It is characterized a sample of Bovino Criollo Argentino cattle with a panel of eight microsatellites. It is detected a number of alleles between 2 and 7. The values of Heterocigosity by locus are between 0.46 for HEL-1 and 0.72 for BM-1824 and the mean of Heterocigosity is 0.58.Se caracteriza una muestra de ganado Bovino Criollo Argentino con un panel de ocho microsatélites. Se detecta un número de alelos entre 2 y 7. Los valores de Heterocigosidad por locus están entre 0,46 para HEL-1 y 0,72 para BM-1824, la Heterocigosidad media es de 0,58

Género, Enrique Rubén

Rodero Franganillo, Antonio

Rumiano, F.J.

Vega-Pla, J.L.

Zamorano Serrano, M.J.

Archivos de Zootecnia

Repositorio Institucional de la Universidad de Córdoba

Arch. Zootec. 47: 273-277. 1998.CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE GANADO BOVINO CRIOLLOARGENTINO UTILIZANDO MICROSATÉLITESGENETIC CHARACTERISATION OF BOVINO CRIOLLOARGENTINO CATTLE USING MICROSATELLITESZamorano, M.J1., E.R. Género2, A. Rodero1, J.L. Vega-Pla3 y F.J. Rumiano2.1Departamento de Genética. Facultad de Veterinaria. Avenida de Medina Azahara s/n. 14005-Córdoba.España.2Departamento de Genética. Facultad de Ingeniería y Ciencias Agrarias. Universidad Nacional Lomas deZamora. Ruta 4, km 2 Llarallol, 1836 Buenos Aires. Argentina.3Laboratorio de Grupos Sanguíneos. Servicio de Cría Caballar. Apartado Oficial Sucursal 2. 14071-Córdoba. España.PALABRAS CLAVE ADICIONALESRecursos genéticos. DNA. PCR. Heterocigosi-dad.ADDITIONAL KEYWORDSGenetic resources. DNA. PCR. Heterocigosity.RESUMENSe caracteriza una muestra de ganado Bo-vino Criollo Argentino con un panel de ochomicrosatélites. Se detecta un número de alelosentre 2 y 7. Los valores de Heterocigosidad porlocus están entre 0,46 para HEL-1 y 0,72 paraBM-1824, la Heterocigosidad media es de 0,58.SUMARYIt is characterized a sample of Bovino CriolloArgentino cattle with a panel of eightmicrosatellites. It is detected a number of allelesbetween 2 and 7. The values of Heterocigosityby locus are between 0.46 for HEL-1 and 0.72 forBM-1824 and the mean of Heterocigosity is 0.58.INTRODUCCIÓNEl Bovino Criollo Argentino es elresultado de varios cientos de años deselección natural sobre un abanico derazas con un importante tamaño efec-tivo de población fundadora. Está con-siderado como descendiente directodel ganado tipo ibérico llevado por losespañoles a zonas territoriales de loque hoy es Argentina y otros paísesIberoamericanos. Alderson (1989) se-ñala que esta raza podría tener susascendientes en la raza Berrenda enNegro y Quinteros et al. (1980) afir-man que aún conserva un granprimitivismo. Hay una población quefue llevada a la Patagonia por terrate-nientes de la zona con ayuda de losindios Tehuelches. Actualmente mu-chas de estas propiedades constituyenel actual sistema de Parques Naciona-les donde este ganado se ha mantenidoPOSTERArchivos de zootecnia vol. 47, núm. 178-179, p. 274.ZAMORANO ET AL.asilvestrado. En la década de los 80pesaba una orden de exterminio deesta población por considerarlo no au-tóctono, aunque esta orden fue revo-cada posteriormente. En los inicios delos 90 comienzan a conformarse caba-ñas fuera de los parques pero se con-trola su manejo mediante un convenioentre la Asociación Argentina de Ga-nado Criollo y la Universidad de Lo-mas. Uno de los principios en que sebasa este control es que losapareamientos de la raza tienen queser lo menos dirigidos posible, y nodebe de haber patrones de selecciónartificial.Hay un gran afán por parte de laAsociación citada y la Universidad deLomas para elaborar planes de con-servación de recursos genéticos quepermitan mantener las poblacionesactuales en estado de pureza evitandola influencia de las razas de alta pro-ducción.Una de las herramientas de que sedispone para la investigación genéticaes la caracterización de microsatélitesdel DNA. Se trata de secuencias quepresentan, por lo general, un elevadopolimorfismo y que proporcionan graninformación de la diversidad genética,tanto dentro de poblaciones como en-tre ellas.La justificación de este trabajo sedebe al interés en contribuir