Aragüez-Rey, I.

Botella, M.A.

Medina-Escobar, N.

Valpuesta, M.

Repositorio Institucional de la Universidad de Córdoba

62 PROTEÓMICA • NÚMERO 1 • FEBRERO 20085. PROTEÓMICA VEGETALAnálisis mediante electroforesis bidimensional de las diferencias de expresión proteica producidas durante la maduración del fruto y entre especies cultivadas (Fragaria x ananassa) y silvestres (Fragaria vesca) de fresaAragüez-Rey I, Botella M A, Valpuesta V, Medina-Escobar, NDepartamento de Biología Molecular y Bioquímica. Universidad de Málaga. España.IntroducciónHasta ahora únicamente se han publicado dos estudios de proteómica de fresa, y en ellos sólo se analizaron diferencias entre frutos maduros de diferentes variedades (Hjernø et al., 2006; Alm et al., 2007). Mediante electroforesis bidimensional hemos estudiado los cambios proteicos que ocurren en la transición de fruto verde a maduro, así como las diferencias que existen entre frutos rojos de es-pecies cultivadas (Fragaria x ananassa) y silvestres (Fragaria vesca).Material y métodosLa extracción de proteínas de frutos de fresa se optimizó solubilizando las proteínas en fenol (Sa-ravanan y Rose, 2004; Zheng et al., 2007). Para la generación de los geles bidimensionales se emplea-ron tiras con gradiente de pH inmovilizado de 7 cm y 17 cm, de rangos de pH 3-10 lineal y 5-8 lineal. Los geles se tiñeron con Azul de Coomassie y se analizaron las imágenes de tres réplicas de cada uno de ellos con el programa informático PDQuest, bus-cándose proteínas de diferente abundancia entre los extractos estudiados. Las proteínas seleccionadas se analizaron mediante MALDI-MS/MS para obtener la huella peptídica, y las búsquedas se realizaron con MASCOT en las bases de datos MSDB y FREST (base de datos de ESTs de fresa).ResultadosLos primeros experimentos se centraron en el pro-ceso de maduración, y los primeros geles bidimensio-nales (rango 3-10 lineal, 7 cm) permitieron comprobar la reproducibilidad tanto entre diferentes extracciones proteicas, como entre duplicados, y en diferentes apa-ratos de isoelectroenfoque. Los geles analíticos corres-pondientes a los estados de maduración verde y rojo maduro se generaron con tiras con gradiente de pH inmovilizado de rangos 3-10 ó 5-8, ambos de 17 cm. Las tinciones con Azul de Coomassie permitieron re-solver unos 400 puntos proteicos con pI entre 5 y 8, y masa molecular comprendida entre 15 kDa y 90 kDa. Las imágenes de los geles se analizaron con el fi n de seleccionar proteínas expresadas más de diez veces en frutos verdes o rojos, para su posterior identifi cación por espectrometría de masas. Siguiendo la misma metodología se analizaron extractos de proteínas pro-cedentes de frutos maduros de una variedad comercial (Fragaria x ananassa, cv. Camarosa) y de una especie silvestre (Fragaria vesca) de fresa. La comparación de estos geles mostró numerosas diferencias tanto cualitativas como cuantitativas.ConclusionesEl análisis de las proteínas seleccionadas por su expresión diferencial entre frutos verdes y rojos, ha permitido la identifi cación de diversas proteínas involucradas en la maduración del fruto de fresa. Con el programa informático PDQuest se han iden-tifi cado 54 proteínas cuyo contenido en frutos ma-duros es superior en más de diez veces al contenido de los frutos verdes. Se han analizado 10 proteínas presentes en frutos verdes y ausentes en frutos rojos de fresa, identifi cándose con éxito el 30% de ellas. Por otro lado, se ha identifi cado con éxito el 53.6% de las 41 proteínas más abundantes en frutos rojos analizadas (21 proteínas ausentes en frutos verdes y 20 proteínas 10 veces más abundantes en frutos rojos). Entre éstas, destacan proteínas relacionadas con la maduración del fruto de fresa, como son una quinona oxidorreductasa, una chalcona sintasa, y una dioxigenasa. PROTEÓMICA • NÚMERO 1 • FEBRERO 2008 63ReferenciasAlm, R., Ekefjärd, A., Krogh, M., Häkkinen, J. et