Barderas, María G.

Cuesta, Fernando de la

Darde, Verónica M.

Donado, Alicia

Maroto, Aroa

Padial, Luis R.

Pinto, Ángel G.

Vivanco, Fernando

Álvarez-Llamas, Gloria

Repositorio Institucional de la Universidad de Córdoba

PROTEÓMICA • NÚMERO 1 • FEBRERO 2008 103Obtención de mapas bidimensionales de capa íntima de arteria coronaria humana aislada por microdisección por láserde la Cuesta F1, Alvarez-Llamas G1, Darde VM1, Donado A2, Maroto AS1, Padial LR3, Pinto AG2, Barderas MG4, Vivanco F.11 Departamento de Inmunología. Fundación Jiménez Díaz, Madrid. 2 Servicio de Cirugía Cardiaca. Hospital Gregorio Marañón, Madrid. 3 Servicio de Cardiología. Hospital Virgen de la Salud, Toledo. 4 Laboratorio de Fisiopatología Vascular. Hospital Nacional de Parapléjicos. SESCAM, Toledo.IntroducciónLas complicaciones que se derivan de una obs-trucción coronaria debida a un proceso aterotrombó-tico constituyen una de las causas más importantes de mortalidad en los países desarrollados. El estudio molecular del desarrollo de la placa de ateroma es, por lo tanto, uno de los puntos de mayor relevancia en investigación clínica actualmente. El proteoma del tejido completo de la arteria coronaria con placa de ateroma constituye una compleja mezcla de los proteomas de los diferentes tipos celulares presen-tes en la arteria, y no permite diferenciar el papel de estas células en la patogénesis. Si estudiamos las diferentes capas de la arteria (íntima, media y adventicia) de manera conjunta la expresión protei-ca diferencial debida a procesos de aterosclerosis que tienen lugar en la íntima coronaria se verán enmascarados por el proteoma del resto de capas de la misma. Con objeto de estudiar la expresión proteica en la capa íntima de arteria coronaria por electroforesis bidimensional, aislamos ésta por mi-crodisección con láser. Material y métodos El estudio de la capa íntima de manera aislada fue posible por medio del aislamiento realizado por Microdisección por Láser y Catapultado por Presión (LMPC) que permite aislar áreas de tejido, células sencillas, incluso regiones subcelulares incidiendo con un láser ultravioleta directamente sobre cortes histológicos convencionales (Burgemeister, 2005). Ante la baja cantidad de proteína que se puede ob-tener por esta técnica, empleamos la técnica de elec-troforesis diferencial en gel (DIGE) de marcaje a saturación (Wilson et al., 2005; Sitek et al., 2006), que permite el estudio de proteomas con cantidades inferiores a 5 µg de proteína total.ResultadosSe ha realizado el aislamiento de capa íntima ar-terial humana satisfactoriamente y el acoplamiento de la técnica de DIGE de saturación a la microdisec-ción por láser nos ha permitido obtener por primera vez mapas bidimensionales de capa íntima, algo nunca antes realizado.ConclusionesLa obtención de geles bidimensionales de capa íntima suponen una puerta al análisis proteico dife-rencial en arteria coronaria a diferentes estadios del proceso aterotrombótico, así como frente a otras arterias con menor incidencia de afección ateros-clerótica. Esto, junto con la posibilidad de aislar los diferentes grupos celulares de la íntima, constituyen las perspectivas futuras de nuestro proyecto.BibliografíaBurgemeister R. J Histochem & Cytochem. 2005, 53, 409–412.Wilson KE, Marouga R, Prime JE, Pashby DP et al., Proteomics. 2005, 5, 3851-8.Sitek B, Potthoff S, Schulenborg T, Stegbauer J, et al., Proteomics. 2006, 6, 4337-45.

Obtención de mapas bidimensionales de capa íntima de arteria coronaria humana aislada por microdisección por láser

Obtención de mapas bidimensionales de capa íntima de arteria coronaria humana aislada por microdisección por láser

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Repositorio Institucional de la Universidad de Córdoba