Al-Massadi, Omar

Alonso, Jana

Roca-Rivada, Arturo

Seoane, Luisa M.

Repositorio Institucional de la Universidad de Córdoba

40 3527(Ï0,&$1Ò0(52)(%5(52The utility of Multiple Reaction Monitoring (MRM) on triple quadrupole based MS systems for biomarker verification/validation studies is currently an active area of investigation, driven by the well known sensitivity and selectivity at-tributes of this type of MS approach. As more extensive protein panels need to be monitored in a targeted way across multiple samples, hig-her MRM multiplexing is becoming essential for throughput.  The challenges of assay develop-ment and running these large scale studies are becoming better understood,  the need for rapid assay development, the need for higher multi-plexing and the need for more robust assays are some of the key challenges. Intelligent Use of Retention Time for Higher Order Multiple Reaction Monitoring Multiplexing – Scheduled MRM™ AlgorithmAntonio Serna Sanz Applied BiosystemsIn this work, the unique combination of triple quadrupole and ion trapping capabilities of the hybrid triple quadrupole - linear ion trap mass spectrometer (QTRAP® System) has been utilized to create 100s RIKLJKTXDOLW\VSHFL¿F050WUDQVLWLRQVIRUPXOWLSOHpeptides to many plasma proteins.  Iterative analysis SURYLGHGUDSLGUH¿QHPHQWRI050SDUDPHWHUVZL-thout requiring synthetic peptides. Intelligent use of retention time using new acquisition software enables many more MRM transitions to be included in a single acquisition method, while maintaining good peak area reproducibility. The analytical reproduci-bility of the MRM method developed was found to be extremely high, even in plasma, with the majority of peptides being measured with %CV<10. En los últimos años el tejido adiposo ha pasado de considerarse un órgano inerte con función exclu-siva de almacén y movilización de ácidos grasos a FDOL¿FDUVHFRPRHOyUJDQRHQGRFULQRPiVJUDQGH\dinámico del cuerpo. Desde el descubrimiento de la leptina como principal hormona reguladora secre-tada por el tejido adiposo, han ido surgiendo más moléculas llamadas adipokinas, implicadas en di-ferentes aspectos de la regulación del metabolismo. Sin embargo, las adipokinas descubiertas hasta aho-ra no llegan a explicar convincentemente los com-plejos mecanismos reguladores de la homeostasis energética ni el desarrollo de los procesos asociados a la obesidad u otros desórdenes alimentarios. Bajo Obesidómica: caracterización del secretoma del tejido adiposo de diferentes localizaciones anatómicasArturo Roca-Rivada1,2,3; Jana Alonso 4; Omar Al-Massadi1,2,3; Luisa María Seoane1,2, Felipe Casanueva1,2,3, María Pardo1,21Ciber Fisiopatología de la Obesidad y Nutrición; 2Laboratorio de Endocrinología Molecular y Celular, Complexo Hospitalario Universitario de Santiago (CHUS/SERGAS); 3 Departamento de Medicina (Univer-sidade de Santiago de Compostela); 4 Laboratorio de proteómica, Instituto de Investigaciones Biómédicas (CHUS/SERGAS)3527(Ï0,&$1Ò0(52)(%5(52 41este contexto es necesaria la búsqueda de nuevas señales secretadas por este órgano para una mejor comprensión de su funcionamiento [1].Hace tan solo unos pocos años que se empezó a aplicar las técnicas proteómicas al estudio del tejido DGLSRVRVLQHPEDUJRGHELGRDGLYHUVDVGL¿FXOWDGHVtécnicas innatas  a la naturaleza de este tejido, se ha avanzado poco comparado con estudios similares para otro tipo de tejidos. Los estudios sobre la se-creción del tejido adiposo son recientes y escasos y hasta la fecha no se ha realizado un estudio compa-rativo entre los secretomas de los distintos tipos de depósitos grasos [1].Objetivos1. Optimización y puesta a punto de las técni-cas de proteómica para aplicar al estudio de tejido adiposo procedente de distintos depósitos grasos; 2. Realización de un mapa de referencia