al., Jour-nal of Proteome Research 2007, 6, 3011-3020.Hjernø, K., Alm, R., Canbäck, B., Matthiesen, R. et al., Proteomics 2006, 6, 1574-1587.Saravanan, R., Rose, J., Proteomics 2004, 4, 2522-2532.Zheng, Q., Song, J., Doncaster, K., Rowland, E., et al., Journal of Agricultural and Food Chemistry 2007, 55, 1663-1673.Análisis proteómico de la respuesta temprana al establecimiento bajo condiciones de estrés hídrico en Pinus halepensis MILLAriza-Mateos D1., Navarro R.M.1., Del Campo2 A., Ibáñez A.2. y Jorrín J.V.31E.T.S. Ingenieros Agrónomos y de Montes. Dep. Ingeniería Forestal. Apdo. 3048. 14080 Córdoba. Tel. +34. 957218657, E-mail: oikos2002es@yahoo.es. 2Dep. Ing. Hidráulica y Medio Ambiente. EPSG. UPV. Crta. Nazaret-Oliva s/n. 46730 Grao de Gandía, Valencia. 3Dep. Bioquímica y Biología Molecular. Universidad de Córdoba.ResumenLos climas mediterráneos semiáridos son espe-cialmente limitantes para el establecimiento de repo-blaciones forestales (Ceballos et al., 2004), siendo el défi cit hídrico, asociado a otros factores como las altas temperaturas, el défi cit de presión de vapor o las elevadas radiaciones la causa principal de mortalidad de la planta (Calamassi et al., 2001). Pinus hale-pensis Mill. es capaz de sobrevivir en situaciones de fuerte estrés hídrico siendo una de las especies más utilizadas en los programas de reforestación del sureste español (Pemán y Navarro, 1998).La proteómica, a través del estudio de las proteí-nas presentes en una unidad biológica, bajo condi-ciones ambientales determinadas, constituye un buen indicador del estado fi siológico de la planta (Canovas et al., 2004., Rossignol et al., 2006) y predictor de su respuesta a estrés (Jorge et al., 2006). El objetivo de este trabajo es aplicar la proteómica para el estudio del efecto de la fecha de plantación sobre una repo-blación de Pinus halepensis  en el levante español.Se ensayaron dos fechas de plantación, una temprana (noviembre 2005) y una tardía (enero de 2006). Durante el primer año se  estudió la infl uen-cia de la fecha de plantación sobre las variables supervivencia, crecimiento, potenciales hídricos, capacidad fotosintética a través de la fl uorescencia de la clorofi la y sobre la expresión de proteínas. La extracción se realizó mediante el protocolo de Da-merval (1986), tras la cual se realizó la separación de las proteínas mediante electroforesis bidimen-sional en gel de poliacrialmida al 13%. Los geles resultantes se digitalizaron y analizaron mediante la aplicación informática PD-Quest (Bio-Rad). La fecha de plantación tuvo efecto sobre las variables crecimiento y  potencial hídrico, no siendo notable su infl uencia sobre la supervivencia o la fl uorescen-cia de la clorofi la. Mediante el análisis proteómico se encontraron algunas diferencias a nivel de expre-sión de algunas proteínas que pueden servir como marcadores moleculares de estrés hídrico. Bibliografía Calamassi, R., Della Rocca, G., Paoletti, E., Strati, S. 2001. Ann. For. Sci. 58: 663–672.Cánovas, F.M., Dumas-Gaudot, E., Recorbet, G., Jorrín, J., Mock, H-P., Rossignol, M. 2004. Proteomics 4: 285-298Ceballos, A., Martínez-Fernández, J. Luengo-Ugidos, M.A. 2004. Journal of Arid Environment. 58: 215-233. Damerval, C., De Vienne, D., Zivy, M., Thiellement, H. 1986. Electrophoresis. 7: 52-54Jorge, I., Navarro, R., Lenz, C., Ariza, D., Porras, C. Jorrín, J. 2006. Proteomics. 6: 207-214

Análisis mediante electroforesis bidimensional de las diferencias de expresión proteica producidas durante la maduración del fruto y entre especies cultivadas (Fragaria x ananassa) y silvestres (Fragaria vesca) de fresa

Análisis mediante electroforesis bidimensional de las diferencias de expresión proteica producidas durante la maduración del fruto y entre especies cultivadas (Fragaria x ananassa) y silvestres (Fragaria vesca) de fresa

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