H.P. –Hospitalização Prévia; AZT – Aztreonamo; CAZ – Ceftazidima; CRO – Ceftriaxona; FOX – Cefoxitina; CIP – Ciprofloxacina; GEN – Gentamicina; CT – Cefotaxima; CT/CTL – Cefotaxima/Cefotaxima+Ácido Clavulânico.1. Bradford PA. Extended­spectrum beta­lactamases in the 21st century: characterization, epidemiology, and detection of this important resistance threat. Clin Microbiol Rev 2001; 14:933­51.2. Steward CD, Rasheed JK, Hubert SK, Biddle JW, Raney PM, Anderson GJ, et al. Characterization of clinical isolates of Klebsiella pneumoniae from 19 laboratories using the National Committee for Clinical Laboratory Standards extended­spectrum beta­lactamase detection methods. J Clin Microbiol 2001; 39:2864­72.3. Winokur PL, Canton R, Casellas JM, Legakis N. Variations in the prevalence of strains expressing an extended­spectrum beta­lactamase phenotype and characterization of isolates from Europe, the Americas, and the Western Pacific region. Clin Infect Dis 2001; 32 Suppl 2:S94­103.4. Tolun V, Kucukbasmaci O, Torumkuney­Akbulut D, Catal C, Ang­Kucuker M, Ang O. Relationship between ciprofloxacin resistance and extended­spectrum beta­ ­lactamase production in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae strains. Clin Microbiol Infect 2004; 10:72­5.5. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. Document M100­S10. Wayne, PA: NCCLS, 2000.6. Romero L, Lopez L, Rodriguez­Bano J, Ramon Hernandez J, Martinez­Martinez L, Pascual A. Long­­term study of the frequency of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae isolates producing extended­ ­spectrum beta­lactamases. Clin Microbiol Infect 2005; 11:625­31.Isolados Clínicos de E. coli produtores de ESBLBioanálise / Ano III • N.º 2 • Jul/Dez - 200693Copyright © 2006, Sociedade Portuguesa de BioAnalistas da Saúde7. Machado E, Coque TM, Canton R, Sousa JC, Peixe L. Emergence of CTX­M beta­lactamase­producing Enterobacteriaceae in Portugal: report of an Escherichia coli isolate harbouring blaCTX­M­14. Clin Microbiol Infect 2004; 10:755­7.8. Simões AT, Ribeiro G, da Silva GJ. Detecção de β−Lactamases de Espectro Alargado do tipo CTX­M nos Hospitais da Universidade de Coimbra. Bioanálise 2006. In press.9. Yague A, Cebrian L, Rodriguez­Diaz JC, Gonzalo­­Jimenez N, Royo G, Campillos P, et al. Expanded­­spectrum beta­lactamase­producing strains of E. coli: origin, characteristics and incidence in Southern Alicante (Spain) in the period 1999­2003. Enferm Infecc Microbiol Clin 2005; 23:76­9.10. Hernandez JR, Pascual A, Canton R, Martinez­Martinez L; Grupo de Estudio de Infeccion Hospitalaria. GEIH [Extended­spectrum beta­lactamase­producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae in spanish hospitals (GEIH­BLEE Project 2002)]. Enferm Infecc Microbiol Clin 2003; 21:77­82.11. Oteo J, Campos J, Baquero F; Spanish members of the European Antimicrobial Resistance Surveillance System. Antibiotic resistance in 1962 invasive isolates of Escherichia coli in 27 Spanish hospitals participating in the European Antimicrobial Resistance Surveillance System (2001). J Antimicrob Chemother 2002; 50:945­52. 12. Rodriguez­Baño J, Navarro MD, Romero L, Martinez­ ­Martinez L, Muniain MA, Perea EJ, et al. Epidemiology and clinical features of infections caused by extended­­spectrum beta­lactamase­producing Escherichia coli in nonhospitalized patients. J Clin Microbiol 2004; 42:1089­94.13.  d’Azevedo PA, Goncalves AL, Musskopf MI, Ramos CG, Dias CA. Laboratory tests in the detection of extended spectrum beta­lactamase production: National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) screening test, the E­test, the double disk confirmatory test, and cefoxitin susceptibility testing. Braz J Infect Dis 2004; 8:372­7. 