Barón, M.

Pineda, M.

Sajnani, C.

Repositorio Institucional de la Universidad de Córdoba

72 PROTEÓMICA • NÚMERO 1 • FEBRERO 2008defence/repair; 4) miscellaneous; 5) Unknown; 6) Not identifi ed. Membrane protein complexes were also studied using BN-PAGE. The BN-SDS PAGE technique has been proven to be a good method to resolve highly hydrophobic integral membrane proteins from chromoplast preparations. These membrane protein complexes are just now being analyzed by nanoLC/ESI-Q-TOF. With BN-PAGE we have been able to get for the fi rst time the chro-moplast membrane pattern and to identify all sub-units of the ATPase complex and 2 subunits of the NdhI complex. The last one was also confi rmed by in gel enzymatic assay, indicating a possible role of that complex in chromorespiration.ReferencesCamara B, Hugueney P, Bouvier F, Kuntz M, Moneger R (1995). Int Rev Cytol 163:175-247.Cheung AY, McNellis T, Piekos B (1993). Plant Physiol 101:1223-1229.Fraser PD, Bramley PM (2004). Prog Lipid Res 43:228 –265.Krinski NI, Johnson EL (2005).  Mol Asp Med 26: 459-516.Reisinger V, et al. (2006). Proteomics 6:suppl2:6-15Tannu NS and Hemby SE (2006). Nat Protocols 1(4):1732-42Cambios inducidos por el virus del moteado suave del pimiento (PMMoV) en el proteoma cloroplastídico de Nicotiana benthamianaPineda, M.1,2, Sajnani, C.1,2 y Barón, M.1,*1: Estación Experimental del Zaidín, CSIC. C/ Profesor Albareda, 1. C.P. 18008. Granada (España). 2: Estos autores han contribuido por igual y éstán colocados en orden alfabético. IntroducciónEl uso de la técnicas proteómicas para el aná-lisis de la respuesta de las plantas a cambios en su entorno está mereciendo un interés creciente (ver revisiones Rossignol et al., 2006; Jorrín et al., 2007). El cloroplasto ha resultado ser un efi caz sensor am-biental y en los últimos años se han registrado nota-bles avances en el conocimiento de su proteoma (ver PPDB, http://ppdb.tc.cornell.edu/subproteome.aspx; van Wijk 2004). Análisis proteómicos recientes han destacado además el papel de este orgánulo en la defensa de la planta frente al ataque por patógenos y en las rutas de señalización que éstos desencadenan (Jones et al. 2006; Zhou et al. 2006). En ensayos previos con plantas de Nicotiana benthamiana in-fectadas con PMMoV hemos detectado cambios en el proteoma cloroplastídico de la planta huésped que afectaban al sistema de oxidación/fotolisis del agua (Pérez-Bueno et al., 2004); en el presente trabajo, hemos profundizado en el impacto causado por la infección viral en la expresión proteica de este or-gánulo. Material y métodosEl cultivo de plantas, así como la infección ex-perimental, se realizaron según Pérez-Bueno et al., (2004) y las preparaciones cloroplastídicas se ais-laron de plantas control e infectadas (Reche et al., 1997) a los 14 días post-inoculación. Los cambios en el proteoma cloroplastídico de N. benthamia-na durante la infección con la cepa española de PMMoV (PMMoV-S) fueron analizados mediante electroforesis bidimensional  (rangos de pH 4-7 y 6-11; Pineda, 2007), seguida de espectrometría de masas (MALDI-TOF/TOF MS) y búsqueda en bases de datos.Resultados y conclusionesLa técnica de electroforesis bidimensional permitió la obtención de mapas proteicos de clo-roplastos de plantas control, en los que se distin-guieron  al menos 200 manchas, de las cuales un 75% aparecieron en el rango de pH 4-7. Se consi-guieron identifi car un total de 72 polipéptidos, 55 PROTEÓMICA • NÚMERO 1 • FEBRERO 2008 73de ellos en el rango de pH 4-7. La mayor parte de las proteínas identifi cadas pertenecían a la cadena de transporte de electrones fotosintético y al ciclo de Benson-Calvin. La infección por PMMoV-S de plantas de N. benthamiana indujo la regulación a la baja de algunas proteínas constituyentes del cloroplasto. BibliografíaJones, A.M.E., Thomas, V., Bennett, M.H., Mansfi eld, J, Grant, M. Plant Physiol. 