Barata, C

Loureiro dos Santos, S

Palma, J

Tavares, V

Repositório Comum

Pré-tratamento com Dithiothreitol em                           Secreções Brônquicas      Poderá o DTT melhorar a qualidade do sedimento obtido de amostras de secreções brônquicas? 1. Introdução Secreções Brônquicas – método pouco invasivo, rápido e económico  • Diagnóstico precoce de lesões bronco-pulmonares; • Obtenção de material denso e mucoide, difícil processamento.(1-3) Dithiothreitol  (DTT) – facilita o processamento de amostras mucoides • Agente mucolítico (quebra das pontes de dissulfeto entre as mucoproteínas); (1, 4, 5) • Não compromete a preservação morfológica.(6) 2. Objetivo  Avaliar os resultados do processamento de secreções brônquicas com e sem pré-tratamento com DTT. 3. Materiais e Métodos Secreções Brônquicas – 23 casos (Janeiro a Março 2016)  Processamento Habitual (A) 1. Centrifugar a amostra 2. Decantar o sobrenadante 3. Lavagem 10' 30mL Cytolyt® 4. Centrifugar a amostra 5. Decantar o sobrenadante e avaliar o pellet 6. Passar para Preservcyt® Processamento com Pré-tratamento com DTT (B) 6. Lavagem 10' 30mL Cytolyt® + 1mL sol. DTT (0,5g de DTT + 6mL de Cytolyt®) 7. Centrifugar a amostra 8. Decantar o sobrenadante 9. Passar para Preservcyt® Lâmina Adicional 4. Resultados 6. Referências Bibliográficas  Tabela 1 – Valores do teste de Levene e teste t comparando as avaliações dos diferentes parâmetros no Processamento Habitual e no Processamento com pré-tratamento com DTT. Tabela 2 – Valores do teste de Levene e teste t comparando as médias globais do Processamento Habitual e do Processamento com pré-tratamento com DTT. Thinprep® 2000  Coloração Papanicolau Vanessa Tavares; Catarina Barata; João Palma; Sofia Loureiro dos Santos Serviço de Anatomia Patológica – Hospital Vila Franca de Xira   Celularidade Sobreposição celular Muco Preservação celular Afinidade tintorial Sig. 0,000 0,017 0,000 1,000 0,000 t -2,464 -5,396 -3,768 0,000 2,535   Sig. t Avaliação Global 0,008 -4,050 Imagem 1 – Comparação dos resultados obtidos com o Processamento Habitual (A) e com o Processamento com pré-tratamento com DTT (B). A – Observa-se escassa celularidade, presença de muco e sobreposição celular (50x).        B – Observa-se elevada celularidade, ausência de muco e disposição celular em monocamada (50x). B Imagem 2 – Grupos celulares em grande ampliação - preservação celular equivalente.  A – Processamento Habitual (400x). B – Processamento com pré-tratamento com DTT (400x). A A B A1 B1 Imagem 3 – Campos representativos da discrepância de diagnóstico verificada num dos casos. A1 e A2 – Processamento Habitual, dado como suspeito: baixa celularidade e difícil leitura citológica (400x). B1 e B2 – Processamento com pré-tratamento com DTT, dado como positivo: maior celularidade e representatividade de células neoplásicas (400x). Facilita a leitura citológica, podendo aumentar a acuidade diagnóstica: • ↑ Celularidade • ↓ Sobreposição celular e muco • Mantém a morfologia celular Poderá comprometer a coloração: •↓ Afinidade tintorial  O pré-tratamento com DTT melhora significativamente a qualidade global do sedimento.  B2 A2 1. Effects of homogenization of induced sputum by dithiothreitol on polymorphonuclear cells. Van overveld, F.J. et al. 2005, Journal of physiology and pharmacology, Vols. 56, Supp 4, pp. 143-154; 2. Cytology Stuff. Respiratory Cytology. [Online] 2 de Março de 2016. http://www.cytologystuff.com/study/nongynintro2.htm; 3. WebMD. Lung Disease & Respiratory Health Center, Sputum Cytology. [Online] 2 de Março de 2016. http://www.webmd.com/lung/sputum-cytology; 4. Thermo Fisher Scientific. DTT (dithiothreitol), Reducing Agents. [Online] 2 de Março de 2016. https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/R0861; 5. Bacteriology of Sputum in Cystic Fibrosis: Evaluation of Dithiothreitol as a Mucolytic Agent. Hammerschlag, M. R. et al. 1980, Journal of clinical microbiology, vols. 11, no. 6, pp. 552-557; 6. A technique for quantitative cytology of nasal secretions. Lee, H.S. et al. 1991, European Archives of Oto-Rhino-Laryngology, Vol. 248, pp. 406-408. B Avaliação das Lâminas  2 Patologistas Registo de Discrepâncias Diagnósticas   Celularidade (considerando 5 campos de 100X) Sobreposição celular Muco Preservação celular Afinidade tintorial 0 < 2 grupos de células brônquicas por campo 100x Impossibilita a avaliação Impossibilita a avaliação Ausente Inadequada 1 = 2 grupos de células brônquicas por campo 100x Limita a avaliação Limita a avaliação Comprometida, que dificulta a avaliação _ 2 > 2 grupos de células brônquicas por campo 100x Não interfere na avaliação Não interfere na avaliação Presente Adequada 5. Discussão e Conclusão 

Pré-tratamento com Dithiothreitol em Secreções Brônquicas

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