Aguado-Martínez, Adriana

Fernández-García, A.

Gómez-Bautista, Mercedes

Marugán-Hernández, Virginia

Ortega-Mora, Luis Miguel

Regidor-Cerrillo, Javier

Risco-Castillo, V.

Álvarez-García, Gema

Repositorio Institucional de la Universidad de Córdoba

90 PROTEÓMICA • NÚMERO 1 • FEBRERO 2008Análisis proteómico en protozoos formadores de quistes relevantes en sanidad animalMarugán-Hernández V1, Regidor-Cerrillo J1, Fernández-García A1, Álvarez-García G1, Aguado-Martínez A1, Risco-Castillo V1, Gómez-Bautista M, Ortega-Mora L.M1. 1 Grupo SALUVET. Departamento de Sanidad Animal, Facultad de Veterinaria, Universidad Complutense de Madrid, 28040-Madrid, Spain.IntroducciónEn la actualidad la neosporosis bovina, originada por Neospora caninum, está considerada como una de las principales causas de fallo reproductivo en el ganado bovino (Dubey et al., 2007). Por su parte la besnoitiosis bovina, causada por Besnoitia besnoiti, provoca esterilidad en los machos, deterioro del es-tado corporal en las hembras y se encuentra en ex-pansión en los países del sur de Europa (Cortes et al., 2005). Ambos agentes presentan en su ciclo biológico dos estadios diferentes de desarrollo, el taquizoíto - responsable de la fase aguda de la infección - y el bradizoíto - responsable de la fase crónica-. Por otra parte, comparten organelas típicas del phylum Api-complexa (roptrias y micronemas) que intervienen en los procesos de adhesión-invasión de la célula hospedadora y que parecen estar relacionadas con su virulencia. Nuestro interés reside en identifi car proteínas implicadas en la virulencia y/o específi cas de estadio de N. caninum y B. besnoiti mediante el empleo de técnicas proteómicas, las cuales podrían ser de utilidad diagnóstica e inmunoprofi láctica.Material, métodos y resultadosLa técnica Ettan 2-D DIGE se empleó en primer lugar para estudiar la variabilidad en el proteoma de tres aislados de N. caninum que presentaron diferen-cias de patogenicidad en un modelo experimental murino (Collantes-Fernández et al., 2006). Se de-tectó una expresión diferencial signifi cativa (± 1,3, p<0,05) en un número de manchas proteicas que varió en función del par de aislados comparado (de 9 a 65). Algunas de las proteínas fueron identifi cadas (NcNTPasa, NcMIC1 y actina) están involucradas en los procesos de invasión/ adhesión celular del parásito. Esta técnica también se empleó en la iden-tifi cación de proteínas específi cas de estadio (taqui-zoíto o bradizoíto) tanto en N. caninum como en B. besnoiti. Un total de 82 y 262 manchas proteicas se expresaron signifi cativamente de forma diferencial entre ambos estadios en N. caninum y B. besnoiti, respectivamente. En cada caso se identifi caron al menos 10 proteínas específi cas de bradizoíto me-diante espectrometría de masas, destacando en B. besnoiti las enzimas ENO1 y LDHII, descritas en otros protozoos apicomplexa. Finalmente, el últi-mo abordaje consistió en la obtención de fracciones enriquecidas en micronemas y/o roptrias a partir de taquizoítos de N. caninum mediante fraccionamiento celular (Kawazoe et al., 1992). Las distintas fraccio-nes obtenidas mostraron perfi les protéicos diferentes por SDS-PAGE y la selección de las fracciones de interés se realizó mediante western blot con anti-cuerpos específi cos frente a proteínas presentes en estas organelas. A partir de estas fracciones se está procediendo a la identifi cación de nuevas proteínas. ConclusionesLos resultados preliminares obtenidos ponen de manifi esto la utilidad de las técnicas proteómicas en el estudio de diferentes aspectos de la biología de estos protozoos relevantes en Sanidad Animal, posibilitando la identifi cación de nuevas dianas te-rapéuticas e inmunoprofi lácticas implicadas en la virulencia y/o específi cas de estadio. BibliografíaDubey J.P., Schares G., Ortega-Mora, L.M. Clin. Mi-crobiol. Rev. 2007, 20, 323-367.Cortes H., Leitao A., Vidal R., Vila-Vicosa M.J., et al. Vet. Rec. 2005, 157, 262-264.Collantes-Fernández E., López-Pérez I., Alvarez-Gar-cía G., Ortega-Mora L.M. Infect. Immun. 2006, 74, 2491-4. Kawazoe, U., Tomley, F.M., Frazier, J.A. Parasitology 1992, 104, 1-9.

Análisis proteómico en protozoos formadores de quistes relevantes en sanidad animal

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