14. Sanguinetti M, Posteraro B, Spanu T, Ciccaglione D, Romano L, Fiori B, et al. Characterization of clinical isolates of Enterobacteriaceae from Italy by the BD Phoenix extended­spectrum beta­lactamase detection method. J Clin Microbiol 2003; 41:1463­8.15. Livermore DM, Winstanley TG, Shannon KP. Interpretative reading: recognizing the unusual and inferring resistance mechanisms from resistance phenotypes. J Antimicrob Chemother 2001; 48 Suppl 1:87­102.16. Chaibi EB, Sirot D, Paul G, Labia R. Inhibitor­resistant TEM beta­lactamases: phenotypic, genetic and biochemical characteristics. J Antimicrob Chemother 1999; 43: 447­58.17. Sompolinsky D, Nitzan Y, Tetry S, Wolk M, Vulikh I, Kerrn MB, et al. Integron­mediated ESBL resistance in rare serotypes of Escherichia coli causing infections in an elderly population of Israel. J Antimicrob Chemother 2005; 55:119­22.18. Poirel L, Le Thomas I, Naas T, Karim A, Nordmann P. Biochemical sequence analyses of GES­1, a novel class A extended­spectrum beta­lactamase, and the class 1 integron In52 from Klebsiella pneumoniae. Antimicrob Agents Chemother 2000; 44:622­32.19. Machado E, Canton R, Baquero F, Galan JC, Rollan A, Peixe L, et al. Integron content of extended­spectrum­­beta­lactamase­producing Escherichia coli strains over 12 years in a single hospital in Madrid, Spain. Antimicrob Agents Chemother 2005; 49:1823­9.20. Pujol M, Peña C. El significado clínico de las betalactamasas de espectro extendido. Enferm Infecc Microbiol Clin 2003; 21:69­71.FREITAS F et al

Frequência de isolados clínicos de escherichia coli produtores de β-lactamases de largo espectro

Repositório Científico do Instituto Politécnico de Castelo Branco

Bioanálise / Ano III • N.º 2 • Jul/Dez - 2006
90 Copyright © 2006, Sociedade Portuguesa de BioAnalistas da Saúde
Frequência de Isolados Clínicos de Escherichia coli  
Produtores de β-Lactamases de Largo Espectro
*frAnCisCo freiTAs, José miGuel ribeiro, AnA mAriA Queirós, mAnuelA silvA
Laboratório de Microbiologia, Serviço de Patologia Clínica, 
Hospital S. Teotónio, Viseu
•••••••••••••••••••••••••••••• NOTA DE INVESTIGAÇÃO / COMUNICAÇÃO BREVE ••••••••••••••••••••••••••••••
••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••
*Correspondência:
Laboratório de Microbiologia, Hospital S. Teotónio, Viseu,
Av. Rei D. Duarte, 3500 Viseu.
e­mail: francyske@portugalmail.pt
Resumo
Foi objectivo deste estudo determinar a frequência de 
isolados de E. coli produtores de β­lactamases de largo 
espectro (ESBLs) tanto em infecções nosocomiais como da 
comunidade, e avaliar a susceptibilidade aos antibióticos 
entre as estirpes produtoras e não produtoras de ESBLs. Dos 
131 isolados investigados apenas 9 (6.8%) se enquadraram 
nos critérios definidos pelo CLSI para screening de ESBLs, 
e a sua presença foi confirmada por Etest ESBL. Estes 
isolados provieram maioritariamente de infecções da 
comunidade em doentes com idade avançada e história de 
hospitalização prévia. A maioria (66.6%) mostrou resistência 
simultânea aos β­lactâmicos estudados, às quinolonas e aos 
aminoglicosídeos.
Palavras chave: E. coli • ESBL • Etest ESBL
Aceite para publicação: 8 de Maio de 2006
AbstRAct
It was the purpose of this study to determine the frequency 
of extended­spectrum β­Lactamases (ESBLs) producing 
isolates in E. coli, from hospital acquired and community 
infections, and to evaluate antibiotic susceptibility between 
ESBL producing and non­producing strains. Of 131 isolates 
investigated only 9 (6.8%) fulfil CLSI screening criteria for 
ESBL, and its production was confirmed by ESBL Etest. This 
strains were mainly recovered form community infections in 
old aged patients, with an history of previous hospitalisation. 
The majority (66.6%) showed simultaneous resistance to the 
studied β­lactams, the quinolones and aminoglycosides.
Key words: E. coli • ESBL • Etest ESBL
Accepted for publication: 8 May 2006
A produção de β­lactamases de largo espectro (ESBLs) é o principal mecanismo de resistên­
cia aos antibióticos entre a família das Enterobacte-
riaceae, nomeadamente em E. coli e K. pneumoniae 
(1). Estas enzimas têm a particularidade de hidrolizar 
as oximinocefalosporinas (cefuroxima, cefotaxima, 
ceftriaxona, ceftazidima, cefepime e cefpiroma) e os 
monobactamos. Não são activas contra as cefamicinas 
(cefoxitina e cefotetan) e os carbapenemos, e apre­
sentam como característica serem inibidas pelo ácido 
clavulânico (2). A maioria deriva de mutações pontu­
ais das enzimas parentais TEM­1, TEM­2 e SHV­1, 
sendo codificadas principalmente em genes de locali­
zação plasmídica, mas também cromossómica (3,4). 
