Serna-Sanz, Antonio

Repositorio Institucional de la Universidad de Córdoba

42 PROTEÓMICA • NÚMERO 1 • FEBRERO 20082. MODIFICACIONES POSTRADUCCIONALESHerramientas de cuantifi cación en fosfoproteómica: el uso de la tecnología híbrida triple cuadrupolo- trampa de iones 4000 QTRAPSerna A.Applied Biosystems Madrid.La cuantifi cación es una técnica dentro de la proteómica que está adquiriendo una importancia creciente como herramienta fundamental para el entendimiento de numerosos procesos biológicos. En transducción de señal o en la búsqueda de bio-marcadores, pequeños cambios en los niveles de ciertas proteínas o de sus isoformas, pueden en rea-lidad esconder la clave para entender mejor ciertos mecanismos celulares. La fosforilación es una mo-difi cación post-traduccional que altera o modifi ca las características fi sicoquímicas de las proteínas. Este cambio puede afectar a su solubilidad, a su estructura terciaria y en defi nitiva a su actividad o función. Estas variaciones no son más que los deto-nadores de otros cambios más profundos que van a concluir con una respuesta celular a un determinado estímulo. La fosforilación afecta a cerca del 30% del proteoma, y alrededor del 10% de esas fosfori-laciones, representan cambios que regulan procesos de vital importancia en la célula. Parece obvio por tanto, resaltar la importancia no solo de la identifi -cación de las proteínas fosforiladas y sus residuos de fosforilación, sino sobre todo, de la cuantifi ca-ción de los cambios en el equilibrio entre las distin-tas isoformas. Hemos de entender la fosforilación como un proceso altamente dinámico. Trabajar en la identifi cación de sitios de fosforilación requiere una sólida estrategia y equipos que gocen de cierta versatilidad y sensibilidad en el análisis. Si además queremos cuantifi car los cambios que están ocu-rriendo, necesitamos equipos que ofrezcan un alto rango dinámico y una estrategia de cuantifi cación reproducible. En la siguiente exposición se destaca-rá el papel que puede desempeñar en estos estudios los métodos de marcaje isobárico como el iTRAQ y la importancia de los métodos dirigidos de análisis (MRMs) empleando triples cuadrupolos, en la ca-racterización y cuantifi cación de fosfopéptidos.Monomeric and heterodimeric differential phosphorylation pattern in the Cyclin-A2/CDK2 complexCasado-Vela, J.; Martinez, J.; Romero, S.; Casal, I.J.Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas, CNIO, MadridThe Cyclin-A2/CDK2 is a protein heterodimer with kinase activity that plays a key role in centro-some duplication and meiotic cell division. In this study we used baculovirus-infected cells for the production of both, monomers and the heterodimer. We used a segmented linear ion trap mass spectro-meter to identify the phosphorylated residues in Mus musculus Cyclin-A2 and CDK2 proteins, after individual expression in baculovirus and after for-mation of the heterodimer. By using a combination of trypsin and chymotrypsin digests to increase the sequence coverage and data dependent neutral loss 

Herramientas de cuantificación en fosfoProteómica: el uso de la tecnología híbrida triple cuadrupolo-trampa de iones 4000 QTRAP

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