a un cono-cimiento genético más amplio de laraza Bovino Criollo Argentino y al es-tablecimiento de una base que permitala comparación de la misma con otrasrazas actuales cuyos ancestros pudie-ron haber participado en su origen.El objetivo es caracterizar unamuestra de ejemplares de esta razacon un panel de ocho microsatélites.Calcular las frecuencias alélicas, hete-rocigosidad por locus y media de laheterocigosidad, de forma que permitacomparar dicha información con laobtenida en otras poblaciones bovinascon los mismos marcadores genéticos.MATERIAL Y MÉTODOSSe tipifican 34 individuos de razaBovino Criollo Argentino procedentesTabla I. Microsatélites de ganado vacuno. (Cattle microsatellites).Denominación Cebadores directo y reverso Tamaño ReferenciasBM.4621 CAAATTGACTTATCCTTGGCTG TGTAACATATGGGCTGCATC 140-160 Bishop et al., 1994ETH225 GATCACCTTGCCACTATTTCCT ACATGACAGCCAGCTGCTGCTACT 140-156 Fries et al., 1993HEL5 GCAGGATCACTTGTTAGGGA AGACGTTAGTGTACATTAAC 161 Kaukinen et al, 1993HEL1 CAACAGCTATTTAACAAGGA AGGCTACAGTCCATGGGATT 110-102 Kaukinen et al., 1993BM1824 GAGCAAGGTGTTTTTCCAATC CATTCTCCAACTGCTTCCTTG 178-190 Bishop et al., 1994ILSTS005 GGAAGCAATGAAATCTATAGCC TGTTCTGTGAGTTTGTAAGC 181-187 Brezinsky et al., 1993ETH152 TACTCGTAGGGCAGGCTGCCTG GAGACCTCAGGGTTGGTGATCAG 198-204 Fries et al., 1993BM-143 ACCTGGGAAGCCTCCATATC CTGCAGGCAGATTCTTTATCG 90-120 Bishop et al., 1994Archivos de zootecnia vol. 47, núm. 178-179, p. 275.TIPIFICACIÓN DE MICROSATÉLITES EN GANADO BOVINO CRIOLLO ARGENTINOde Lomas de Zamora (Argentina) se-leccionados al azar.Los ocho marcadores que se inves-tigan (tabla I) se encuentran dentro delos recomendados por el grupo de ex-pertos de la Sociedad Internacional deGenética Animal para la caracteriza-ción de razas bovinas.Se procede a la extracción de DNAa partir del folículo piloso mediante unadigestión de las proteínas con la enzi-ma Proteinasa K y una purificacióncon fenol-cloroformo, utilizando paraello el protocolo del Laboratorio delInstitute of Zoology de Londres.Cada uno de los microsatélites se-leccionados para el estudio han sidoevidenciados mediante la técnica de lareacción en cadena de la polimerasa(PCR) descrita por Saiki et al., en1985. Se lleva a cabo mediante untermociclador MJ Research® en unvolumen final de 25 ml con  dATP,dGTP, dCTP y dTTP 25mM cada uno,cebadores directo y reverso específi-cos de cada  locus 0,4mM, Taq DNApolimerasa (1U/reacción) en un tam-pón MgCl2 25mM, KCl 50mM, Tris-HCl a pH 9,0 10mM, Triton X-100 0,1p.100 y 50 ng de DNA purificado. Sesomete la reacción a 35 ciclos con unafase de desnaturalización de 30seg a94°C, otra fase de acoplamiento decebadores de 30seg a 55°C y unatercera fase de síntesis de 30seg a72°C cada uno.Posteriormente se someten los pro-ductos de la amplificación a una elec-troforesis en gel de poliacrilamida (19:1)desnaturalizante (Urea 8M), y se tiñecon plata según el protocolo de Vega-Pla (1996).Se calculan los tamaños de los ale-los mediante el ajuste a una curva deregresión desarrollada a partir de lasdistancias de migración de fragmentosde talla conocida.Para el cálculo de las frecuenciasalélicas se procede al recuento directode los alelos y como medida de lavariabilidad se calcula el grado de he-terocigosis mediante la fórmula pro-Tabla II. Alelos (A) y frecuencias alélicas (f)en 8 microsatélites en una muestra de BovinoCriollo Argentino. (Alleles and Alelic frecuencies in 8 microsatellites in a Bovino Criollo Argentinosample).ILSTS005 ETH-225 ETH-152 BM-143 BM-4621 BM-1824 HEL-1 HEL-5A f A f A f A f A f A f A f A f183 0,5 143 0,53 198 0,18 93 0,07 140 0,28 180 0,24 102 0,60 154 0,01185 0,5 149 0,10 200 0,60 105 0,55 146 0,10 182 0,13 110 0,12 156 0,60151 0,21 202 0,15 107 0,01 148 0,62 184 0,35 112 0,28 162 0,24153 0,16 204 0,07 113 0,06 190 0,28 164 0,11115 0,15 166 0,01117 0,01 168 0,03119 0,15Archivos de zootecnia vol. 47, núm. 178-179, p. 276.ZAMORANO ET AL.Tabla III. Heterocigosidad por locus (H) en 8 microsatélites en una muestra de BovinoCriollo Argentino. (Heterocigosity (H) in 8 microsatellites in a Bovino Criollo Argentino sample).ILSTS005 ETH-225 