Latorre Glauser, Luis

Repositorio Institucional de la Universidad de Córdoba

11 6 ZOO TECNIA decrece mien tras que la acción repulsiva de los centrómeros aumenra para llegar al máximo en la anafase. Esta es la razón de c.¡ue al separarse cada dos centrómeros determ inen el endereza-miento de la fibra del huso a la cual están unidos. Hemos expuesto estos hechos para deduci r de ellos el papel preponderante que se le asigna a los cenrrosomas y a los· centrómeros en el o rigen de las células cancerosas, mitosis anor-males, etc. Las mitosis c1norrnales, provocadas por mu-chos valiéndose de la colchicina, precioso Ins-trumento de análisis citogenélico, se deben, se-gún LevAN , a que esta sustancia inhibe la divi-sión de los centrómeros y la acción del huso acromático; por eso. al no separarse, los cromo-somas en la rneiosis y las cromáridas en la mi-tosis, duran te la rnetafase, se producen células hi jas con un número de cromosomas igual a 4n (retrnploides), Bn (octoploides), o con algunos r epetidos (poliploldes). A. LevAN ha visto en Aflium células que presentaban 500 pares de cromosomas (siendo su número inicial 12) bajo la influencia perturbadora de la colchicina sobre el mecanismo regulador de las mitosis. P. v N. Ü AVA.UDAN (sus trabajos han sido efectuados en el Laboratorio de Genética de la Escuela Nacional veter inaria de Alforr, y J. Du-tlAND creen que la ~cción rnlloinhibidora de la colchlcina. clsi corno la del hidrato ae cloral , frío, rayos X, acenafreno, ere. , se ejerce sobre el huso e;romá lico exclusi vamente. En prepara-ciones de raíces de trig-o tratadas por acenafteno, fijadas m<:di<Jnte el !':avaschine y teñidas me-diante el carmín acético no se ve el huso acro-mático, y en las fijadas con el liquido de Regaud comprobaron la existencia de una masa fusorial , dentro d~ la cual yacen los cromosomas, que rechaza a las vacuolas y rnitocondrias hasta su periferia. E~ta misma repulsión de las mi tocon-drias .se ob.serva en los husos normales fiiado.s en Helly o en Re¡¡aud. Esta sustancia central seria la del huso sin disponerse en fibras; lo prueba el hecho de que los !ljadores mirocon-driales demuestran la existencia de una .sustan-cia aná loga a la del huso y el desorden con que se ver ifica la marcha de lo~ cromosornils parali-zados hacia los polos. Estd acción no se ejerce, según estos autores, sobre el citoplasma, sino provocando la desnatu raliZisción del huso. Si tenemos en cuenta que las sustancias can-cerfgenas provocan efectos análogos, véase lo que se ha progresado en el conocimiento del origen de la célula canccro~a desde la époc~ en que BA.IW, D EEOVE y MARSHU. afirmdban que una anarqufa celular determinaba una multipli-cación anormal de cierras células, que se levan-taban contra el organismo llevando una vida desordenada. Córdoba 14 de febrero de 1944. Procedimiento rápido de deshidratación Traba jo del Labarolorio de Histología de la Fa-cultad de Veterinaria de Córdoba. (atedrálico, Dr. Germán Soldaño Sidlia. POR LUIS LA TORRE GLAUSE~ Alumno ayudanlt de Laboralorio. La guerra ha interesado a la industria en lo· das sus ramas, determinando la careslla de ma-terias primas . .Se carece de productos esenciales y hay que acudir a los sustitulos, que a veces se valorizan como mejores, o bien a economizar en el grado máximo los productos que antes se usa-ban sin medida. El procedimien to de deshidra tación que pre-sentamos a estudio. economiza gran canridad de alcohol , en especial de absoluto, cuyo precio es bastante elevado en el mercado. Entre otras ven-taj<'!s descuelld una rdpidisima deshidratación, que reduce al mlnimo el tiempo empleado en hacer un diagnóstico, evilando además el dete-rioro de las pequef\as biopsias al trasladarlas de unos recipientes a orro3. Estas ventajas son las que comentamos y exponemos en las conclusio-nes de este arriculo. E l procedimiento está basado en el de A. DE· LAUNA. Y, el cual ha consrruído un aparato (Fig. 1), que consiste en un recipi~nte de cristal, con una -ZOOTECNIA 117 estrangulación central, sobre la que lleva u n ~: tela metálica inr xidable. La necesidad de ser in-oxidable se debe a q•te los óxidos que se des-prenderían al llegar el agua de consti tución de los t~jidos a los melales oxidables atacar!an la pieza a deshidratar. Nosotros hemos sustituido con ventaja este aparato por un frasco Borre! 