Actualmente o Clinical Laboratory Standards 
Institute (CLSI ­ anteriormente NCCLS) recomenda 
o screening de ESBLs em todos os isolados de 
E. coli e K. pneumoniae que apresentem CMIs ≥ 2 μg/mL 
frente aos antibióticos cefpodoxima, ceftazidima, 
aztreonamo, cefotaxima ou ceftriaxona (5). Dado 
não existirem dados recentes sobre a ocorrência de 
ESBLs em isolados clínicos de E. coli em hospitais 
portugueses, mas apenas a caracterização de enzimas 
isoladas em estirpes muito resistentes (6,7), foi 
nosso objectivo determinar a frequência de estirpes 
produtoras de ESBLs tanto em infecções nosocomiais 
como da comunidade, e avaliar a susceptibilidade 
aos antibióticos entre as estirpes produtoras e não 
produtoras de ESBLs.
Durante um período de três meses (Janeiro a 
Março de 2006) 131 isolados de E. coli foram inves­
tigados no Laboratório de Microbiologia do Hospital 
S. Teotónio, Viseu. Não se incluíram isolados duplica­
Bioanálise / Ano III • N.º 2 • Jul/Dez - 2006
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dos, sendo todos de pacientes diferentes. A identifica­
ção das estirpes e os testes de susceptibilidade aos an­
tibióticos (ampicilina, amoxicilina/ácido clavulânico, 
aztreonamo, ceftazidima ceftriaxona, ciprofloxacina, 
gentamicina, imipenemo, nitrofurantoína, cotrimoxa­
zol) foram realizados no aparelho BD Phoenix® (Bec­
ton Dickinson, Sparks, USA) com recurso à galeria 
UNMIC/ID­62 utilizando as guidelines do CLSI. Foi 
usada como controlo a estirpe E. coli ATCC 25922. 
Para a confirmação da produção de ESBLs 
utilizámos tiras de Etest ESBL® (AB Biodisk, Solna, 
Sweden) contendo num dos lados um gradiente 
de cefotaxima (0.25­16 μg/mL) e no outro lado 
cefotaxima+ácido clavulânico (0.016­1.0 μg/mL). A 
interpretação dos resultados foi efectuada segundo a 
relação CMI da cefotaxima/CMI cefalosporina+ácido 
clavulânico ≥8, pela aparição duma zona “fantasma” 
redonda (Fig. 1) ou pela deformação da elipse do lado 
da cefalosporina. Como controlo positivo e negativo 
foram usadas as estirpes H50FFUP (produtora de 
TEM­24) e H6FFUP cedidas pela Faculdade de 
Farmácia da Universidade do Porto.
Dos 131 isolados investigados apenas 9 se 
enquadraram nos critérios definidos pelo CLSI 
para screening de ESBLs. Estes isolados provieram 
maioritariamente de infecções da comunidade 
em doentes com idade avançada e história de 
hospitalização prévia (Tabela I). Após a execução do 
Etest confirmatório todos se revelaram produtores 
de ESBLs, sendo portanto a frequência de 6.8%. No 
entanto, se considerarmos a frequência por origem da 
infecção verificamos que, na infecção nosocomial por 
E. coli 12.5% (3/24) são produtores de ESBLs e na 
infecção da comunidade 5.6% (6/107). Verificou­se 
resistência simultânea aos β­lactâmicos estudados, às 
quinolonas (ciprofloxacina) e aos aminoglicosídeos 
(gentamicina) em 6 (66.6%) dos 9 isolados. 
Quanto à susceptibilidade aos antibióticos nas 
estirpes não produtoras de ESBLs, verificámos que 
54.9% (67/122) foram susceptíveis a todos os anti­
bióticos testados, não se registando resistências ao 
aztreonamo, ceftriaxona, ceftazidima e imipenemo. A 
susceptibilidade à ampicilina, cotrimoxazol, amoxici­
lina/ácido clavulânico, ciprofloxacina, gentamicina e 
nitrofurantoína foi respectivamente de 57.4%, 77.9%, 
81.1%, 89.4 %, 95.9% e 96.5%.
Recentemente, Winokur et al. verificaram que 
a prevalência de ESBLs é maior na América Latina 
e predominantemente em K. pneumoniae (45.4%). 
A prevalência em E. coli variava entre 4.2­8.5% em 
vários continentes, sendo de 5.3% na Europa (3). 