ETH-152 BM-143 BM-4621 BM-1824 HEL-1 HEL-5H 0,50 0,64 0,58 0,67 0,53 0,72 0,46 0,57puesta por Nei y Roychoudhry (1974).RESULTADOS Y DISCUSIÓNEn la tabla II se recogen las fre-cuencias alélicas obtenidas para losdiferentes marcadores y en la tablaIII las heterocigosidades por marca-dor. Se observa que en todos los casosse detecta polimorfismo. Hay que des-tacar que el microsatélite BM-143 pre-senta siete alelos pero no tiene el ma-yor grado de heterocigosidad, sin em-bargo el sistema BM-1824 con sólocuatro alelos supera ligeramente laheterocigosidad calculada para el sis-tema citado anteriormente; esto se debea que los sistemas más informativosson aquellos que teniendo un númerosuficiente de alelos poseen ademássus frecuencias equilibradas, así, aúnsiendo menor el número de alelos, unmarcador puede tener mayor valor deheterocigosidad. Algo similar ocurre,en el extremo opuesto, para los siste-mas ILSTS005 y HEL-1.Hemos encontrado el mismo núme-ro de alelos en los marcadoresILSTS005, ETH-225 y BM-1824 enestudios realizados en la raza bovinaBerrendo en Negro por Zamorano etal. (1997). Los microsatélites BM-143y HEL-5 mostraron mayor polimorfis-mo en la población de ganado criolloque en la anteriormente citada, mien-tras que los marcadores ETH-152, BM-4621 y HEL-1 presentaron menor nú-mero de alelos.Brezinsky et al. (1993) estudian elmicrosatélite ILSTS005 para el quedescriben 4 alelos y Arranz (1996)encuentra sólo dos en  muestras de lasrazas Avileña, Negra-Ibérica ySayaguesa. No se han encontrado da-tos de frecuencias alélicas en otrasrazas bovinas españolas para el restode marcadores.La heterocigosis media de la mues-tra calculada a partir  de lasheterocigosidades por sistema es de0,58 y como medida de la variabilidadgenética, tiene un valor medio compa-rada con los estudios realizados porBates et al. (1996) en un total de 22microsatélites, cuyos valores estáncomprendidos entre 0,47 y 0,80 entrece razas evaluadas. Y muy similaral estimado por Zamorano et al. (1997)en la raza Berrenda en Negro con 15marcadores que resultó ser de 0,6.Estos resultados permiten concluirque los microsatélites seleccionadoscontribuyen al conocimiento genéticode la raza Bovino Criollo Argentino enigual medida que lo hacen en otrasrazas y su utilidad se verá incrementadacuando se tipifiquen otras poblacionescon estos mismos marcadores que per-mitan efectuar pruebas comparativas.Archivos de zootecnia vol. 47, núm. 178-179, p. 277.TIPIFICACIÓN DE MICROSATÉLITES EN GANADO BOVINO CRIOLLO ARGENTINOBIBLIOGRAFÍAAlderson L., 1989. The Chance to survive. A.H.Jolly Ltd (edit) Northamptonshire.Arranz, J.J. 1994. Tesis Doctoral. Universidad deLeón.Bates, S., C. Peterson-Knabe, T. Holm, H. VanHaeringen, K. Lange, J. Ziegle et al. 1996.Exclusion probabil it ies of 22 bovinemicrosatell ite markers in fluorescentmultiplexes for automated parentageverification. PE Applied Biosystems.Bishop, M.D., S.M. Kappes, J.W. Keele, R.T.Stone, S.L.F. Sunden, H.A. Gregory et al.1994. A genetic linkage map for cattle.Genetics, 136: 619-639.Brezinsky, L., S.J. Kemp and A.J. Teale. 1993.ISTS005: a polymorphic bovine microsatellite.Animal Genetics, 24: 73.Kaukinen, J. and S.L. Varvio. 1993. Eightpolymorphic bovine microsatellites. AnimalGenetics, 24: 148.Nei, M. and A.K. Roychoudhry. 1974. Samplingvariance of heterozygosity and geneticdistance. Genetics, 76: 379-390.Quinteros, I.R., W.S. Miller, E.D. Tejeda, M.A. Poliand A.A. Ruiz. 1980. Investigacionesinmunogenéticas en el bovino Criollo Argen-tino-Marcadores genéticos. Analecta Vete-rinaria,  XII: 37-60.Saiki, R.K., D.H. Gelfand, S. Stoffel, S.J. Scharf,R. Higughi, G.T. Horn, et al. 1988. Primer-directed enzymatic amplification of DNA witha thermostable DNA polymerase. Science,239: 487-491.Vega-Pla, J.L. 1996. Tesis Doctoral. Universidadde Córdoba.Zamorano, M.J., J. Ruiter, A. Rodero y J.L. Vega-Pla. 1997. I Congreso Nacional de la SociedadEspañola de Recursos Genéticos Animales.Córdoba. Diciembre. 1997.

Genetic characterisation of bovino criollo argentino cattle using microsatellites

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