0 por un tubo de ensayo corriente, porque con éstos, especial-mente con el último, se economiza más 11lcohol. En el interior de ellos colocamos una serie de tubilos hechos de varilla de vidrio hueca, todos ellos de una longitud aproximada a la mitad de la aiJUra del recipien te: en el frasco de Borre! los lubitos llev~n una escotadura en su parle infe-rior, para facililílr la perfecta difusión del agua que cae a la parte in ferior del recipiente. Los aparatos deben estar obturados por un ta~ón de vidrio o de corcho, para evitar la hidratación del alcohol del recipiente por el Vdpor de agua at-mosférico. 3e pondrá en el recipiente una cantidad de alcoho l absoluto suficiente para recubrir los tu-hilos, ten iendo gran cuid~do, una vez puesto a funcionar el aparato, de no darle golpes ni cam-biarlo de lugdr, porque esto originaría una posi-ble mezclil del dlcohol y del agua, con la consi-!fUienle inu ti litación. En el procedimiento corrienle de deshldrala-ción las piezas se encuenlran en lc:s peores con-diciones para perder su agua de consliluclón, pues como esi<Ín en el fondo, el agua desprendi-da se queda a la a hura de las piezas al no poder descender a otras capas inferiores, siendo pre· ciso agllar de vez en cuanrlo el frasco para que el agua del fondo se mezcle con el alcohol, ope-ración que generalmente no se rea liza. El fu ndamento del mé1odo estriba en la di fe-rente densidad del alcohol y del agua. La densi-dad del agua (1,00) es superior a la del alcohol, generalmenle et!lico (0,80), que flo ta sobre el agua si los dos lfquidos se superponen con cui-dado. De esto se deduce la precaución de nomo-ver el recipiente deshidratador, pues de lo con-trario ambos líquidos se mezclarfan, po r la gran facilidad con que pueden hacerlo. Experimental-mente puede verse cómo una columua de agua desciende a través de una zona de alcohol abso-lu to sin mezclarse con él. P11ra ello se disuelve en el alcohol una sustar.cia que sea insoluble en el agua, por ejemplo el S udán 111; con una pipe-ta pequeña se loma agua y se deja salir con cui -dado un pequeño chorro en la parle super ior del alcohol, que tendrá un color rojizo. El agua caerá y se deposi lará en la par te in ferior conser-vándose incolora. De modo análogo . coloc11ndo un te jido, im-pregnado de agua por na turaleza, el agua de constitución , por su mayor densidad tenderá a ir al fondo del recipiente, siendo sustituída por el alcohol , siempre absoluto, de 111 parle superior . La colt:mna de agua que cae puede ser observa-da previa fijación con el l iquido Bouin, debido a que dicha columna adquiere coloración amari-llen la por el ácido plcrico. La deshidralación se suspende en el momento en que cesa de caer di-cha columna. Sin embargo, este indicador pron-to se inutiliza por la facilidad con que el alcohol se colorea de amarillo al di~olverse el ácido pf-crico en él. Siguiendo este método hemos deshidratado perfec111 y rápidamente 20 piezas de li roides de vaca, con un peso total de D,6 gramos, en 40 c. c. de alcohol absoluto, correspondiendo por pieza 2 c. c. de alcohol; cantidad muy reducida si se considera lo que suele gastarse ordin ariamen te en alcoholes de 70°, 90° y en los dos pases, por lo menos, de absolu to. Pero trabe jando en estas condiciones, el <Jgua de la perle in ferior se dis-pone hori zonta lmente a través de las escotadu -ras de los tubos, aumentando su cantidad a me-dida que se deshidratan las piezas, y llega un momento en que éstas no pueden deshidra tarse bien. El gasto de alcohol puede reducirse aún más voniendo en el