Barderas, María G.

Benito-Martín, A.

Calvo, Enrique

Cuesta, Fernando de la

Fernández-Fernández, B.

López, J.A.

Martín-Lorenzo, M.

Ortiz, A.

Posada, María

Ramos, A.

Vivanco, Fernando

Zubiri, Irene

Álvarez-Llamas, Gloria

Repositorio Institucional de la Universidad de Córdoba

PROTEÓMICA                           Número 8, Febrero 2012 Comunicaciones Orales                                        S4: Proteómica Biomédica  51O18 Análisis proteómico de exosomas de orina humana en la búsqueda de marcadores de nefropatía diabética Zubiri I1, Benito-Martin A2, Calvo E3, Posada M1, Martin-Lorenzo M1, De la Cuesta F4, Lopez JA3, Barderas MG4, Fernandez-Fernandez B2, Ramos A2, Ortiz A2, Vivanco F1,5± Alvarez-Llamas G1± 1Departamento de Inmunología, IIS-Fundación Jiménez Díaz, Madrid, España; 2Departmento de Nefrología, IIS-Fundación Jiménez Díaz, Madrid, España; 3Unidad de Proteómica, Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares, Madrid; 4Departamento de Fisiopatología Vascular, Hospital Nacional de Parapléjicos, SESCAM, Toledo, España 5 Departamento de Bioquímica y Biología Molecular I, Universidad Complutense, Madrid, España ±Misma contribución al trabajo por parte de ambos autores  izubiri@fjd.es La nefropatía diabética (ND) es la principal causa de fallo renal. El diagnóstico se realiza cuando la proteinuria está establecida y ya ha ocurrido un daño renal irreversible. Las primeras etapas de la enfermedad son silentes siendo necesario descubrir nuevas dianas moleculares que permitan un diagnóstico temprano. Los exosomas de orina son vesículas membranosas de 40-100 nm de tamaño, liberados por células epiteliales renales. Dado que proporcionan información valiosa sobre distintos procesos que tienen lugar en el riñón, suponen una prometedora fuente de potenciales biomarcadores. El objetivo de este estudio es analizar la composición proteica de los exosomas de orina y su importancia en el diagnóstico de la ND. Se optimizó el aislamiento de exosomas, confirmándolo después mediante microscopía electrónica y Western-blot. Dada la elevada proteinuria en las muestras de pacientes, fue necesaria una ecualización del contenido en albúmina asociado a la fracción exosomal obtenida de las orinas de paciente, ya que ésta imposibilitaba la comparación entre grupos y enmascaraba proteínas minoritarias. Se probaron distintas estrategias para la depleción de albúmina y se combinaron con los métodos de aislamiento testados para optimizar el proceso. Se realizó un estudio semicuantitativo, libre de marcaje, por LC-MS/MS comparando el proteoma de exosomas aislados de orina de controles sanos con aquellos aislados de orina de pacientes con ND en un estadio avanzado. Se identificaron 562 proteínas, 200 de las cuales habían sido previamente descritas en exosomas de orina, 94 descritas en exosomas provenientes de otras fuentes y 268 no se habían descrito con anterioridad. En base a la frecuencia con la que se identificaron en las distintas réplicas y el número de péptidos únicos identificados en cada una de ellas, pudimos observar un sub-grupo de 5 proteínas aumentadas en los exosomas de pacientes con ND, estas variaciones están siendo validadas por diferentes técnicas. 

Análisis proteómico de exosomas de orina humana en la búsqueda de marcadores de nefropatía diabética

Análisis proteómico de exosomas de orina humana en la búsqueda de marcadores de nefropatía diabética

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