de la se-creción de tejido adiposo visceral, subcutáneo y JRQDGDO,GHQWL¿FDFLyQ\FDUDFWHUL]DFLyQGHSUR-WHtQDV VHFUHWDGDV HVSHFt¿FDVGH FDGD WHMLGRJUDVR4. Estudio diferencial de los secretomas de los tres GHSyVLWRVJUDVRVHQGLIHUHQWHVHVWDGRV¿VLROyJLFRVy nutricionales (ad libitum, ejercicio, anorexia y REHVLGDG 9DOLGDFLyQ \ HVWXGLR¿VLROyJLFR GHSURWHtQDVLGHQWL¿FDGDVGHLQWHUpVMétodosSe ha usado como modelo experimental ratas macho Sprague Dawley en condiciones ad libitumpara la realización de los mapas de referencia. Losexplantes de tejido adiposo se incubaron in vitro y los secretomas resultantes se concentraron y preci-pitaron para ser sometidos a electroforesis bidimen-sional y espectrometría de masas (MALDI-TOF/72)/DVSURWHtQDVLGHQWL¿FDGDVVHKDQFDUDFWHUL-]DGR\FODVL¿FDGRVHJ~QODEDVHGHGDWRV8QL3URW\el software del servidor SecretomeP 2.0 atendiendo a la presencia/ausencia de péptido señal (SignalP) o su adherencia a una ruta de secreción no clásica. El estudio de expresión diferencial se está realizando con el software Ludesi REDFIN 3, Sweden.ResultadosHemos completado los tres primeros objetivos H LGHQWL¿FDGRXQ WRWDOGHSURWHtQDVGLIHUHQWHVdel secretoma de grasa visceral, 87 de subcutánea y 91 de gonadal. Figura 1. Proteínas comunes secretadas por los tres depósi-tos grasos. Localización en el secretoma de grasa visceral El 58% de las proteínas de grasa visceral corres-pondieron a proteínas secretadas, el 54% en sub-cutánea y el 45% en gonadal (Tabla 1 y 2). Se han detectado adipokinas clásicas como la adiponectina y el retinol-binding protein 4, así como proteínas todavía no asociadas a este tejido que están siendo validadas.ConclusionesEl análisis de los secretomas de tejido adiposo muestra patrones de secreción diferente dependien-do de la localización anatómica en condiciones adlibitum (Tabla 2). También se muestra la utilidad de ODSURWHyPLFDSDUD OD LGHQWL¿FDFLyQGHDGLSRNLQDVya conocidas implicadas en diversos procesos meta-bólicos, así como de proteínas con funciones no tan conocidas en este tejido. El siguiente paso será hacer un estudio diferencial bajo diferentes condiciones ¿VLROyJLFDV42 3527(Ï0,&$1Ò0(52)(%5(52AgradecimientosCIBERobn (ISCIII), FIS (ISCIII), Merk-Serono y Fundación MM. A.R. está contratado por el pro-grama Lucas Labrada (Xunta de Galicia); L.M.S. y M.P. son investigadoras del SNS Miguel Servet (SERGAS/ISCIII).Tabla1. &ODVL¿FDFLyQGHODVSURWHtQDVLGHQWL¿FDGDVSRU0$/',72)72)GHORVWHMLGRVDGLSRVRVYLVFHUDOVXEFXWiQHR\gonadal según los criterios: Proteínas totales, tipo de secreción y proteínas comunes entre los tres depósitos grasos.Visceral Subcutánea Gonadal3URWHtQDVLGHQWL¿FDGDVWRWDOHV   91Proteínas secretadas totales 109 47 49SignalP   Ruta de secreción no clásica   Proteínas comunes 27Proteínas secretadas comunes 15Tabla 2. 3URWHtQDVVHFUHWDGDVFRPXQHVDORVWUHVGHSyVLWRVJUDVRV'HODVSURWHtQDVVHFUHWDGDVHLGHQWL¿FDGDVSRUMALDI-TOF/TOF sólo 15 son comunes a los tres tipos de depósitos grasos.Nº Spot Secretome P2.0 Nombre Proteína Nº Acceso1 SignalP N'DJOXFRVHUHJXODWHGSURWHLQ *53B5$72 SignalP Serum albumin $/%8B5$7 SignalP Calreticulin &$/5B5$74  Alpha-enolase (12$B5$75  Gamma-enolase (12*B5$76 SignalP Guanine deaminase *8$'B5$77 0.512 Actin, gamma-enteric smooth muscle $&7+B5$7 SignalP Cathepsin D &$7'B5$79 SignalP 3URWHLQGLVXO¿GHLVRPHUDVH 3',$B5$710 0.575 L-lactate dehydrogenase A chain /'+$B5$711 0.797 Fatty acid-binding protein, adipocyte )$%3B5$712 SignalP Transthyretin 77+<B5$7  Thioredoxin 7+,2B5$714  Ubiquitin 8%,4B&5,*515 SignalP Serotransferrin 75)(B5$7Referencias[1] Breitling R. Robust signaling networks of the adipose secretome. Trends in Endocrinol Metab 2009; 20: 1-7.

Obesidómica: caracterización del secretoma del tejido adiposo de diferentes localizaciones anatómicas

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