2006, 142, 1603-1620.Jorrín, J.V., Maldonado, A.M., Castillejo, M.A. Proteo-mics 2007, 7, 2947-2962.Pérez-Bueno, M.L., Rahoutei, J., Sajnani, C., Gar-cía-Luque, I., Barón, M. Proteomics 2004, 4, 418-425.Pineda, M. Tesis Doctoral, Universidad de Granada. 2007, 193-224.Reche, A., Lázaro, J.J., Hermoso, R., Chueca, A., López Gorgé, J. Physiol. Plant. 1997, 101, 463-470.Rossignol, M., Peltier, J.-B., Mock, H.-P., Matros, A., Maldonado, A.M., Jorrín, J.V. Proteomics, 2006, 6, 5529-5548.Van Wijk, K.J. Plant Physiol. Biochem. 2004, 42, 963-977.Zhou, W., Eudes, F., Laroche, A. Proteomics 2006, 6, 4599-4609.Modifi caciones del proteoma nuclear de Arabidopsis thaliana en respuesta a cambios en el medioRibeiro M, Ruiz MT, Romero JM, Valverde F.Instituto de Bioquímica Vegetal y Fotosíntesis.CSIC y Universidad de Sevilla. Av. Américo Vespucio, 49. 41092 SevillaIntroducciónLa proteómica vegetal es un campo de investiga-ción emergente que cobra gran interés para el trata-miento holístico de los sistemas biológicos (Chen y Harmon, 2007). Dado que se encuentra todavía lejos de igualar los estándares de los sistemas de levadu-ras y mamíferos, cualquier información acerca de un subproteoma vegetal y sus modifi caciones en respues-ta a distintas condiciones de crecimiento o estrés, ad-quiere un alto valor. Las plantas son organismos sésiles que responden a cambios en el medio modifi cando sus características fi sicoquímicas, lo que les otorga una gran plasticidad (Casal et al., 2004). Por esta razón, los núcleos vegetales presentan un alto numero de proteínas implicadas en mecanismos de transducción de señales y regulación génica (Bae at al., 2003).En nuestro laboratorio estamos interesados en los cambios que ocurren en el subproteoma nuclear de A. thaliana en respuesta al suministro de azúca-res. La función reguladora de los azúcares es cono-cida desde hace tiempo. Sin embargo, poco se sabe acerca de la maquinaría transcripcional involucrada, sobre todo qué factores de transcripción controlan la expresión de genes sometidos a regulación por azúcares. En ese sentido hemos desarrollado un protocolo con el cual, mediante un acercamiento proteómico, pretendemos identifi car los factores de transcripción y proteínas señalizadoras que modulan la respuesta en función del azúcar añadido.Material y métodosEl método se basa en la utilización de dos téc-nicas bioquímicas de elevada resolución: la electro-foresis bidimensional y la espectrometría de masas MALDI-TOF. El protocolo diseñado se basa en la purifi cación de núcleos de plantas de A. thaliana var. Col-0 cultivadas en medio MS (control) y medio MS suplementado con 5% (p/v) de sacarosa; extracción de las proteínas nucleares con alta fuerza iónica y en-riquecimiento de las muestras en potenciales factores de transcripción. Este último paso incluye tratamien-tos cromatográfi cos clásicos como la fi ltración en gel en columna de Sephadex, y una cromatografía de afi nidad en la que se utiliza una matriz de heparina-

Cambios inducidos por el virus del moteado suave del pimiento (PMMoV) en el proteoma cloroplastídico de Nicotiana benthamiana

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