Em Espanha vários estudos reportaram prevalências 
relativamente baixas, variando de 1.55% a 3%, 
verificando­se também um elevado número de isolados 
produtores de ESBLs na comunidade. A resistência 
a antibióticos não β­lactâmicos (cotrimoxazol, 
ciprofloxacina e gentamicina) foi mais prevalente em 
isolados resistentes à ampicilina (8­11). Rodriguez­
­Baño et al. identificaram como factores de risco 
da infecção na comunidade por E. coli produtora 
de ESBLs, a diabetes, o uso de fluoroquinolonas, 
infecções recorrentes do tracto urinário, admissão 
hospitalar prévia e idade avançada (12).
Embora no nosso estudo tenhamos sido capazes de 
detectar a produção de ESBLs em E. coli apenas com 
a cefotaxima como teste confirmatório, relembramos 
que nem sempre isso é possível devido ao diferente 
perfil hidrolítico das ESBLs (as famílias TEM e 
SHV hidrolizam preferencialmente a ceftazidima, e 
a família CTX­M a cefotaxima), à hiperprodução da 
enzima indutível AmpC cromossómica e alteração 
de porinas, especialmente em isolados resistentes à 
cefoxitina. A presença de β­lactamases resistentes 
aos inibidores (IRT­β­lactamases) que apresentam 
mutações na sequência codificante é também uma 
possibilidade (2,13­16). Daí que o CLSI recomende o 
Fig.1 – Exemplo de um Etest ESBL confirmatório positivo 
(notar a zona “fantasma).
FREITAS F et al
Bioanálise / Ano III • N.º 2 • Jul/Dez - 2006
92 Copyright © 2006, Sociedade Portuguesa de BioAnalistas da Saúde
uso simultâneo de pelo menos duas cefalosporinas, a 
cefotaxima e a ceftazidima (5). 
Os genes que codificam as ESBLs são usualmente 
encontrados em plasmídeos conjugativos, contudo, 
têm também sido descritos em integrões, que são 
estruturas genéticas altamente eficientes na captura de 
cassetes de genes que conferem resistência a vários 
grupos de antibióticos (aminoglicosídeos, quinolonas, 
tetraciclinas, trimetoprim, sulfonamidas), diminuindo 
fortemente as opções terapêuticas (17­19). 
O controlo e prevenção da infecção (lavagem das 
mãos) são portanto, altamente prioritários perante 
pacientes infectados com E. coli produtoras de 
ESBLs, devendo ser isolados dos restantes doentes de 
modo a evitar a ocorrência de surtos em enfermarias. 
A informação do laboratório também é fundamental, 
pelo que a ficha de resultados deve reportar a presença 
de ESBL, e resistência a todos os β­lactâmicos excepto 
aos carbapenemos (15,20).
A frequência encontrada no nosso estudo (6.8%) é 
semelhante à encontrada para a generalidade da Europa. 
No entanto, tendo em conta o carácter disseminativo 
deste tipo de estirpes, deve perspectivar­se uma 
monitorização subsequente, incluindo a caracterização 
das enzimas produzidas.
RefeRêncIAs 
Tabela I ­ Caracterização das 9 estirpes produtoras de ESBLs.
Caracterização das estirpes CMIs no BD Phoenix (μg/mL) CMIs Etest (μg/mL)
Estirpe Produto O. I. H. P. AZT CAZ CRO FOX CIP GEN CT CT/CTL
0676889 Urina C Sim >16 >16 >32 ≤4 >2 >8 >16 0.032
0676949 Urina C Sim >16 >16 >32 ≤4 >2 >8 >16 0.064
06139319 Urina C Sim >16 >16 >32 ≤4 >2 >8 >16 0.094
06157079 Ex.Vaginal C Não 16 2 >32 ≤4 ≤0.125 ≤2 >16 0.023
06167119 Sangue C Não 8 ≤1 >32 ≤4 >2 ≤2 >16 0.064
06197679 Urina N Sim >16 >16 >32 ≤4 >2 >8 >16 0.125
06278439 Pus N Sim >16 >16 >32 ≤4 >2 >8 >16 0.064
06287419 Expectoração N Sim >16 >16 >32 ≤4 >2 >8 >16 0.094
06361479 Urina C Não 8 >16 >32 8 >2 ≤2 >16 0.047
Legenda: O. I. – Origem da Infecção; C – Comunidade; N – Nosocomial; H.P. –Hospitalização Prévia; AZT – Aztreonamo; CAZ – Ceftazidima; CRO – Ceftriaxona; 
FOX – Cefoxitina; CIP – Ciprofloxacina; GEN – Gentamicina; CT – Cefotaxima; CT/CTL – Cefotaxima/Cefotaxima+Ácido Clavulânico.
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Bioanálise / Ano III • N.º 2 • Jul/Dez - 2006
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Portuguese

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Frequência de isolados clínicos de escherichia coli produtores de β-lactamases de largo espectro

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