tubo une sustenci<l que absorba 118 ZOOTECN I A o reaccione con la columna de ag ua desprendi-da. E n el grupo de las susrar.cias absorbenTes se encuentran el sulraro de cobre . el carbonara sódico anhidro , ere. E n el grupo de las sustan-cias reaccionantes se incluye el carburo cálci-co (2), una molécula del cual es capaz de reac-cionar con dos de agua, pasando el calcio por un estado in termedio de óxido de c11 l: e~ e11 + 2H,O _ ,. C11 (OH), + CH: CH. e , Ca + H~O ~ CaO + CH: C I I ; CaO + li ,O ~ Ca (OH)~ . quedando como productos de la reacción hidró-xido cálcico, que cae al fondo del rec ipien te, y e tino o acetileno que se desprend e en fo rma ga-seosa. Una cantidad de 64 g ramos de Cilrburo cálcico (una molécula gramo) es capllz de reac-cionllr con 56 g r11mos de agua (~ moléculas gra-mo); trc~bajando con carburos comerciales, 10 g ramos d e ésre reaccionan con 4 c. c. de agua . Para esre procedimienTo de deshidralación usomos pr imeramenre un tubo de ensayo en du:s bdteas, la superior para las piezas, y lil in ferio r para el carburo. E l n úmero de piez.as deshidra-tadas con .este ilparato es mucho mayor. con la consiguienTe redt;CCión de alcohol, pudiendo uti-lizarse éste casi lntegramen te ya que el apil raro puede recargarse de carburo cálcico hasta que el sedimento de hidróxido alcance el soponeme-tálico. Prácticamen te este aparato liene el inconve-niente de que al d esprenderse el acetileno se remueve el alcohol , provocando la mezcla con el agua desprendida de la pieza. Para evitarlo darnos salida al etino por un tubo independiente del que contiene la pieza a deshidr<lt<l r. Ui figu-ra 2, repr esenta el nuevo <lpararo. L a piez11 se encuen tro en un sopor te metálico inoxid11ble (A) , situado en un tubo Ia ter11!, acodado y sold11do con el recipiente (B) , en cuya parte inferior se encuen tra un cesto (C), de reJa melálica tupida, que sost iene los fragmentos de carbu ro cálcico. Más abajo se encuentra un ensanchamiento ci -lfndrico (D), en el que se va depositando el hidróxido cálcico y que además sirve de ba.se de sustentación. Cada uno de los dos tilpones de corcho (E) que cierran el <lpar<lto lleva uno escotadura para dar paso al illambre encargodo de sosrener el cesro correspondiente. El orificio del rubo rec to (B) Ji ene otra misión; dar salida al acer ileno. El fu ndamento dl su funcionamienTo es pa-recido al de los an teriores; el agua desprendida resbala por la acodadura y reacciona con el car-buro en el tubo B. El acerileno se desprende en forma de pequeñas burbujas, y el hidróxido cál-cico, por s u mayor densidad, desciende al reci-pie~r te in ferior, calculado para 40 cm" de esre producto. Para usar el aparalo basta llenarlo de al-cohul hasta un cm. aproximadamente por enci-ma del cesto de las piezas (unos 60 c. c. en total); al mismo tiempo se dejan caer unos !ro· citos de ca ;buro en el Jubo B. Hzcho esto el Clparato está en condiciones de funcionar, al d eposi tar la pieza o piezas con cuidado, y desde que se use la primera vez se procurará nomo· verlo , y11 que entonces no sólo se mezclaría el 11lcohol con el 11gua, sino que parte del sedi-mento de hidróxido cálcico quedaría en su:.pen· sión penetrando las partículas de éste en la pieza a de~hidrarar y apareciendo más tarde en' los cortes. Después de deshidratar varias pieus el car· bu ro se va consumiendo, por lo que es preciso aiiadir más, lo que puede hacerse fácilmente. S in embargo después de un gran número de deshidra taciones el recipiente inferior se llena de hidróxido cálcico, siendo preciso extraer el alcohol (que se vuelve a usar una vez fil trado), sac11r el sedimento, l impiar bien el aparato, se-pz ZOO TEC N I A 119 cariJ y volver a cargarlo de alcohol. Es de recomendM que el alcohol absolu lo que se vaya a u1ihzar se ponga anles en un frasco en pre-sencia de Cllrburo. ya que siempre conliene lrazlls de agull , que se eliminarían en el aparaio con la consiguienle formación de precipilado, lo que disminuye el rendimienlo . El gaslo leórico de lllcohol con esle llparlliO es reducidísimo, tlln sólo el que se llevaría la pieza en suslilución de su agua de constiJución; pero en la práclica no ocurre así, ya que el sedi· menlo de hidróxido lleva consigo una cierla can lidad de alcohol. Los resul1ados han sido baslanle salisfoclo-rios. Por lérmino medio se han deshidraJado con 60 c. c. de alcohol, de 55 a 60 piezas, lle-gando en ocasiones a 70 y en todas ellas la deshidraJación fué perfecla. Las piezas Uliliza-dlls proceden de hfgado del lelo de vaca. Pesa-ron un 1o1al de 10 gr. y arrojaron un con lenido en agua del 85 °/0 , con un volumen Jolal de 10 cm', de Jo que se deduce que se redujo el gaslo de alcohol por pieza a menos de un c. c. La rllpidez con que se verifica la deshidrala-ción es otra de llls princlp~ Jes venlajas del mé· lodo, pero, ;>llrll sacJr el máximo rendimiento a esta cualidlld, las piezas no deben ser de un espesor superior a 2 o 5 mm.: su supuficie no imporla. Para las piezas del espesor mencionado basla con dos horas de deshidralacion, pero el tiempo puede variar con el espesor de la pieza y la fccilidad de penerración por el alcohol. El liempo mfnimo para piez1s de 1, 5 mm. de espe-sor puede 1educirse a 40 minutos. Las propiedades lin loriales de los lejidos, al de~h idratarse por esle procedimiento, no sufrtn la menor alleración, como hemos pedido obser-va r después d~ usar Jos más corrientes proce-dimienJos de coloración (hemlllum·eosina ; Caja!; Mallor)•; Giemsa; Van Gieson; etc.); las prepa-raciones leñidas por el método de hema'um-eosina observadas un llno después de ejecuta-das no han sufrido la menor al!eración en su coloración. El aparalo de deshidratación, sobre todo en sus primeros mod~los, liene aplicación en la decalcificación, puesJo que las sales cálcicas que impregnan Jos lejidos, son más pesadas que los líquidos que se emplean en la decalcifi· cación. Enlre los inconvenienles figura la moleslia de recargar de cMburo y sobre Jodo la de lim-piar el sedirnen lo de hidróxido cálcico; pero es preferible el cambio conlínuo de recipienles. en el procedimiento corriente de deshidratación, que incluso puede ser un peligro cua ndo se 1ra ta de pequeñas biopsills insuslilulbles. Otro inconveniente es lll posible diserr.inl!ción de hi-dróxido en el a lcohol , que puede penetra r en la pieza, pero puede evirarse guardando el deshi-dratildor de las sacudidas, y en caso de c. ue se produzca se dejará reposar el aparato 24 o 48 horas, liempo sufi ciente para que las partículas sedimen ten y quede limpio el alcohol. Conclusiones 1. 0 En el procedimiento corriente de deshi-driltación las piezas se encuen tran en las peores condiciones, porque, al estar en el fondo del recipiente, el agua que se desprende de ellas impide la per fecla deshidralaclón. 2." De las piezas suspendidas d.! la p!!rle superior del alcohol se desprende una columna muy rica en agua, y esle produclo, resullan te del desprendimiento se mezcla di fícilmen te con el alcohol salvo que un movimien to brusco fac i-lite dicha mezcla. 3. • El gasto de alcohol absoluto usando este procedimienlo de deshidra tación puede re-ducirse a :! c. c. por pieza de 1 cm. ' , y en mu-chas ocasiones a la mitad, al reaccionar el agua desprendida con el cl!rburo clilcico. 4 • Se disminuye conslderablemenle elliem-po empleado en hacer una deshidra tación ya que corrientemen le no dura más de dos horas, pu-diendo reducirse a 40 minutos. 5. • Las propiedades lin loriales de los teji-dos. así como la conservación de las coloracio-nes que hemos ensayado, no se alteran usando esle procedimien to de deshidratación. Bibliografía DUA""A\', A. La déshldmaclon méthodiquc dans lo ttchnique hlstolo;¡lquc. Bu/l. á'H osr. opp. 17,246 (1.940). hRREK, D. Manual de Tfcnlca Hi.rol6gic•. p~g. 11 7 y 127. Barcelona 1.93 J. 

Procedimiento rápido de deshidratación

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